HROHep03 Šūnas

Cytion's Freeze Medium CM-1 ir mūsdienīga kriokonservēšanas barotne, kas izstrādāta, lai nodrošinātu visaugstākā līmeņa šūnu dzīvotspēju un funkcionalitāti pēc atkausēšanas. Šī daudzpusīgā barotne ir piemērota plašam šūnu tipu spektram, tostarp gan cilvēku, gan dzīvnieku šūnām, padarot to par būtisku līdzekli dažādiem pētniecības lietojumiem. Izstrādāta ar rūpīgi sabalansētu krioprotektoru un svarīgāko barības vielu kombināciju, sasaldēšanas barotne CM-1 samazina ledus kristālu veidošanos un šūnu stresu sasaldēšanas procesa laikā, tādējādi saglabājot šūnu integritāti.
Freeze Medium CM-1 galvenās īpašības:

Plaša saderība: Efektīva dažādiem šūnu tipiem, tostarp primārajām šūnām, cilmes šūnām un izveidotām šūnu līnijām.
Augsta dzīvotspēja: Optimizēta, lai pēc atkausēšanas maksimāli palielinātu šūnu reģenerāciju un dzīvotspēju, nodrošinot uzticamus eksperimentu rezultātus.
Gatavs lietošanai: Ērti sagatavotas un sterilizētas tūlītējai lietošanai, samazinot sagatavošanas laiku un piesārņojuma risku.
Uzlabota stabilitāte: Uztur nemainīgu veiktspēju standarta kriokonservēšanas apstākļos, nodrošinot reproducējamus rezultātus.
Ilgs glabāšanas laiks: CM-1 ir serumu saturoša, lietošanai gatava kriokonservēšanas barotne, ko var uzglabāt ledusskapī līdz pat vienam gadam.


CM-1 izmantošana šūnu sasaldēšanai

Lai izmantotu CM-1 gan adhēzijas, gan suspensijas šūnu sasaldēšanai, izpildiet šādas darbības

Attiecībā uz adhēzīvām šūnām tās nomazgā un atdala no kultūras substrāta. Suspensijas šūnām pārejiet uz nākamo soli.
Saskaitiet šūnas, lai pārliecinātos, ka to koncentrācija ir atbilstoša.
Centrifugējiet šūnas, lai tās granulētu, pēc tam atkārtoti suspendējiet CM-1 sasaldēšanas barotnē.
Resuspendētās šūnas pārvietot kriokivās.
Pirms šūnu pārvietošanas uz ilgtermiņa uzglabāšanu izmantojiet lēnas sasaldēšanas metodi





Metode
Apraksts
Soļi





❄️
Manuāla sasaldēšana

Pakāpeniska metode, kas ietver pakāpenisku temperatūras pazemināšanu, lai nodrošinātu šūnu dzīvotspēju

1️⃣ Ievietojiet šūnas sasaldēšanas barotnē 4 °C saldētavā uz 40 minūtēm.
2️⃣ Uz 24 stundām pārvietot uz -80°C saldētavu.
3️⃣ Ilgtermiņa uzglabāšanai šūnas uzglabāt šķidrā slāpeklī



❄️
Frosty kunga izmantošana

Ērta ierīce, kas ļauj kontrolēt sasaldēšanas ātrumu bez elektriskās strāvas

1️⃣ Sagatavojiet šūnas krioviālos ar sasaldēšanas barotni.
2️⃣ Ievietojiet krioviālus Mr. Frosty konteinerā.
3️⃣ Pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli 24 stundas uzglabāt -80 °C temperatūrā



❄️
Kontrolēta ātruma saldētava

Thermo Fisher vai citu ražotāju augstas precizitātes saldētava, kas paredzēta kontrolētai temperatūras pazemināšanai

1️⃣ Ierīci ieprogrammējiet tā, lai pakāpeniski pazeminātu temperatūru.
2️⃣ Ievietojiet sagatavotās šūnas saldētavā.
3️⃣ Pēc sasaldēšanas cikla šūnas pārceliet uz šķidro slāpekli









Glabājiet krioviālus temperatūrā, kas zemāka par -130 °C, vai šķidrā slāpeklī ilgstošai uzglabāšanai.


Sastāvdaļas

Satur FBS, DMSO, glikozi, glikozi, sāļus
Buferizācijas spēja: pH = 7,2 līdz 7,6


Cytion's Freeze Medium CM-1 piedāvā uzticamu risinājumu kriokonservēšanai, nodrošinot augstu šūnu dzīvotspēju un funkcionalitāti pēc atkausēšanas visdažādākajiem pētniecības lietojumiem.

