Komórki NCI-H1299: badania i implikacje kliniczne dotyczące komórek raka płuca NCI-H1299

Informacje dotyczące hodowli

Utrzymanie hodowli linii komórkowej nie jest łatwe, dopóki nie poznasz wszystkich kluczowych informacji na jej temat, w tym: Jaki jest czas podwojenia NCI-H1299? Jaka jest gęstość wysiewu NCI-H1299? Jakie jest podłoże hodowlane dla komórek NCI-H1299? Jak hodować linie komórkowe NCI-H1299? Ta sekcja pomoże Ci znaleźć odpowiedzi na wszystkie te pytania dotyczące hodowli komórek NCI-H1299.

Kluczowe informacje dotyczące hodowli komórek NCI-H1299

Czas podwojenia:

Czas podwojenia komórek NCI-H1299 wynosi od 22 do 30 godzin.

Komórki przylegające czy w zawiesinie:

NCI-H1299 to linia komórkowa przylegająca.

Współczynnik subkultury:

Komórki NCI-H1299 są subkultywowane w zalecanym współczynniku od 1:3 do 1:6. W celu wysiewu komórki adhezyjne przemywa się 1x PBS i inkubuje z roztworem do pasażowania Accutase przez 8 do 10 minut w temperaturze otoczenia. Oddzielone komórki dodaje się do świeżych pożywek hodowlanych i odwirowuje. Osad komórkowy jest następnie ponownie zawieszany, a komórki przelewa się do nowych kolb zawierających pożywkę wzrostową.

Pożywka wzrostowa:

RPM1 1640 jest idealną pożywką dla komórek NCI-H1299. Jest ono uzupełnione 10% surowicą płodową bydlęcą, 4500 mg/l glukozy, 2,0 mM L-glutaminą, 1 mM pirogronianem sodu, 1500 mg/l NaHCO₃ oraz 10 mM HEPES. Pożywkę należy wymieniać 2–3 razy w tygodniu.

Warunki hodowli:

Hodowle komórek raka płuc NCI-H1299 utrzymuje się w nawilżanym inkubatorze w temperaturze 37°C z dopływem 5% CO₂.

Przechowywanie:

Linię komórkową NCI-H1299 można przechowywać długoterminowo w fazie gazowej ciekłego azotu lub w zamrażarkach ultra-niskotemperaturowych w temperaturze poniżej -150°C.

Proces zamrażania i pożywka:

CM-1 lub CM-ACF to pożywki do zamrażania komórek NCI-H1299. Komórki zamraża się metodą powolnego zamrażania, która pozwala na spadek temperatury o zaledwie 1 stopień na minutę, aby zachować żywotność komórek.

Proces rozmrażania:

Zamrożone komórki NCI-H1299 szybko miesza się w podgrzanej łaźni wodnej o temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 40 do 60 sekund, aż pozostanie niewielki kawałek lodu. Do rozmrożonych komórek dodaje się świeżą pożywkę i można je bezpośrednio hodować w nowych kolbach lub odwirować. W pierwszym przypadku pożywkę należy wymienić po 24 godzinach inkubacji. Odwirowanie pomaga usunąć składniki pożywki do zamrażania. Następnie zebrane komórki zawiesza się w świeżej pożywce i umieszcza w nowej kolbie do hodowli.

Poziom bezpieczeństwa biologicznego:

Do pracy z hodowlą komórek NCI-H1299 wymagane jest laboratorium o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1.

Zakup linii komórkowej NCI-H1299: wysokiej jakości narzędzia badawcze do analizy biologii raka płuc

Zalety i wady komórek NCI-H1299

Podobnie jak inne ludzkie linie komórkowe nowotworowe, linia NCI-H1299 również posiada pewne charakterystyczne cechy, z którymi wiążą się konkretne zalety i wady. Poniżej podsumowaliśmy kilka najważniejszych z nich.

Zalety

Główne zalety linii komórkowej NCI-H1299, reprezentującej niedrobnokomórkowego raka płuca, to:

• Model raka płuc in vitro

  Linie komórkowe NCI-H1299 zostały wyhodowane z przerzutów do węzłów chłonnych raka płuca i dzięki temu mają stosunkowo podobne właściwości. Dlatego komórki te mogą służyć jako model in vitro do badania biologii raka płuca, mechanizmów komórkowych i molekularnych oraz do selekcji i testowania potencjalnych środków terapeutycznych.

• Łatwość hodowli

  Komórki NCI-H1299 są łatwe w hodowli i utrzymaniu w laboratorium badawczym. Nie ma skomplikowanych wymagań ani procedur dotyczących hodowli komórek.

