Komórki SH-SY5Y - badania nad neuroblastomą i znaczenie komórek SH-SY5Y dla neuronauki
Linia komórkowa SH-SY5Y, pochodząca z ludzkiego neuroblastoma, jest szeroko wykorzystywana w badaniach medycznych do badania chorób neurodegeneracyjnych i opracowywania leków. Naukowcy wykorzystują te komórki w ich pierwotnej niezróżnicowanej formie lub różnicują je w komórki przypominające neurony.
Informacje ogólne i pochodzenie linii komórkowej SH-SY5Y
W tej sekcji omówione zostaną podstawowe informacje na temat linii komórkowej SH-SY5Y, w tym jej pochodzenie, definicja i struktura komórkowa. Zajmiemy się kwestiami takimi jak morfologia i pochodzenie komórek.
- SH-SY5Y to linia komórkowa pochodzenia ludzkiego, która powstała w wyniku subklonowania linii komórkowej nerwiaka niedojrzałego SK-N-SH w 1970 roku.
- Macierzysta linia komórkowa, SK-N-SH, została opracowana z biopsji szpiku kostnego czteroletniej pacjentki z nerwiakiem niedojrzałym.
- Komórki SH-SY5Y są fenotypowo adrenergiczne i wyrażają markery dopaminergiczne, co czyni je użytecznym modelem in vitro do badania chorób neurodegeneracyjnych, neurogenezy i charakterystyki komórek mózgowych [1].
- Komórki SH-SY5Y rosną jako skupiska żywych komórek neuroblastycznych z neurytami i są luźno przylegające.
- Rozmiar komórek SH-SY5Y wynosi 12 μm.
- Modalna liczba chromosomów dla komórek SH-SY5Y wynosi 47 i posiadają one rzadki marker chromosomu numer 1, trisomię 1q, spowodowaną wstawieniem dodatkowej kopii segmentu 1q do długiego ramienia chromosomu 1.
Hodowla komórek SH-SY5Y
W laboratoriach neurobiologicznych komórki SH-SY5Y są najczęściej hodowanymi komórkami neuroblastoma. Aby pracować z tymi komórkami, konieczne jest zrozumienie, jaki rodzaj pożywki jest odpowiedni do ich hodowli, ich charakterystyki wzrostu, optymalnej gęstości wysiewu i właściwej metody ich zamrażania. Ta sekcja dostarczy niezbędnych informacji na temat hodowli komórek SH-SY5Y, aby pomóc ci w tych aspektach.
Kluczowe punkty dotyczące hodowli komórek SH-SY5Y
|
Czas pod wojeniapopulacji: Średni czas podwojenia populacji komórek SH-SY5Y wynosi około 3 do 4 dni. |
|
Adherentne lub w zawiesinie: Komórki SH-SY5Y są komórkami luźno przylegającymi. Rosną jako kępy, gdy są wysiewane w wysokiej gęstości. |
|
Gęstość wysiewu: Optymalna gęstość wysiewu dla SH-SY5Y wynosi 1 x 104 komórki/cm2. Hodowle SH-SY5Y składają się zarówno z komórek przylegających, jak i pływających. |
|
Podłoże hodowlane: Pożywka DMEM:Ham's F12 z dodatkiem 3,1 g/l glukozy, 10% FBS i 1,6 mM L-glutaminy jest idealna do hodowli linii komórkowej SH-SY5Y. |
|
Warunki wzrostu (temperatura, CO2): Komórki SH-SY5Y są hodowane w temperaturze 37°C w nawilżanym inkubatorze z 5% podażą CO2. |
|
Przechowywanie: Aby utrzymać żywotność komórek SH-SY5Y, są one przechowywane w fazie gazowej ciekłego azotu w temperaturze poniżej -150°C. |
|
Proces zamrażania i pożywka: Do zamrażania komórek SH-SY5Y stosuje się pożywki CM-1 lub CM-ACF. Do zamrażania tej linii komórek neuroblastoma wybrano metodę powolnego zamrażania, która stopniowo obniża temperaturę o 1°C. |
|
Proces rozmrażania: Zamrożone fiolki zawierające komórki SH-SY5Y umieszcza się w łaźni wodnej ustawionej na temperaturę 37°C. Fiolka jest szybko mieszana, aż komórki rozmrożą się i pozostanie tylko niewielka grudka lodu. |
|
Poziom bezpieczeństwa biologicznego: Komórki SH-SY5Y mogą być hodowane w laboratorium o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1. |
Komórki SH-SY5Y: Zalety i ograniczenia
Zalety
- Różnicowanie w neurony: Komórki SH-SY5Y można różnicować w funkcjonalne neurony przy użyciu określonych związków, zapewniając wygodniejszą alternatywę dla neuronów pierwotnych i unikając obaw etycznych związanych z ich wykorzystaniem [2].