DMEM:Ham's F12 ir plaši atzīta un bieži izmantota pamata barotne šūnu kultūrās bioloģiskajos pētījumos. Tā kalpo kā galvenais barības vielu avots dažādu zīdītāju šūnu līniju augšanai, jo īpaši, ja tai pievieno teļa augļa serumu (FBS).

Šī unikālā formula apvieno Dulbecco modificēto Eagle barotni (DMEM) un Ham's F-12 (Ham's barības vielu maisījumu F-12) precīzā 1:1 attiecībā. L-glutamīna pievienošana vēl vairāk uzlabo tās sastāvu.

DMEM, kas ir atvasināts no Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), salīdzinājumā ar savu priekšteci piedāvā paaugstinātu aminoskābju un vitamīnu koncentrāciju. Savukārt Ham's F-12 ir balstīts uz Ham's F-10 barotni, nodrošinot papildu nepieciešamo komponentu kopumu.

Lai atbalstītu optimālu šūnu augšanu, parasti DMEM:Ham's F12 papildina ar FBS tipiskā koncentrācijā 5–10 %. Šī piedeva ir nepieciešama, jo barotnē trūkst augšanas hormonu, lipīdu un proteīnu, kas ir būtiski šūnu attīstībai.

DMEM:Ham's F12 satur pH buferu sistēmu un bieži tiek papildināts ar fenola sarkano, kas ir pH indikators. Kultivētām šūnām DMEM:Ham's F12 vai jebkurā vidē, kurā izmanto bikarbonāta buferu sistēmu, ir nepieciešama kontrolēta CO2 vide 5–10 % līmenī, lai uzturētu atbilstošu pH līmeni. 


Kvalitātes kontrole

Sterili filtrēts


Uzglabāšana un derīguma termiņš

Uzglabāt +2 °C līdz +8 °C temperatūrā, aizsargājot no gaismas.
Pēc atvēršanas uzglabāt 4 °C temperatūrā un izlietot 6–8 nedēļu laikā.


Piegādes nosacījumi

Vides temperatūra


Uzglabāšana

Uzglabāt ledusskapī +2 °C līdz +8 °C temperatūrā, aizsargājot no gaismas. Izvairieties no sasaldēšanas un biežas sasilšanas līdz +37 °C, jo tas samazina produkta kvalitāti.
Nesildiet barotni virs 37 °C un nelietojiet nekontrolētus siltuma avotus, piemēram, mikroviļņu krāsnis.
Ja jāizmanto tikai daļa no barotnes, pirms lietošanas izņemiet nepieciešamo daudzumu un uzsildiet to līdz istabas temperatūrai.


Sastāvs



Kategorija
Sastāvdaļas
Koncentrācija (mg/l)


