HaCaT 세포

1. 오래된 배지를 폐기합니다: 플라스크에서 오래된 배양액을 조심스럽게 제거합니다.
2. 세포를 세척합니다: 칼슘과 마그네슘이 없는 인산 완충 식염수(PBS) 3~5ml를 T25 플라스크에, 5~10ml를 T75 플라스크에 추가하여 부착된 세포를 헹굽니다.
3. EDTA 용액을 추가합니다: 갓 준비한 0.05% EDTA 용액으로 세포 층을 완전히 덮습니다. T25 플라스크의 경우 1-2ml, T75 플라스크의 경우 2.5ml를 사용합니다.
4. 배양: 플라스크를 37°C에서 10분간 배양합니다.
5. 트립신/EDTA 또는 트립플 익스프레스 용액을 추가합니다: 배양 후, 새로 준비한 트립신/EDTA 용액(0.05% 트립신, 0.025% EDTA) 또는 TrypLE Express를 플라스크에 추가하여 세포층이 완전히 덮이도록 합니다. T25 플라스크의 경우 1ml, T75 플라스크의 경우 2.5ml를 사용합니다. (참고: TrypLE Express를 사용하는 경우 3단계와 4단계는 생략할 수 있습니다.)
6. 분리 모니터링: 현미경으로 세포를 관찰합니다. 세포는 1~5분 이내에 분리되어야 합니다.
7. 트립신을 중화합니다: 세포가 분리되는 즉시 태아 소 혈청(FBS)이 포함된 세포 배양 배지를 추가하여 트립신 활성을 중화합니다.
8. 세포를 옮깁니다: 세포 현탁액을 신선한 배양액으로 미리 채워진 새 플라스크에 분주합니다.

1. 운송 중 최적의 온도를 유지하기 위해 세포가 드라이아이스로 배송되므로 배송 시 바이알이 완전히 얼지 않았는지 확인합니다.

2. 수령 후 즉시 -150°C 이하의 온도에서 냉동 바이알을 보관하여 세포 무결성을 보존하거나, 즉시 배양이 필요한 경우 3단계로 진행합니다.

3. 즉시 배양하려면 바이알을 깨끗한 물과 항균제를 넣은 37°C 수조에 담그고 작은 얼음 덩어리가 남을 때까지 40~60초 동안 부드럽게 저어 빠르게 해동합니다.

4. 이후 모든 단계를 플로우 후드에서 멸균 조건으로 수행하며, 개봉하기 전에 70% 에탄올로 냉동 바이알을 소독합니다.

5. 소독한 바이알을 조심스럽게 열고 세포 현탁액을 8ml의 실온 배양 배지가 들어 있는 15ml 원심분리기 튜브에 옮겨 부드럽게 섞습니다.

6. 혼합물을 300 x g에서 3분간 원심분리하여 세포를 분리하고 잔류 동결 배지가 포함된 상층액을 조심스럽게 폐기합니다.

7. 세포 펠릿을 신선한 배양액 10ml에 부드럽게 다시 부유시킵니다. 부착성 세포의 경우 현탁액을 두 개의 T25 배양 플라스크에 나누고, 현탁 배양의 경우 모든 배지를 하나의 T25 플라스크에 옮겨 효과적인 세포 상호 작용과 성장을 촉진합니다.

8. 세포주의 지속적인 성장과 유지를 위해 확립된 하위 배양 프로토콜을 준수하여 신뢰할 수 있는 실험 결과를 보장합니다.

37°C, 5%_CO2, 습한 대기.

해동 후 최적의 부착력과 생존력을 위해 콜라겐 코팅 플라스크나 플레이트를 사용하는 것이 좋습니다.

냉동 보존 세포주는 운송 중 약 -78°C를 유지할 수 있는 충분한 냉매가 포함된 검증된 단열 포장에 드라이아이스를 넣어 배송됩니다. 수령 즉시 용기를 검사하고 바이알을 지체 없이 적절한 보관 장소로 옮깁니다.

냉동 보존 세포주는 운송 중 약 -78°C를 유지할 수 있는 충분한 냉매가 포함된 검증된 단열 포장에 드라이아이스를 넣어 배송됩니다. 수령 즉시 용기를 검사하고 바이알을 지체 없이 적절한 보관 장소로 옮깁니다.

장기 보존을 위해서는 바이알을 약 -150°C에서 -196°C의 증기상 액체 질소에 넣으세요. 80°C에서 보관하는 것은 액체 질소로 옮기기 전 짧은 중간 단계로만 허용됩니다.

마이코플라스마 오염은 PCR 기반 분석법과 발광 기반 마이코플라스마 검출법을 모두 사용하여 배제합니다.

박테리아, 곰팡이 또는 효모 오염이 없는지 확인하기 위해 세포 배양은 매일 육안 검사를 거칩니다.