- Model in vitro dla chorób neurodegeneracyjnych: Ekspresja markerów molekularnych, w tym markerów neuronów dopaminergicznych, sprawia, że komórki SH-SY5Y nadają się do badania zaburzeń neurodegeneracyjnych, takich jak choroba Parkinsona.
Ograniczenia
- Niezsynchronizowany cykl komórkowy: Hodowle komórek SH-SY5Y wykazują niezsynchronizowane cykle komórkowe w stanie niezróżnicowanym [3].
- Niezdefiniowany stan zróżnicowania: Komórki SH-SY5Y mają niezdefiniowany stan różnicowania, który waha się od nowotworowego stanu neuroblastoma do postmitotycznych neuronów lub neuronalnych komórek progenitorowych. Nie wyrażają one markerów molekularnych, które posiadają dojrzałe komórki neuronowe [4].
Komórki SH-SY5Y dla neurofarmakologii in vitro i odkrywania leków
Zastosowania komórek SH-SY5Y
Badania nad chorobami neurodegeneracyjnymi: Komórki SH-SY5Y są wykorzystywane do badania zaburzeń neurodegeneracyjnych, takich jak choroba Alzheimera i Parkinsona. Na przykład, w badaniu poddano komórki SH-SY5Y działaniu peptydu amyloidowego β 1-42 w celu stworzenia modelu in vitro choroby Alzheimera. Opracowana linia komórkowa została następnie transfekowana pcDNA-17A i 17A shRNA w celu zbadania wpływu długiego niekodującego RNA 17A na komórki podobne do komórek choroby Alzheimera. Badanie wykazało, że LncRNA-17A reguluje apoptozę i autofagię komórek SH-SY5Y, naśladując AD [5].
Rozwój leków: Komórki SH-SY5Y są wykorzystywane do badań przesiewowych i walidacji leków pod kątem ich działania terapeutycznego przeciwko chorobom neurodegeneracyjnym. Na przykład badanie przeprowadzone w 2021 r. wywołało parkinsonizm w komórkach SH-SY5Y przy użyciu herbicydu (Paraquat), a następnie wykorzystało te komórki do zbadania potencjału terapeutycznego flawonoidu, Naringeniny. Związek ten wykazał działanie ochronne przed neurodegeneracją i neurotoksycznością związaną z chorobą Parkinsona w modelach komórkowych, wskazując na jego potencjał w opracowywaniu terapii PD [6].
Publikacje badawcze dotyczące komórek SH-SY5Y
Istnieje wiele badań naukowych dotyczących komórek SH-SY5Y. W tej sekcji omówimy kilka znaczących przykładów.
- LncRNA17A reguluje autofagię i apoptozę linii komórkowej SH-SY5Y jako model in vitro choroby Alzheimera: W tej publikacji zaproponowano, że LncRNA17A pośredniczy w apoptozie i autofagii komórek SH-SY5Y eksperymentalnie przekształconych w model choroby Alzheimera.
- Naringenina łagodzi indukowaną parakwatem utratę neuronów dopaminergicznych w komórkach SH-SY5Y i szczurzym modelu choroby Parkinsona: Badanie to sugeruje, że związki naringeniny są neuroprotekcyjne w stosunku do eksperymentalnie opracowanego komórkowego i zwierzęcego modelu choroby Parkisona.
