Linia komórkowa Jurkat E6.1

Jurkat E6. 1 jest klonem linii komórkowej Jurkat, unieśmiertelnionej linii ludzkich limfocytów T pochodzących z krwi obwodowej. Po raz pierwszy utworzona w 1977 roku, jest wykorzystywana w badaniach związanych z sygnalizacją receptorów limfocytów T, terapiami adopcyjnymi limfocytów T i innych limfocytów przeciwko nowotworom, badaniami nad protoonkogenami związanymi z krwią, przeżywalnością komórek i różnicowaniem komórek.

W tym artykule zawrzemy wszystkie informacje i warunki wstępne, które należy zrozumieć przed rozpoczęciem pracy z klonowanymi liniami komórkowymi Jurkat E6.1, które obejmują:

1. Pochodzenie, historia i informacje ogólne
2. Charakterystyka hodowli komórkowej
3. Zastosowania linii komórkowych Jurkat E6.1
4. Publikacje badawcze
5. Zalety i ograniczenia
6. Zasoby: Protokoły, filmy i inne

1 Pochodzenie, historia i informacje ogólne

Poniżej znajdują się wszystkie niezbędne informacje związane z historią, pochodzeniem i ogólną charakterystyką linii komórkowej Jurkat E6.1 oraz ich wykorzystaniem w hodowli komórkowej.

• Jurkat E6.1 jest unieśmiertelnioną linią komórkową ludzkich limfocytów T. Ta sklonowana linia komórkowa jest pochodną linii komórkowej Jurkat uzyskanej z krwi obwodowej 14-letniego chłopca cierpiącego na ostrą białaczkę limfoblastyczną w 1976 roku. Po wyizolowaniu z krwi, ta linia komórkowa została początkowo nazwana JM, ponieważ JM i Jurkat wskazują, że te linie komórkowe zostały wyizolowane od tego samego pacjenta. Linia komórkowa Jurkat E6.1 została sklonowana z pochodnych komórek znanych jako Jurkat-FHCRC.
• Linie komórkowe E6.1 pochodzą z białaczki; te linie komórkowe są wykorzystywane do zwiększenia ekspresji IL-2 poprzez symulację z przeciwciałami monoklonalnymi lub lektyną. Wykazują one ekspresję receptorów antygenowych limfocytów T; dlatego te linie komórkowe mogą być wykorzystywane w badaniach nad zaburzeniami układu odpornościowego i badaniach immunoonkologicznych.
• Morfologia komórek Jurkat E6.1: Komórki Jurkat E6.1 zostały wyizolowane od pacjenta z białaczką i mają zmienioną morfologię w porównaniu do limfocytów T, co czyni je nieśmiertelnymi liniami komórkowymi. Komórka limfoblastyczna powstaje, gdy naiwne limfocyty są aktywowane przez prezentację antygenu przez komórki prezentujące antygen. Skutkuje to zwiększonym wzrostem jądra, cytoplazmy, mRNA i białek.
• Rozmiar komórki: Linie komórkowe Jurkat E6.1 są klonowanymi immortalizowanymi komórkami, których średnica częściej mieści się w zakresie 10-16 μm (średnica może się różnić w zależności od rodzaju zawiesiny). Te linie komórkowe mają wysoce sferyczny kształt komórek.
• Liczba genomów i chromosomów: Te linie komórkowe są pseudodiploidalnymi liniami komórkowymi ludzkich limfocytów T, z ich modelowym chromosomem chromosomem 46. Pokazują one również, że chromosom modalny jest obecny w około 74% i wykazuje wskaźnik poliploidii około 5,3%. Badania kariotypu wykazały kariotyp z 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). Chromosomy X i Y mają zwykle regularną kopię w większości linii komórkowych.
• Linie komórkowe Jurkat vs linie komórkowe E6.1 Jurkat: Linie komórkowe Jurkat są pierwotnymi macierzystymi liniami komórkowymi wyizolowanymi po raz pierwszy od pacjenta z ostrą białaczką limfoblastyczną. Jednak linie komórkowe E6.1 Jurkat są sklonowanymi pochodnymi linii komórkowych Jurkat-FHCRC.

3. zastosowania linii komórkowych Jurkat E6.1

Linia komórkowa Jurkat E6.1 jest najczęściej wykorzystywana w badaniach nad zaburzeniami związanymi z układem odpornościowym i powiązanymi z nimi nowotworami. Co więcej, jest ona odpowiednia do badania pewnych złożoności związanych z zakażeniem wirusem HIV, ponieważ receptor komórek T CD4 jest niezbędny do wniknięcia retrowirusa.

