Linea cellulare HT22
HT22 è una linea cellulare neuronale murina comunemente impiegata nella ricerca neuroscientifica. È preziosa per lo studio dei disturbi neurodegenerativi e per testare potenziali terapie o trattamenti neuroprotettivi. Inoltre, le cellule HT22 sono sensibili al glutammato e vengono quindi utilizzate per studiare la tossicità indotta dal glutammato o il danno neuronale.
- Terreno di coltura
- Per la coltura delle cellule HT22 si utilizza il terreno DMEM. Esso viene integrato con 10% di FBS, 4,5 g/L di glucosio, 4 mM di L-glutammina, 1,5 g/L di NaHCO3 e 1,0 mM di piruvato di sodio per una crescita cellulare ottimale.
- Tempo di raddoppio
- Il tempo di raddoppio delle cellule HT22 è di circa 15 ore.
- Tipo di crescita
- Le cellule HT22 sono aderenti.
- Livello di biosicurezza
- BSL-1
- Disponibile presso
- Cytion — Ordina HT22
Questo articolo mette in evidenza gli aspetti fondamentali delle cellule HT22 che possono aiutarti nel tuo lavoro di ricerca. Tratterà principalmente:
- Caratteristiche generali e origine delle cellule HT22
- Informazioni sulla coltura della linea cellulare HT22
- Vantaggi e svantaggi della linea cellulare HT22
- Applicazioni di ricerca della linea cellulare HT22
- Pubblicazioni di ricerca sulle cellule HT22
- Risorse per le cellule HT22: protocolli, video e altro
Caratteristiche generali e origine delle cellule HT22
Questa sezione dell'articolo farà luce sull'origine e sulle caratteristiche generali delle cellule HT22. È necessario conoscere queste informazioni su una linea cellulare prima di iniziare a lavorarci. Qui scoprirai: Cosa sono le cellule HT22? Qual è la morfologia delle cellule dell'ippocampo HT22? Qual è la dimensione delle cellule HT22?
HT22 è una linea cellulare continua derivata dalla regione dell'ippocampo del cervello del topo. Si tratta di un sottoclone della linea cellulare parentale HT-4 sviluppata mediante l'immortalizzazione di tessuti neuronali murini tramite un antigene T del poliomavirus sensibile alla temperatura, il virus simiano 40 (SV40).
Queste cellule differiscono dalle cellule ippocampali mature in quanto prive di recettori del glutammato e colinergici, a differenza dei neuroni maturi di origine ippocampale. Pertanto, non sono adatte per studi di ricerca relativi alla memoria [1].
Le cellule HT22 hanno un aspetto simile a quello delle cellule epiteliali.
Informazioni sulla coltura della linea cellulare HT22
Le cellule HT22 sono utilizzate nei laboratori di ricerca nel campo delle neuroscienze. Prima di coltivare queste cellule, i ricercatori cercano informazioni essenziali sulla coltura cellulare che rendano il loro lavoro facile ed efficiente. Questa sezione tratta tutti i punti chiave per la coltura delle cellule HT22. Imparerete: qual è il tempo di raddoppio delle cellule HT22? Come si coltivano le cellule HT22? Qual è il protocollo di coltura delle cellule HT22? Qual è il terreno di coltura delle cellule HT22?
Punti chiave per la coltura delle cellule HT22
Tempo di raddoppio:
Il tempo di raddoppio delle cellule HT22 è di circa 15 ore.
Aderenzi o in sospensione:
Le cellule HT22 sono aderenti.
Rapporto di subcoltura:
Il rapporto di subcoltura per le cellule dell'ippocampo HT22 è compreso tra 1:3 e 1:6. In breve, il terreno di coltura viene rimosso e le cellule aderenti vengono risciacquate con PBS 1x. Si aggiunge la soluzione di dissociazione Accutase nel pallone e le cellule vengono incubate per 8-10 minuti a temperatura ambiente. Successivamente, si aggiunge terreno di coltura fresco e le cellule vengono raccolte in una fiala per la centrifugazione. Il pellet cellulare ottenuto viene accuratamente risospeso e le cellule vengono trasferite in un pallone di coltura per la crescita.
