Komórki NCI-H460 – badania nad rakiem płuc w oparciu o dane dotyczące linii komórkowej NCI-H460

Informacje dotyczące hodowli komórek NCI-H460

Aby zapewnić prawidłową obsługę i utrzymanie linii komórkowej NCI-H460, należy zapoznać się z poniższymi kluczowymi informacjami. Znajdą się w nich dane dotyczące czasu podwojenia komórek NCI-H460, pożywki hodowlanej NCI-H460 oraz podstawowych procedur hodowli komórek raka płuca NCI-H460.

Kluczowe informacje dotyczące hodowli komórek NCI-H460

Czas podwojenia:

Czas podwojenia komórek NCI-H460 wynosi około 33 godzin.

Komórki przylegające czy w zawiesinie:

Komórki raka płuc NCI-H460 są komórkami adhezyjnymi.

Współczynnik podziału:

Zalecany współczynnik podziału dla linii komórkowej NCI-H460 wynosi 1:2 i 1:4. Po usunięciu starej pożywki komórki przylegające przepłukuje się 1 x buforem fosforanowo-solnym. Następnie komórki inkubuje się z roztworem do pasażowania Accutase przez 8 do 10 minut w temperaturze otoczenia. Rozdzielone komórki zawiesza się ponownie w pożywce hodowlanej i odwirowuje. Zebrane komórki ponownie zawiesza się i przelewa do nowej kolby w celu dalszej hodowli.

Pożywka wzrostowa:

Jako pożywkę hodowlaną dla linii NCI-H460 stosuje się RPMI 1640. Uzupełnia się ją 10% surowicą płodową bydlęcą, 2,1 mM stabilną glutaminą oraz 2,0 g/l NaHCO₃. Pożywkę należy wymieniać 2–3 razy w tygodniu.

Warunki hodowli:

Hodowle NCI-H460 utrzymuje się w temperaturze 37°C w nawilżanym inkubatorze z ciągłym dopływem 5% CO₂.

Przechowywanie:

Komórki raka płuc NCI-H460 można przechowywać w fazie gazowej ciekłego azotu lub w temperaturze poniżej -150°C w elektrycznej zamrażarce ultra-niskotemperaturowej w celu długotrwałego przechowywania.

Proces zamrażania i pożywka:

Do zamrażania i przechowywania komórek NCI-H460 stosuje się pożywkę CM-1 lub CM-ACF. Aby zapewnić maksymalną żywotność komórek, zaleca się stosowanie metody powolnego zamrażania.

Proces rozmrażania:

Zamrożone komórki NCI-H460 rozmraża się w podgrzanej wcześniej łaźni wodnej (o temperaturze 37°C) przez 40 do 60 sekund, aż pozostanie niewielka grudka lodu. Do rozmrożonych komórek dodaje się świeżą pożywkę i odwirowuje w celu usunięcia składników pożywki zamrażającej. Zebrany osad komórkowy ponownie zawiesza się, a komórki przenosi się do nowych kolb zawierających pożywkę do hodowli. Przyczepienie się komórek NCI-H460 do powierzchni kolby może zająć prawie 24 godziny.

Poziom bezpieczeństwa biologicznego:

Komórki raka płuc NCI-H460 są obsługiwane i hodowane w laboratoriach o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1.

Opublikowano: 2023 | Ostatnia aktualizacja: maj 2026

Zalety i wady komórek NCI-H460

NCI-H460 to szeroko stosowana linia komórkowa w badaniach nad rakiem płuc. W niniejszej sekcji omówiono ogólne zalety i wady komórek raka płuc NCI-H460.

Zalety

Zalety linii komórkowej NCI-H460 raka płuca niedrobnokomórkowego to:

• Pochodzenie nowotworu

  Linia komórkowa NCI-H460 pochodzi od pacjenta z wielkokomórkowym rakiem płuca i reprezentuje ten konkretny typ nowotworu. Komórki te są wykorzystywane jako model do badań nad biologią raka płuca oraz opracowywania nowych i skutecznych metod leczenia. Komórki NCI-H460 mają potencjał nowotworowy i można je wstrzykiwać myszom z niedoborem odporności w celu stworzenia modeli nowotworowych in vivo do badania wzrostu i rozwoju nowotworu oraz skuteczności potencjalnych leków.