Poniżej omówiono niektóre kluczowe obszary, w których wykorzystywane są te linie komórkowe:

Modelowy system sygnalizacji komórek T i szlaków apoptotycznych: Ta linia komórkowa pochodząca z białaczki limfocytów T jest szeroko stosowana w badaniach obejmujących kaskadę sygnalizacji TCR. Jurkat E6.1 uwalnia więcej IL-2 i IL-8, które następnie pomagają w aktywacji komórek T i wyzwalają szlaki zapalne. Ta linia komórkowa jest również znana z hiperfosforylacji Pyk2 i zwiększonej produkcji Vav1, która ma kluczowy wpływ na rearanżację cytoszkieletu aktynowego w komórkach T. Segregację TCR w linii komórkowej Jurkat E6-1 można również poprawić poprzez silną ekspresję LFA-1, która w konsekwencji wzmacnia sygnalizację TCR i ekspresję IL-2. Badania proliferacji komórek i cyklu komórkowego są również prowadzone na liniach komórkowych Jurkat E6.1. Są one preferowane w badaniu szlaków apoptotycznych i indukcji uszkodzeń DNA przez związki pochodzące ze źródeł morskich i roślinnych. W badaniu z 2013 roku oceniano wpływ pożywki kondycjonowanej epigonem rekina na ludzkie komórkiprzy użyciu tych linii komórkowych. Podobnie, represyjny wpływ hirsutyny pochodzenia roślinnego na proliferację komórek badano na liniach komórkowych Jurkat E6.1. Często badania przeciwnowotworowe wykorzystują również Jurkat E6.1 do oceny wybranych celów. W tych liniach komórkowych badano również wpływ neurotoksyn morskich, takich jak Brevetoxins (PbTx).

Badania nad wirusem HIV: Jednym z najważniejszych zastosowań linii komórkowych Jurkat E6.1 jest ich zdolność do służenia jako odpowiedni model do badań nad HIV ze względu na ich właściwość wyboru różnych zdarzeń sygnalizacyjnych, które indukują TCA. Linie komórkowe Jurkat E6.1 były wykorzystywane nie tylko do zrozumienia aktywacji HIV, ale także do badania mechanizmów latencji HIV. Replikacja i infekcja HIV były szeroko badane w tych liniach komórkowych, gdzie mogą być poddawane edycji genów i nokautowi genów, jak to miało miejsce w badaniu z 2021 roku. Wpływ dostarczania leków na zakażenie wirusem HIV, takich jak długo działający efawirenz (Efa) - enfuwirtyd (Enf) Co-loaded polimer-lipid hybrid nanoparticles (PLN) on viral entry utilized Jurkat E6.1 cell lines. Jurkat E6.1 zmodyfikowany metodą CRISPR/Cas9 był wielokrotnie wykorzystywany do badania mechanizmów związanych z wnikaniem, replikacją i infekcją HIV.

4. publikacje badawcze

Oto kilka godnych uwagi przykładów z dużej kolekcji badań, w tym linii komórkowych Jurkat E6.1.

Metabolit selenu, metyloselenol, reguluje ekspresję ligandów, które wyzwalają aktywację immunologiczną poprzez receptor limfocytów NKG2D

Wykorzystanie Jurkat E6.1, inkubowanych w różnych związkach selenu do badania ekspresji ligandów i powierzchniowej ekspresji MICA/B.

Kwas karakasynowy, ent-3,4-seko-kauren, promuje apoptozę i różnicowanie komórek poprzez hamowanie szlaku sygnałowego NFkB w komórkach białaczkowych.

Zrozumienie cytotoksyczności indukowanej przez kwas karakasynowy w ludzkich liniach komórek T, takich jak Jurkat E6.1 i HL-60.

Dowody na rozwój oporności na leki in vitro na azydotymidynę w liniach komórkowych białaczki limfocytowej T (Jurkat E6-1/AZT-100) i u pacjentów pediatrycznych z zakażeniem HIV-1

Wykorzystanie linii komórkowej Jurkat E6.1 inkubowanej przez długi czas z lekiem AZT do badania oporności na azydotymidynę (AZT) u pacjentów zakażonych wirusem HIV-1.

Badania linii komórkowej Jurkat E6.1 dotyczące wpływu niektórych bioindoli na płynność błony

W badaniach wykorzystano spolaryzowany system analizy fluorescencji, aby zrozumieć wpływ bioindoli, w tym serotoniny, tryptofanu i melatoniny, na płynność błony komórkowej w liniach komórkowych Jurkat E6.1.

Molekularny mechanizm indukcji apoptozy w komórkach Jurkat E6-1 przez ekstrakt z alkaloidów Tribulus terrestris

Ekstraktz alkaloidówTribulus terrestris indukował apoptozę w komórkach Jurkat E6.1, aby zrozumieć podstawowy mechanizm działania.

Zwiększenie ekspresji LFA-1 poprawia architekturę synapsy immunologicznej i sygnalizację receptora limfocytów T w komórkach Jurkat E6.1

Sygnalizacja receptora limfocytów T w komórkach Jurkat E6.1 została wzmocniona przez silne zwiększenie ekspresji LFA-1.

5. zalety i ograniczenia

Podobnie jak inne linie komórkowe, Jurkat E6.1 ma swoje zalety i ograniczenia.

