Pubblicato: 2023 | Ultimo aggiornamento: maggio 2026
Comprendere il "numero di passaggi"
Il concetto di "numero di passaggi" è fondamentale nella coltura cellulare e si riferisce al numero di volte in cui una linea cellulare è stata subcoltivata o trasferita in un nuovo terreno di coltura dopo il suo iniziale ripristino dalla crioconservazione o la ricezione da una banca di cellule di riferimento. Questo parametro è fondamentale per tracciare il lignaggio e la storia di una coltura cellulare.
Panoramica del processo
- Nella pratica di routine della coltura cellulare, quando le cellule raggiungono una certa densità, vengono trasferite in un nuovo terreno per sostenere la crescita e prevenire la sovraconfluenza. Ciascuno di questi trasferimenti viene registrato come un passaggio.
- Tradizionalmente, quando ricevevamo una linea cellulare, ad esempio al passaggio 60 dal depositante, continuavamo da quel numero di passaggio, incrementandolo ad ogni subcoltura. Questa pratica, pur mantenendo un filo storico, spesso portava a numeri di passaggio elevati fin dall'inizio. Dato l'uso esteso e spesso decennale di alcune linee cellulari, come la linea HeLa istituita nel 1951, non è fattibile determinare il numero totale di passaggi dall'inizio della linea cellulare.
- Per migliorare la chiarezza e la qualità dei nostri processi di coltura cellulare, all'inizio del 2023 abbiamo rivisto questo approccio. Ora, quando avviamo una coltura da una nuova fiala, indipendentemente dal numero di passaggi del depositante, azzeriamo il conteggio e ricominciamo da zero dal passaggio uno per ogni lotto prodotto.
Motivazione
Il passaggio è una procedura fondamentale per garantire la salute e l'utilità delle colture cellulari per la ricerca. Quando le cellule crescono eccessivamente, subiscono un'inibizione da contatto che riduce il loro tasso di proliferazione, il che può influire negativamente sui risultati sperimentali. Per mitigare questi problemi, Cytion implementa controlli rigorosi sulle densità cellulari alle quali avviene la subcoltura, mantenendo così bassi i numeri di passaggio durante la produzione delle proprie linee cellulari. Questa precauzione aiuta a prevenire gli effetti negativi di un numero eccessivo di passaggi, quali anomalie morfologiche, variazioni del tasso di crescita e deriva genetica, che possono far sì che le cellule differiscano notevolmente dal loro stato originale. Periodi prolungati di subcoltura possono inoltre aumentare il rischio di contaminazione microbica.
La nostra promessa
Garantiamo che le cellule fornite ai ricercatori siano il più possibile vicine al corredo genetico e alle caratteristiche fenotipiche originali, migliorando l'affidabilità dei dati sperimentali. Inoltre, documentando meticolosamente ogni passaggio, Cytion contribuisce alla tracciabilità e alla riproducibilità della ricerca, un impegno che riflette gli elevati standard di pratica nella coltura cellulare. I ricercatori sono incoraggiati a mantenere registrazioni accurate dei numeri di passaggio, sia sui recipienti di coltura che nei loro quaderni di laboratorio, come riferimento per lo stato di salute e la storia delle loro colture cellulari.
Suggerimenti ed errori comuni
Seguire il protocollo corretto è essenziale, ma comprendere le insidie comuni può essere altrettanto importante. Le procedure di coltura cellulare sono sensibili a piccole deviazioni nella tecnica, nei tempi e nella qualità dei reagenti. I seguenti consigli riflettono le migliori pratiche raccomandate dal team scientifico di Cytion sulla base di una vasta esperienza nella coltura cellulare.
- Preriscaldare sempre i reagenti a 37 °C prima dell'uso per ridurre al minimo lo shock termico sulle cellule.
- Lavorare rapidamente ma con attenzione: ridurre al minimo il tempo in cui le cellule rimangono fuori dall'incubatore.
- Utilizzare reagenti certificati e testati per il micoplasma per evitare contaminazioni che possano compromettere i risultati sperimentali.
- Documentare ogni fase, inclusi il numero di passaggi, la data e le osservazioni sulla morfologia cellulare.
- Convalidare il protocollo con un piccolo esperimento pilota prima di passare alla scala industriale per evitare di sprecare costosi reagenti.
Reagenti Cytion consigliati
Cytion offre una gamma di reagenti per colture cellulari convalidati, progettati specificamente per supportare questo protocollo. Tutti i reagenti sono testati per verificarne le prestazioni con linee cellulari di uso comune e sono disponibili con documentazione completa. Visita cytion.com/Media-Reagents per sfogliare il portafoglio completo.