Terreno di crescita:
Per la coltura delle cellule HT22 si utilizza il terreno DMEM. Esso viene integrato con 10% di FBS, 4,5 g/L di glucosio, 4 mM di L-glutammina, 1,5 g/L di NaHCO3 e 1,0 mM di piruvato di sodio per una crescita cellulare ottimale.
Condizioni di crescita:
Le colture cellulari HT22 vengono mantenute in un incubatore umidificato (temperatura 37 °C) con un apporto di CO2 al 5%.
Conservazione:
Le cellule HT22 congelate possono essere conservate a temperature inferiori a -150 °C, sia nella fase vapore dell'azoto liquido che in un congelatore elettrico a bassissima temperatura per un lungo periodo.
Processo di congelamento e terreno di coltura:
Le cellule HT22 possono essere congelate in terreni di coltura CM-1 o CM-ACF utilizzando un metodo di congelamento lento. Questo processo consente una diminuzione della temperatura del campione di solo 1 °C al minuto, protegge le cellule dallo shock termico e aiuta a mantenerne la vitalità.
Processo di scongelamento:
Le cellule vengono scongelate in un bagno d'acqua a 37 °C per 40-60 secondi fino a quando non rimane un piccolo grumo di ghiaccio. Successivamente, si aggiunge il terreno di coltura alle cellule e queste vengono centrifugate per eliminare i componenti del terreno di congelamento. Il pellet cellulare viene risospeso e le cellule vengono versate in una nuova fiasca contenente terreno di coltura. Successivamente, le cellule vengono incubate a 37 °C in un incubatore per almeno 24 ore.
Livello di biosicurezza:
Per la coltura delle cellule HT22 sono obbligatori laboratori di livello di biosicurezza 1.
Vantaggi e svantaggi della linea cellulare HT22
Le cellule dell'ippocampo HT22 presentano alcuni pro e contro che le differenziano dalle altre linee cellulari neuronali. Di seguito sono riportati alcuni vantaggi e svantaggi degni di nota di questa linea cellulare.
Vantaggi
I vantaggi della linea cellulare neuronale murina HT22 sono:
-
Rapido tasso di crescita
Le cellule HT22 hanno un tempo di raddoppio di 15 ore, il che consente una sperimentazione rapida ed efficiente e favorisce l'ottenimento tempestivo dei risultati della ricerca.
-
Immortalizzazione
HT22 è una linea cellulare immortalizzata, che garantisce una crescita continua per lunghi periodi. Ciò assicura una disponibilità costante di cellule, riduce tempi e costi e facilita esperimenti a lungo termine con risultati coerenti.
Svantaggi
Gli svantaggi delle cellule HT22 sono:
-
Origine murina
La linea cellulare HT22 è stata derivata dal tessuto dell'ippocampo del cervello di topo, il che potrebbe non rappresentare appieno la complessità della fisiologia e del comportamento delle cellule neuronali umane, limitandone la rilevanza traslazionale.
4. Applicazioni di ricerca della linea cellulare HT22
Le cellule HT22 sono ampiamente utilizzate nella ricerca neurobiologica. In questa sezione dell'articolo vengono discusse alcune applicazioni promettenti di questa linea cellulare:
- Ricerca nel campo delle neuroscienze: le cellule HT22 sono ampiamente impiegate nella ricerca sulle malattie neurodegenerative, ovvero il morbo di Alzheimer e il morbo di Parkinson. Sono considerate un prezioso strumento di ricerca per lo studio della neurotossicità e dei meccanismi di stress ossidativo correlati a queste malattie. Una ricerca condotta nel 2020 ha scoperto che la via PI3K/AKT/CREB è coinvolta nella tossicità neurale indotta dall'iperglicemia nelle cellule HT22 [2]. Allo stesso modo, uno studio recente ha suggerito che la via Nrf2/HO-1 e l'asse di segnalazione NF-κB svolgono un ruolo significativo nella tossicità dell'amiloide beta nelle cellule HT22 [3].