• Wysokie tempo proliferacji

  Linia NCI-H460 wykazuje wyższe tempo wzrostu niż inne linie komórkowe niedrobnokomórkowego raka płuca, takie jak A549. Ta zaleta zwiększa ich dostępność i pomaga badaczom w przeprowadzaniu powtarzalnych i wymagających szybkiej reakcji eksperymentów.

Wady

Wady związane z komórkami raka płuca NCI-H460 to:

• Jednorodność

  Komórki NCI-H460 są jednorodne, ponieważ zostały pozyskane z guza jednego pacjenta. W związku z tym na ogół nie wykazują złożoności i heterogenności obserwowanych w guzach pacjentów.

Zastosowania badawcze komórek NCI-H460

Komórki raka płuca NCI-H460 są szeroko wykorzystywane w badaniach dotyczących raka płuca. Oto niektóre z ważnych zastosowań badawczych komórek NCI-H460:

• Badania nad rakiem płuc: Komórki NCI-H460 stanowią nieoceniony model do badania mechanizmów komórkowych i molekularnych związanych z rozwojem, wzrostem i przerzutami nowotworu. Ponadto są one wykorzystywane do badania kluczowych szlaków sygnałowych, celów molekularnych oraz różnych mutacji genetycznych związanych z progresją raka płuc. Przeprowadzono szereg badań na komórkach NCI-H460 w celu skutecznego zbadania tych czynników. W badaniu przeprowadzonym w 2019 roku wysunięto hipotezę, że nadekspresjonowana nuklearna, wszechobecna kazeina i substrat kinaz zależnych od cyklin (NUCKS) bierze udział we wzroście komórek nowotworowych poprzez regulację szlaku sygnałowego PI3K/AKT [1]. Podobnie w badaniu in vitro i in vivo wykorzystano komórki NCI-H460 do zbadania roli genu eIF4E. Wyniki wykazały, że gen eIF4E bierze udział we wzroście raka płuc i angiogenezie, a jego celowanie może posłużyć do opracowania obiecujących leków przeciwnowotworowych [2].
• Odkrywanie i opracowywanie leków: NCI-H460, ludzka linia komórkowa raka płuc, jest szeroko stosowana w badaniach nad odkrywaniem i opracowywaniem leków. Naukowcy wykorzystują te komórki do badania toksyczności i skuteczności nowych kandydatów na leki, terapii celowanych oraz metod leczenia ukierunkowanych głównie na mutacje genu KRAS w komórkach NCI-H460. W badaniu przeprowadzonym przez Haoyue Hu i współpracowników w 2023 r. wykorzystano komórki NCI-H460 do zbadania działania przeciwnowotworowego leku anlotinib. Wyniki wykazały, że anlotynib częściowo wpływał na wzrost komórek raka płuca z mutacją KRAS poprzez hamowanie kaskady sygnałowej MEK/ERK [3]. Podobnie, związek fenolowy, kwas karnozowy, został przebadany pod kątem działania antyproliferacyjnego i proapoptotycznego z wykorzystaniem komórek NCI-H460 [4].
• Oporność na leki: Linia komórkowa NCI-H460 idealnie nadaje się do badania mechanizmów oporności raka płuca na leki. Naukowcy wykorzystują te komórki do opracowywania modeli oporności na leki w celu identyfikacji genów, czynników molekularnych i szlaków sygnałowych leżących u jej podstaw. Na przykład w jednym z badań wyhodowano komórki NCI-H460 oporne na pemetreksed – wielocelowy środek antyfolianowy – w celu zbadania podstawowych mechanizmów molekularnych oporności na pemetreksed w komórkach niedrobnokomórkowego raka płuca [5].

Publikacje naukowe dotyczące linii komórkowej NCI-H460

Oto kilka interesujących publikacji naukowych dotyczących linii komórkowej raka płuca NCI-H460.

Naturalny glukan z czarnej fasoli hamuje proliferację komórek nowotworowych poprzez szlaki PI3K-Akt i MAPK

W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Molecules” (2023) wysunięto hipotezę, że naturalny α-1,6-glukan BBWPW pochodzący z czarnej fasoli hamuje proliferację komórek NCI-H460 poprzez regulację szlaku PI3K/AKT/MAPK.