Aminoskābes
Glicīns
18,75


L-alanīns
4,45


L-arginīna HCl
147,50


L-asparagīns H₂O
7,50


L-asparagīnskābe
6,65


L-cisteīns HCl H₂O
17,56


L-cistīns 2 HCl
31,29


L-glutamīnskābe
7,35


L-glutamīns
365,00


L-histidīna HCl H₂O
31,48


L-izoleicīns
54,47


L-leicīns
59,05


L-lizīna HCl
91,25


L-metionīns
17,24


L-fenilalanīns
35,48


L-prolīns
17,25


L-serīns
26,25


L-treonīns
53,45


L-triptofāns
9,02


L-tirozīns 2 Na 2 H2O
55,79


L-valīns
52,85


Vitamīni
D-biotīns
0,0035


Holīna hlorīds
8,98


D-kalcija pantotenāts
2,24


Folijskābe
2,66


mio-inozitols
12,60


Nikotinamīds
2,02


Piridoksīna HCl
0,031


Piridoksāls HCl
2,00


Riboflavīns
0,219


Tiamīna HCl
2,17


Vitamīns B12
0,68



Neorganiskie sāļi
CaCl2 2 H2O
154,50


CuSO4 5 H2O
0,0013


Fe(NO3)3 9 H2O
0,05


FeSO4 7 H2O
0,417


KCl
311,80


MgCl2 6 H2O
61,20


MgSO4 7 H2O
100,00


NaCl
6996,00


NaHCO3
1200,00


Na2HPO4
71,02


NaH2PO4 2 H2O
70,87


ZnSO4 7 H2O
0,432



Citi komponenti
D-glikoze
3151,00


Hipoksantīns
2,40


HEPES
3574,50


Linolskābe
0,042


Lipoiskā skābe
0,105


Fenola sarkanais nātrija sāls
8,63


Putrescīns 2 HCl
0,081


Nātrija piruvāts
55,00


Timidīns
0,365

Accutase šūnu atdalīšanas šķīdums ar EDTA un fenolsarkano – 100 ml

Accutase ir gatavs lietošanai, sterili filtrēts šūnu atdalīšanas šķīdums, kas izstrādāts kā maiga alternatīva tripsīnam/EDTA, lai atdalītu piekļāvušās zīdītāju šūnas no standarta audu kultūras plastmasas traukiem un ar adhezīvu pārklātām virsmām. Tas apvieno proteolītisko un kolagenolītisko enzīmu aktivitāti sabalansētā sāls šķīdumā, lai nodrošinātu efektīvu, bet kontrolētu atdalīšanu, saglabājot šūnu virsmas proteīnus un veicinot augstu dzīvotspēju pēc pārneses un ātru atkārtotu piekļāvēšanos.

Accutase sastāvs ir balstīts uz Dulbecco fosfāta buferšķīdumu (DPBS) ar EDTA un fenolsarkano kā vizuālu pH indikatoru. Fermenti ir ne-zīdītāju un ne-baktēriju izcelsmes, padarot Accutase īpaši piemērotu cilmes šūnu pētniecībai, vakcīnu ražošanas procesiem un jebkurai lietošanai, kurā ir jāminimizē dzīvnieku vai mikrobiālas izcelsmes piesārņotāji. Šķīdums automātiski inhibējas 37 °C temperatūrā, tādēļ pēc atdalīšanas nav nepieciešams neitralizējošs reaģents vai serumu saturošs barotne – šūnas var pārnest tieši svaigā barotnē.

Galvenās īpašības

Lietošanai gatavs 1x sterili filtrēts šķidrums – nav nepieciešama atšķaidīšana vai atjaunošana
Kombinēta proteolītiskā un kolagenolītiskā enzīmu aktivitāte maigai disociācijai
Katra partija standartizēta atbilstoši noteiktam disociācijas aktivitātes līmenim, lai nodrošinātu partiju savstarpēju atbilstību
Enzīmu izcelsme nav saistīta ar zīdītājiem vai baktērijām
Automātiska inhibīcija 37 °C temperatūrā – nav nepieciešams neitralizējošs šķīdums
Formulēts Dulbecco PBS ar EDTA
Fenolsarkans iekļauts kā vizuāls pH indikators
pH 6,8–7,8


Tipiski pielietojumi
Accutase maigi disociē plašu klāstu adhezīvu un jutīgu šūnu tipu, tostarp cilvēka embrionālās cilmes šūnas (hESCs), cilvēka indukcijas pluripotentās cilmes šūnas (iPSCs), neironu cilmes šūnas, primāros neironus un rutīniski kultivētas adhezīvās šūnu līnijas, piemēram, HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 un A549. Tipiski lietošanas gadījumi ietver:

Rutīniska adhezīvo zīdītāju šūnu subkultivēšana un pasāžēšana
Maiga hESCs, iPSCs un citu jutīgu līniju atsevišķu šūnu atdalīšana
Paraugu sagatavošana plūsmas citometrijai un FACS analīzei
Šūnu virsmas marķieru analīze, kur svarīga ir epitopa integritāte
Šūnu migrācijas, proliferācijas un apoptozes analīzes
Miera stāvokļa testi, izmantojot seruma izsīkšanu un onkogēnu transfekcijas pētījumus
Audzēja šūnu un neirālo krastu šūnu migrācijas testi
Ražošanas apjoma palielināšana bioreaktoru darba plūsmās

Ikdienas darbā uzklājiet aptuveni 10 ml Accutase uz 75 cm2 kultūras virsmas un inkubējiet 5–10 minūtes istabas temperatūrā. Optimālais inkubācijas laiks jānosaka katrai šūnu līnijai atsevišķi, un tas nedrīkst pārsniegt vienu stundu. Pirms pievienošanas noskalojiet šūnu slāni ar Ca2+/Mg2+-nesaturošu sāls šķīdumu, piemēram, DPBS bez kalcija un magnija, lai noņemtu seruma atliekas un divvērtīgos katjonus.