- Screening farmacologico: le cellule HT22 sono ampiamente utilizzate per test e screening farmacologici. Aiutano i ricercatori a identificare potenziali agenti terapeutici che mostrano effetti neuroprotettivi per combattere le malattie neurodegenerative. Uno studio condotto nel 2019 ha esplorato il potenziale neuroprotettivo del composto tetraidrocurcumina nelle cellule dell'ippocampo HT22 trattate con glutammato. In questo caso, il glutammato induce stress ossidativo nelle cellule HT22 e provoca la morte cellulare attivando le proteine chinasi attivate dai mitogeni [4].
5. Pubblicazioni scientifiche relative alle cellule HT22
Ecco alcuni articoli di ricerca interessanti che trattano la linea cellulare HT22:
Questo studio pubblicato sull'International Journal of Molecular Medicine (2019) ha suggerito il potenziale neuroprotettivo della crocina, un composto isolato dal Crocus sativus L., nelle cellule HT22 danneggiate dal L-glutammato.
Questa pubblicazione su Neuropharmacology (2018) ha riportato che i derivati dell'ossindolo proteggono dalla morte cellulare delle cellule HT22 indotta dallo stress ossidativo.
Questo articolo di ricerca è stato pubblicato sul Journal of Ginseng Research nel 2019. Questo studio ha esplorato gli effetti neuroprotettivi di un prodotto naturale, il ginsenoside Rb2, utilizzando la linea cellulare HT22. Lo studio ha rilevato che il ginsenoside Rb2 ha ridotto efficacemente lo stress ossidativo indotto dal glutammato e la morte cellulare nelle cellule dell'ippocampo murino HT22.
Questo studio pubblicato su Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) ha valutato il potenziale citotossico delle nanoparticelle d'argento nella linea cellulare HT22.
La ferrostatina-1 protegge le cellule HT-22 dalla tossicità ossidativa
Questo articolo di ricerca è stato pubblicato nel 2020 su Neural regeneration research. Ha suggerito che la ferrostatina-1, un inibitore della ferroptosi, previene la tossicità ossidativa nelle cellule dell'ippocampo HT22.
Risorse per le cellule HT22: protocolli, video e altro
Alcune risorse online sulle cellule HT22 spiegano i loro protocolli di trasfezione, differenziazione e coltura cellulare:
- Trasfezione delle cellule HT22: questo documento contiene un protocollo ottimizzato per la trasfezione delle cellule HT22 in piastre di coltura cellulare a 24 e 96 pozzetti.
- Differenziazione delle cellule HT22: questo articolo fornisce una guida completa sul protocollo di differenziazione delle cellule HT22.
Il seguente link contiene il protocollo di coltura cellulare HT22:
- Subcoltura delle cellule HT22: questo link vi aiuterà a conoscere il protocollo di subcoltura per la linea cellulare HT22. Inoltre, vi aiuterà a conoscere il protocollo per indurre la neurotossicità nelle cellule.
- Cellule dell'ippocampo HT22: questo sito web contiene molte informazioni utili sul tempo di raddoppio delle cellule HT22, sui terreni di coltura e sui protocolli di coltura cellulare.
Riferimenti
- He, M., et al., La differenziazione rende i neuroni HT22 suscettibili all'eccitotossicità. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., La fisetina previene la neurotossicità indotta dall'alto livello di glucosio nelle cellule HT22 attraverso la via di segnalazione PI3K/Akt/CREB. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Effetti protettivi della berberina contro la neurotossicità indotta dal β-amiloide nelle cellule HT22 attraverso la via Nrf2/HO-1. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Effetti neuroprotettivi della tetraidrocurcumina contro lo stress ossidativo indotto dal glutammato nelle cellule HT22 dell'ippocampo. Molecules, 2019. 25(1): p. 144.