O-octan dioscyny-6′ hamuje proliferację komórek raka płuc poprzez indukowanie zatrzymania cyklu komórkowego i apoptozy zależnej od kaspaz

W artykule opublikowanym w czasopiśmie „Phytomedicine” (2019) wykazano, że 6′-O-octan dioscyny, nowy związek naturalny, wywiera działanie antyproliferacyjne na komórki raka płuc NCI-H460.

miRNA-425-5p sprzyja rozwojowi raka płuc poprzez oś sygnałową PTEN/PI3K/AKT

Badania opublikowane w czasopiśmie „BMC Pulmonary Medicine” (2020) wskazują, że mikroRNA-425-5p sprzyja powstawaniu nowotworów płuc poprzez szlak PTEN/PI3K/AKT.

Chinalizaryna wykazuje działanie przeciwnowotworowe na komórki raka płuca A549 poprzez modulowanie szlaków sygnałowych Akt, MAPK, STAT3 i p53

W artykule opublikowanym w czasopiśmie „Molecular Medicine Reports” (2017) zaproponowano potencjał przeciwnowotworowy związku quinalizarin oraz opisano leżące u jego podstaw mechanizmy działania w komórkach NCI-H460 i innych komórkach raka płuca.

Wyciąg z wywaru z Eucalyptus globulus Labill. hamuje wzrost komórek NCI-H460 poprzez zwiększenie poziomu p53 i zmianę profilu cyklu komórkowego

W niniejszym badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Food and Function” (2019) podkreślono potencjalne działanie przeciwnowotworowe wyciągu z Eucalyptus globulus Labill. na komórkach NCI-H460. Wyniki badań wykazały, że wyciąg roślinny wywierał te efekty poprzez zwiększenie ekspresji p53 w komórkach NCI-H460 oraz modulowanie profilu cyklu komórkowego.

Materiały dotyczące linii komórkowej NCI-H460: protokoły, filmy i inne zasoby

Oto kilka zasobów internetowych dotyczących komórek raka płuc NCI-H460.

• Transfekcja komórek NCI-H460: Ten film instruktażowy stanowi przewodnik krok po kroku dotyczący transfekcji komórek NCI-H460 plazmidowym DNA.

Poniższe linki zawierają niezbędne informacje dotyczące hodowli komórek H460. 

• Komórki NCI-H460: Ta strona internetowa zawiera ważne informacje na temat pożywek dla komórek NCI-H460 oraz procedur subkulturowania, zamrażania i rozmrażania.
• Pasażowanie komórek NCI-H460: Niniejszy dokument zawiera wskazówki dotyczące pasażowania i subkulturowania linii komórkowej NCI-H460. Ponadto pomoże on również w opanowaniu protokołu transfekcji komórek NCI-H460.

Bibliografia

1. Hu, C. i in., NUCKS sprzyja proliferacji, migracji i inwazji komórek raka płuc poprzez szlak sygnałowy Pi3k/Akt. Clinical and Investigative Medicine, 2021. 44(2): s. E55-61.
2. Qi, X. i in., EGPI-1, nowy inhibitor interakcji eIF4E/eIF4G, hamuje wzrost komórek raka płuca i angiogenezę poprzez szlak sygnałowy Ras/MNK/ERK/eIF4E. Chemico-Biological Interactions, 2022. 352: s. 109773.
3. Hu, H. i in., Anlotinib wywiera działanie przeciwnowotworowe na komórki raka płuc z mutacją KRAS poprzez hamowanie szlaku MEK/ERK. Cancer Management and Research, 2020: s. 3579–3587.
4. Corveloni, A.C. i in., Kwas karnozowy wykazuje działanie antyproliferacyjne i proapoptotyczne w nowotworowych komórkach płucnych NCI-H460 oraz w nienowotworowych komórkach IMR-90. Journal of Toxicology and Environmental Health, część A, 2020. 83(10): s. 412–421.
5. Xu, Y.-L. i in., Utworzenie i charakterystyka komórek NCI-H460/PMT opornych na pemetreksed. Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (dawniej Current Medicinal Chemistry-Anti-Cancer Agents), 2019. 19(6): s. 731–739.