Rīkošanās un uzglabāšana
Neatvērtu pudeli uzglabājiet sasaldētu -15 °C vai zemākā temperatūrā. Atkausējiet istabas temperatūrā vai nakti +2 °C līdz +8 °C temperatūrā. Neatkausējiet Accutase 37 °C ūdens vannā, jo paaugstināta temperatūra samazina fermentu aktivitāti. Pēc atkausēšanas šķīdumu var uzglabāt līdz 2 mēnešiem +2 °C līdz +8 °C temperatūrā; neuzglabājiet istabas temperatūrā. Pirms lietošanas reaģentu neiesildiet līdz 37 °C – pievienojiet to tieši izskalotām šūnām istabas temperatūrā. Lai nodrošinātu ilgu glabāšanas laiku, ieteicams izmantot vienreizējās lietošanas alikvotas, lai izvairītos no atkārtotiem atkausēšanas cikliem. Vienmēr strādājiet aseptiskos apstākļos.

Kvalitāte
Ražots saskaņā ar stingriem kvalitātes standartiem. Katra Accutase partija tiek sterilizēta ar filtrēšanu un pārbaudīta attiecībā uz sterilitāti, pH, izskatu un disociācijas aktivitāti, lai nodrošinātu vienmērīgu, reproducējamu darbību no partijas uz partiju.

Produkta specifikācijas



Specifikācija
Sīkāka informācija



Produkta veidsŠūnu atdalīšanas / disociācijas reaģents
FormātsSterili filtrēts šķidrums, gatavs lietošanai
Tilpums100 ml
Darba koncentrācija1x (gatavs lietošanai)
Enzīmu aktivitāteKombinēta proteolītiska un kolagenolītiska
Fermentu izcelsmeNe no zīdītājiem un ne no baktērijām
Buferu sistēmaDulbecco PBS ar EDTA
pH indikatorsFenolsarkans
pH diapazons6,8 – 7,8
IzskatsDzidrs, gaiši sarkans līdz oranžs šķīdums
Uzglabāšanas temperatūra-15 °C vai zemāka
Stabilitāte pēc atkausēšanasLīdz 2 mēnešiem temperatūrā no +2 °C līdz +8 °C
Ieteicamais lietošanas daudzums~10 ml uz 75 cm2 kultūras virsmas
Tipisks inkubācijas laiks5–10 minūtes istabas temperatūrā
Piegādes nosacījumiSasaldēts uz sausā ledus
Paredzētais lietojumsTikai pētniecības vajadzībām un turpmākai ražošanai



Sastāvs (sastāvs uz litru)



Sastāvdaļa
Koncentrācija (mg/l)




Neorganiskie sāļi

Nātrija hlorīds (NaCl)8000,00
Dinātrija hidrogēnfosfāts (Na2HPO4)1150,00
Kālija hlorīds (KCl)200,00
Kālija dihidrogēnfosfāts (KH2PO4)200,00

Citas sastāvdaļas

EDTA · 4Na (tetranātrija EDTA)220,00
Fenolsarkans3,00
Patentēts fermentu maisījums (proteolītiska un kolagenolītiska aktivitāte)1x



Accutase ir Innovative Cell Technologies, Inc. reģistrēta preču zīme.

Produkta pārskats
Tilpums: 100 ml Uzglabāšana: ≤-15°C Sterilitāte: Sterilitāte: Sterili jāfiltrē
Antibiotiku/antimikotisko līdzekļu šķīdums (100x ) ir sterils, lietošanai gatavs koncentrāts, kas paredzēts mikrobioloģiskā piesārņojuma risku samazināšanai šūnu kultūru un saistītās laboratorijās. Šis 100x šķīdums satur vispāratzītu penicilīna, streptomicīna un amfotericīna B kombināciju, kas nodrošina plaša spektra antimikrobiālu iedarbību pret grampozitīvām un gramnegatīvām baktērijām, raugiem un pavedienveida sēnītēm. Preparāts ir piemērots lietošanai eikariotisko šūnu kultūrās, bakteriālajās barotnēs un citās sistēmās, kas jutīgas pret piesārņojumu, veicinot tīras un konsekventas laboratorijas darbības.
Lietošana un priekšrocības Šis šķīdums, kas optimizēts ikdienas pētniecības protokoliem, tiek plaši izmantots, lai uzturētu aseptiskus apstākļus šūnu kultūru darba plūsmās. Tas nodrošina uzticamu veiktspēju vidē, kas jutīga pret piesārņojumu, palīdzot pētniekiem samazināt mikrobu pārmērīgas augšanas risku, neapdraudot šūnu veselību vai eksperimentālo reproducējamību. Sterilā, filtrētā formula novērš nepieciešamību pēc papildu šķīdināšanas posmiem, veicinot racionalizētu barotņu sagatavošanu un samazinot mainīgumu ikdienas laboratorijas procedūrās.
Lietošana un saderība Lai sasniegtu standarta darba koncentrācijas, atšķaidiet šķīdumu 1:100 pilnā barotnē. Produkts ir saderīgs ar plašu zīdītāju šūnu līniju un pamatnes barotņu klāstu. Pastāvīga krājumu pieejamība ļauj pētniekiem gūt labumu no uzticamas piegādes nepārtrauktības un vienkāršotas loģistikas plānošanas. Lai saglabātu šķīduma stabilitāti, tas jāuzglabā ≤ -15 °C temperatūrā un jāaizsargā no atkārtotiem sasalšanas un atkausēšanas cikliem. Tikai izmantošanai pētniecībā. Nav paredzēts lietošanai diagnostikas vai terapeitiskās procedūrās. Nav paredzēts lietošanai cilvēkiem vai dzīvniekiem.