Zalety

Istnieje wiele powodów, dla których jest ona preferowana w tych zastosowaniach:

• Tryb wzrostu

  Jurkat E6.1 to zawiesinowa i nieadherentna linia komórkowa, co oznacza, że rośnie w zawiesinie i nie przylega do powierzchni hodowli.

• Ekspresja genów

  Linia komórkowa Jurkat E6.1 wykazuje ekspresję genów kodujących interleukinę-2 (IL-2) i CD3. Wykazano, że po stymulacji przeciwciałami monoklonalnymi, lektynami lub estrami forbolu przeciwko kompleksowi antygenowemu T3, komórki te wytwarzają wzmocnioną IL-2.

• Ekspresja antygenów

  Linia komórkowa Jurkat E6.1 wykazuje ekspresję antygenu CD3, związanego z aktywacją i sygnalizacją komórek T.

• Markery ekspresji

  Linia komórkowa wykazuje ekspresję markerów receptora antygenu komórek T (TCR), które mają kluczowe znaczenie w rozpoznawaniu komórek T i odpowiedzi immunologicznej.

• Zastosowanie do transfekcji

  Linia komórkowa Jurkat klon E6.1 nadaje się do eksperymentów transfekcji gospodarza, umożliwiając wprowadzenie egzogennego materiału genetycznego do komórek w różnych celach badawczych.

Ograniczenia

Po zaletach, przejdźmy do ograniczeń związanych z wykorzystaniem linii komórkowych Jurkat E6.1:

• Transfekcja komórek wektorem wirusowym

  Transfekcja komórek Jurkat E6.1 jest trudna ze względu na ich pochodzenie z limfocytów T. Zazwyczaj do modyfikacji genetycznej wymagane są drogie i czasochłonne wektory wirusowe. Wektory niewirusowe wykazały niską wydajność transfekcji i znaczną toksyczność w komórkach Jurkat.

• Zanieczyszczenie bakteryjne

  Hodowle komórek Jurkat E6.1 powinny być monitorowane pod kątem potencjalnego zanieczyszczenia bakteryjnego w celu zapewnienia integralności wyników eksperymentalnych.

• Zanieczyszczenia wirusowe

  Linie komórkowe Jurkat E6.1 wykazują ekspresję różnych receptorów chemokinowych i niski poziom CD4, co ułatwia wnikanie wirusów. Sprawia to, że są one podatne na wirusy infekujące komórki T, takie jak HTLV i HIV.

6.zasoby: Protokoły, filmy i nie tylko

Ta sekcja obejmuje metody i protokoły hodowli komórek i transfekcji, a także filmy edukacyjne związane z tą linią komórkową:

Protokoły hodowli komórek

Oto kilka podstawowych procedur hodowlanych, których należy przestrzegać w przypadku tej linii komórkowej:

• SOP hodowli komórkowej, Propagacja Jurkat: Uniwersytet Kalifornijski udostępnił również metodę hodowli klonu Jurkat E6-1 w przeglądarce genomu USCS.
• Jurkat, Clone E6-1 Culture and Handling: Firma Elabscience zamieściła protokół obsługi hodowli na swojej stronie z opisem produktu.

Protokoły transfekcji

Oto lista różnych dostępnych protokołów transfekcji:

• Protokół transfekcji komórek Jurkat Odczynnik Lipofectamine LTX: Protokół transfekcji komórek Jurkat przy użyciu odczynnika Lipofectamine LTX firmy ThermoFisher.
• Amaxa™ 4D-Nucleofector™ Protocol for Jurkat clone E6.1 [ATCC®]: Lonza Group AG dostarczyła protokół transfekcji dla klonu Jurkat E6.1 z ATCC przy użyciu 4D-Nucleofector® X Unit.

Filmy dotyczące Jurkat E6.1

Istnieje kilka doskonałych filmów wideo obejmujących koncepcje hodowli komórek, procedury, proliferację, umieszczanie na płytkach i inne tematy.

• Pasażowanie komórek:Podstawy hodowli komórek: Jest to świetny film instruktażowy z podstawami pasażowania ludzkich linii komórkowych przez ThermoFisher.
• Rozmrażanie komórek: Podstawy hodowli komórek: Ten film zawiera podstawowe instrukcje dotyczące hodowli i rozmrażania komórek przez ThermoFisher.
• Protokół transfekcji plazmidowego DNA: Ten film koncentruje się na protokole transfekcji plazmidowego DNA przy użyciu odczynnika Lipofectamine® LTX i Plus™ firmy ThermoFisher.
• Pomiar apoptozy przy użyciu zawiesiny komórek Jurkat poddanych działaniu 3-mikromolarnej staurosporyny: Ten film pokazuje, jak wykonać test apoptozy na cytometrze obrazowym Celigo przy użyciu odczynników Hoechst i kaspazy 3/7 firmy Nexcelom Bioscience.