- Charakterystyka biochemiczna proliferacyjnej i zróżnicowanej linii komórkowej SH-SY5Y jako modelu choroby Parkinsona: Zróżnicowane komórki SH-SY5Y zostały wykorzystane do scharakteryzowania i oceny kilku procesów biochemicznych często badanych w chorobie Parkinsona.
- Wpływ acytretyny na ludzkie komórki neuronalne SH-SY5Y in vitro: Komórki SH-SY5Y zostały wykorzystane do badania różnicowania neuronów. Naukowcy zbadali, że Acitretin promuje różnicowanie neuronów i leczy zaburzenia neurodegeneracyjne i neurorozwojowe oraz guzy mózgu.
- Transformacja linii komórkowej SH-SY5Y w komórki podobne do neuronów: Badanie zmian elektrofizjologicznych i biomechanicznych: W badaniu tym przekształcono komórki blastomy neuronalnej SH-SY5Y w neurony poprzez traktowanie ich kwasem retinowym i cząsteczkami czynnika neurotroficznego pochodzenia mózgowego (BDNF) oraz zbadano zachodzące w nich zmiany biochemiczne i elektrofizjologiczne.
Zasoby dotyczące komórek SH-SY5Y: Protokoły, filmy i inne
Dostępnych jest kilka zasobów internetowych dotyczących tej słynnej linii komórek nerwiaka niedojrzałego. Zasoby te mogą dostarczyć informacji na temat obsługi i utrzymania hodowli SH-SY5Y.
Protokoły hodowli komórek
Poniższe artykuły internetowe mogą pomóc w poznaniu metod hodowli, zamrażania i rozmrażania komórek SH-SY5Y.
- Hodowlakomórek SH-SY5Y: Podstawoweinformacje o komórkach SH-SY5Y, w tym rozmrażanie, zamrażanie i subkultura komórek.
- Hodowla komórek SH-SY5Y: Pokazuje informacje o stosowanych pożywkach i etapach subhodowli komórek SH-SY5Y.
- Transfekcja komórek SH-SY5Y: Ten dokument opisuje protokół transfekcji przejściowej dla linii komórkowej SH-SY5Y.
- Protokół różnicowania: Ten film wyjaśnia protokół różnicowania komórek SH-SY5Y.
Oczekujemy, że ten artykuł dostarczy korzystnych informacji dotyczących obsługi, hodowli i wykorzystania komórek SH-SY5Y w badaniach naukowych; jeśli chcesz pracować z tą linią komórek neuroblastoma, rozważ złożenie u nas zamówienia.
Linia komórkowa SH-SY5Y: Często zadawane pytania
Piśmiennictwo
- Carvajal-Oliveros, A., et al., Linia komórkowa BE (2)-M17 ma lepszy fenotyp dopaminergiczny niż tradycyjnie stosowana w badaniach nad chorobą Parkinsona SH-SY5Y, która jest głównie serotoninergiczna. IBRO Neuroscience Reports, 2022. 13: p. 543-551.
- Kovalevich, J. i D. Langford, Considerations for the use of SH-SY5Y neuroblastoma cells in neurobiology. Hodowla komórek neuronalnych: metody i protokoły, 2013: s. 9-21.
- Martin, E.-R., J. Gandawijaya i A. Oguro-Ando, A novel method for generating glutamatergic SH-SY5Y neuron-like cells utilizing B-27 supplement. Frontiers in Pharmacology, 2022: s. 4042.
- Feles, S., et al., Usprawnienie warunków hodowli linii komórkowej nerwiaka niedojrzałego SH-SY5Y: warunek wstępny badań funkcjonalnych. Methods and Protocols, 2022. 5(4): p. 58.
- Wang, X., M. Zhang i H. Liu, LncRNA17A reguluje autofagię i apoptozę linii komórkowej SH-SY5Y jako model in vitro choroby Alzheimera. Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 2019. 83(4): p. 609-621.
- Ahmad, M.H., et al., Naringenin łagodzi indukowaną parakwatem utratę neuronów dopaminergicznych w komórkach SH-SY5Y i szczurzym modelu choroby Parkinsona. Neuropharmacology, 2021. 201: p. 108831.