• Mutacje p53 i KRAS w komórkach NCI-H1299

  Komórki NCI-H1299 nie wykazują ekspresji genu p53, co pozwala im na intensywną proliferację. Ponadto posiadają one mutację genu KRAS, która przyczynia się do wzrostu, proliferacji, inwazji i migracji komórek. Biorąc to pod uwagę, naukowcy wykorzystują komórki H1299 do badania mechanizmów molekularnych związanych z mutacjami genów KRAS i p53.

Wady

Wady komórek NCI-H1299 to:

• Specyficzność tkankowa

  Komórki NCI-H1299 pochodzą z tkanki płucnej. Dlatego też ich zastosowanie ogranicza się głównie do badań nad rakiem płuc. Mogą one nie odzwierciedlać w pełni heterogenności i ogólnych cech charakterystycznych innych typów nowotworów.

Zastosowania badawcze komórek NCI-H1299

Linia komórkowa NCI-H1299 jest szeroko stosowana w badaniach nad rakiem płuc. Poniżej wymieniono kilka obiecujących zastosowań tej linii komórkowej.

• Biologia nowotworów: Komórki NCI-H1299 stanowią doskonałe narzędzie badawcze do analizy powstawania i progresji nowotworów oraz związanych z nimi mechanizmów komórkowych i molekularnych. Komórki te posiadają określone mutacje, co pozwala badaczom na analizę zachowań komórek nowotworowych, szlaków sygnałowych oraz profili ekspresji genów. W wielu badaniach wykorzystano linię komórkową NCI-H1299, pochodzącą z niedrobnokomórkowego raka płuca, do badania biologii raka płuca. Na przykład w badaniu przeprowadzonym w 2018 roku analizowano szlak sygnałowy zaangażowany w apoptozę komórek raka płuca z wykorzystaniem komórek NCI-H1299. Naukowcy odkryli, że szlak PI3K/AKT przyczynia się do proliferacji komórek, a jego zahamowanie może powodować śmierć komórek nowotworowych [1]. Podobnie w innym badaniu analizowano mechanizmy związane z przejściem nabłonkowo-mezenchymalnym (EMT) w linii NCI-H1299. W badaniu tym wysunięto hipotezę, że białko pozakomórkowe SPARC (białko wydzielane, kwaśne i bogate w cysteinę) przyczynia się do EMT i migracji komórek NCI-H1299, a tym samym sprzyja powstawaniu nowotworów w komórkach — białko SPARC pełni rolę mediatora sygnalizacji TGF-β1 [2]. 

• Odkrywanie i przesiewanie leków: NCI-H1299, ludzka linia komórkowa raka płuca, jest szeroko stosowana do oceny toksyczności i skuteczności potencjalnych leków. Ponadto naukowcy wykorzystują ją do badania mechanizmów działania leków przeciwnowotworowych. W badaniach wykorzystano również te komórki do identyfikacji potencjalnych celów terapeutycznych i mechanizmów oporności. Na przykład w badaniach przeprowadzonych przez Xiao-Yun Shen i współpracowników analizowano potencjał przeciwnowotworowy naturalnego związku bruceiny D (BD). Wyniki wykazały, że BD znacząco hamuje proliferację, inwazję i migrację komórek NCI-H1299. W związku z tym związek ten można uznać za potencjalną terapię wspomagającą w leczeniu niedrobnokomórkowego raka płuca [3]. Podobnie w jednym z badań oceniano działanie cytotoksyczne ksantohumolu stosowanego samodzielnie oraz w połączeniu z lekiem chemioterapeutycznym cisplatyną na komórki raka płuca NCI-H1299 [4].

Często zadawane pytania dotyczące linii komórkowej NCI-H1299

Bibliografia

1. Gu, J. i in., Badanie apoptozy indukowanej przez EGCG w komórkach raka płuca poprzez hamowanie szlaku sygnałowego PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): s. 4557–4563.
2. Sun, W. i in., SPARC pełni rolę mediatora TGF-β1 w promowaniu przejścia nabłonkowo-mezenchymalnego w komórkach raka płuca A549 i H1299. Biofactors, 2018. 44(5): s. 453–464.
3. Shen, X.-Y. i in., Badanie mechanizmu działania bruceiny D w leczeniu komórek niedrobnokomórkowego raka płuca H1299. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): s. 500.
4. Long, B. i in., Działanie cytotoksyczne ksantohumolu oraz jego połączenia z cisplatyną na komórki ludzkiego raka płuca z przerzutami H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): s. 1–15.