Fosfātu buferētais fizioloģiskais šķīdums (PBS)
Fosfātu buferšķīdums (PBS) ir plaši izmantots buferšķīdums bioloģiskajos un ķīmiskajos pētījumos. Tam ir izšķiroša nozīme pH līdzsvara un osmolaritātes uzturēšanā dažādu eksperimentālu procedūru laikā, tostarp audu apstrādes un šūnu kultivēšanas laikā. Mūsu PBS šķīdums ir rūpīgi izstrādāts no augstas tīrības pakāpes sastāvdaļām, lai nodrošinātu stabilitāti un uzticamību katrā eksperimentā. Mūsu PBS šķīduma osmolaritāte un jonu koncentrācija precīzi atbilst cilvēka ķermeņa osmolaritātei un jonu koncentrācijai, tāpēc tas ir izotonisks un nav toksisks vairumam šūnu.

Mūsu PBS šķīduma sastāvs
Mūsu PBS šķīdums ir īpaši tīru fosfātu buferšķīdumu un fizioloģisko šķīdumu maisījums ar pielāgotu pH. 1X darba koncentrācijā tas satur:

8000 mg/l nātrija hlorīda (NaCl)
200 mg/l kālija hlorīda (KCl)
1150 mg/L nātrija fosfāts divbāziskais bezūdens (Na2HPO4)
200 mg/L Kālija fosfāts vienbāziskais bezūdens (KH2PO4)

Šis sastāvs nodrošina optimālu pH un jonu līdzsvaru, kas piemērots plašam bioloģisko lietojumu klāstam.

Mūsu PBS šķīduma lietojumi
Mūsu PBS šķīdums ir ideāli piemērots dažādiem lietojumiem bioloģiskajos pētījumos. Tā izotoniskās un netoksiskās īpašības padara to piemērotu vielu atšķaidīšanai un šūnu konteineru skalošanai. EDTA saturoši PBS šķīdumi ir efektīvi, lai atdalītu pielipušās un saplūdušās šūnas. Tomēr PBS nedrīkst pievienot divvērtīgos metālus, piemēram, cinku, jo tas var izraisīt nogulsnēšanos. Šādos gadījumos ieteicams izmantot Good's buferus. Turklāt mūsu PBS šķīdums ir pieņemama alternatīva vīrusu transportēšanas barotnei RNS vīrusu, tostarp SARS-CoV-2, transportēšanai un uzglabāšanai.

Kvalitātes kontrole

Sterili filtrēts


Uzglabāšana un glabāšanas laiks

Uzglabāt no gaismas pasargātā +2 °C līdz +25 °C temperatūrā.
Pēc atvēršanas uzglabāt 2°C līdz 25°C temperatūrā un izmantot 24 mēnešu laikā.


Pārvadāšanas nosacījumi

Apkārtējā temperatūra


Uzturēšana

Uzglabāt ledusskapī no +2°C līdz +8°C temperatūrā, tumsā. Izvairīties no sasaldēšanas un biežas sasilšanas līdz +37°C, jo tas samazina produkta kvalitāti.
Nesildiet barotni augstāk par 37°C un neizmantojiet nekontrolētus siltuma avotus, piemēram, mikroviļņu krāsnis.
Ja jāizmanto tikai daļa barotnes, pirms lietošanas izņemiet nepieciešamo daudzumu un uzsildiet to līdz istabas temperatūrai.

Sastāvs



Kategorija
Sastāvdaļas
Koncentrācija (mg/l)


Sāls
Kālija hlorīds
200



Kālija fosfāts monobāziskais bezūdens
200



Nātrija hlorīds
8000



Nātrija fosfāts divbāziskais bezūdens
1150