Komórki U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1
800,00 €*
Produkty są wysyłane w stanie zamrożonym w suchym lodzie w probówkach kriogenicznych. Każda probówka kriogeniczna zawiera zazwyczaj 3 × 10 6 komórek dla linii adhezyjnych lub 5 × 106 komórek dla linii zawiesinowych (szczegółowe informacje znajdują się w certyfikacie analizy partii).
Informacje ogólne
| Opis | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 to zmodyfikowana genetycznie linia komórek ludzkiego osteosarcoma pochodząca z komórek U2OS, w której endogenny gen SEH1L (SEH1) został zmodyfikowany przy użyciu technologii CRISPR/Cas9 w celu zakodowania znacznika SNAPf w ramce. SEH1 jest składnikiem kompleksu Y (znanego również jako kompleks NUP107-160), podstawowego modułu strukturalnego kompleksu porów jądrowych (NPC), który przyczynia się do tworzenia szkieletu porów i ich stabilności. Dzięki wstawieniu sekwencji kodującej SNAPf w endogennym locus, oznaczone białko SEH1 jest ekspresjonowane pod kontrolą naturalnych mechanizmów regulacyjnych, co pozwala zachować fizjologiczne poziomy ekspresji i zminimalizować zaburzenia w składzie porów jądrowych. Tag SNAPf jest zmodyfikowaną, szybko reagującą odmianą tagu SNAP, która kowalencyjnie wiąże substraty sprzężone z benzyloguaniną, umożliwiając selektywne i stabilne znakowanie fluorescencyjne w żywych lub utrwalonych komórkach. W komórkach U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 białko fuzyjne lokalizuje się w otoczce jądra komórkowego w postaci charakterystycznego dla rozmieszczenia NPC wzoru punktowego. Ponieważ znakowanie odbywa się na poziomie białek endogennych, system ten dobrze nadaje się do ilościowej mikroskopii fluorescencyjnej, obrazowania w superrozdzielczości oraz analiz śledzenia pojedynczych cząstek, mających na celu rozłożenie organizacji i stechiometrii NPC. Płaska morfologia i duże jądra komórek U2OS dodatkowo ułatwiają wizualizację struktur otoczki jądrowej w wysokiej rozdzielczości. SEH1 uczestniczy w biogenezie NPC, a także bierze udział w procesach związanych z kinetochorem podczas mitozy. W związku z tym ta linia komórkowa stanowi solidną platformę do badania zależnego od cyklu komórkowego montażu i demontażu NPC, przestrzennej organizacji kompleksu Y w ramach szkieletu porów oraz potencjalnej podwójnej roli SEH1 w otoczce jądrowej i kinetochorach mitotycznych. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 umożliwia badania mechanistyczne architektury i dynamiki porów jądrowych w warunkach ekspresji istotnych z fizjologicznego punktu widzenia. |
|---|---|
| Organizm | Człowiek |
| Tkanka | Kość |
| Choroba | Mięsak kościopochodny |
Charakterystyka
| Wiek | 15 lat |
|---|---|
| Płeć | Kobieta |
| Pochodzenie etniczne | Kaukaski |
| Morfologia | Podobny do nabłonka |
| Właściwości wzrostu | Adherent |
Dane regulacyjne
| Cytat | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (numer katalogowy Cytion 300664) |
|---|---|
| Poziom bezpieczeństwa biologicznego | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Deponent | Laboratorium Ellenberg (EMBL) |
| Status GMO | GMO-S1: Ta ludzka linia komórek kostniakomięsaka (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) zawiera fuzję SNAPf-SEH1 za pośrednictwem CRISPR, która umożliwia selektywne znakowanie nukleoporyny SEH1. Modyfikacja jest stabilnie obecna. Ta klasyfikacja ma zastosowanie tylko w Niemczech i może się różnić w innych krajach. |
Dane biomolekularne
| Ekspresja białka | SEH1, znacznik SNAPf |
|---|
Obsługa
| Podłoże hodowlane | McCoys 5a, w: 3,0 g/l glukozy, w: stabilna glutamina, w: 2,0 mM pirogronianu sodu, w: 2,2 g/l NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820200a) |
|---|---|
| Suplementy | Uzupełnić pożywkę o 10% FBS, 3,0 g/l glukozy, stabilną glutaminę, 2,0 mM pirogronianu sodu, 2,2 g/l NaHCO3, 1% NEAA |
| Odczynnik dysocjacyjny | Accutase |
| Subkultury | Usuń starą pożywkę z przylegających komórek i przemyj je PBS, który nie zawiera wapnia i magnezu. W przypadku kolb T25 należy użyć 3-5 ml PBS, a w przypadku kolb T75 5-10 ml. Następnie całkowicie pokryj komórki Accutase, używając 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75. Pozwól komórkom inkubować w temperaturze pokojowej przez 8-10 minut, aby je oddzielić. Po inkubacji delikatnie wymieszaj komórki z 10 ml pożywki, aby ponownie je zawiesić, a następnie odwiruj przy 300xg przez 3 minuty. Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić komórki w świeżej pożywce i przenieść je do nowych kolb zawierających już świeżą pożywkę. |
| Środek zamrażający | Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją. |
| Rozmrażanie i hodowla komórek |
|
| Atmosfera inkubacji | 37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera. |
| Powłoka kolby | W celu zapewnienia optymalnego przylegania i żywotności po rozmrożeniu zalecamy stosowanie kolb lub płytek pokrytych kolagenem. |
| Procedura zamrażania | Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania. |
| Warunki wysyłki | Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania. |
| Warunki przechowywania | W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu. |
Kontrola jakości / Profil genetyczny / HLA
| Sterylność | Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji. Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym. |
|---|