Linea cellulare HT22
HT22 è una linea cellulare neuronale murina comunemente utilizzata nella ricerca sulle neuroscienze. È preziosa per studiare i disturbi neurogenerativi e per testare potenziali terapie o trattamenti neuroprotettivi. Inoltre, le cellule HT22 sono sensibili al glutammato e vengono quindi utilizzate per studiare la tossicità o il danno neuronale indotto dal glutammato.
Questo articolo mette in evidenza gli aspetti essenziali delle cellule HT22 che possono aiutarvi nel vostro lavoro di ricerca. Discuterà principalmente di:
- Caratteristiche generali e origine delle cellule HT22
- Informazioni sulla coltura della linea cellulare HT22
- Vantaggi e svantaggi della linea cellulare HT22
- Applicazioni di ricerca della linea cellulare HT22
- Pubblicazioni di ricerca sulle cellule HT22
- Risorse per le cellule HT22: Protocolli, video e altro
1. Caratteristiche generali e origine delle cellule HT22
Questa sezione dell'articolo farà luce sull'origine e sulle caratteristiche generali delle cellule HT22. Conoscere queste informazioni su una linea cellulare è necessario prima di iniziare a lavorare su di essa. Qui di seguito imparerete: Cosa sono le cellule HT22? Qual è la morfologia delle cellule ippocampali HT22? Quali sono le dimensioni delle cellule HT22?
HT22 è una linea cellulare continua derivata dalla regione dell'ippocampo del cervello di topo. Si tratta di un sottoclone della linea cellulare parentale HT-4, sviluppata mediante immortalizzazione di tessuti neuronali murini attraverso l'antigene T del poliomavirus simian virus 40 (SV40) sensibile alla temperatura.
Queste cellule differiscono dalle cellule mature dell'ippocampo in quanto mancano di recettori glutammatici e colinergici come i neuroni maturi di origine ippocampale. Pertanto, non sono adatte per gli studi sulla memoria [1].
Le cellule HT22 hanno un aspetto simile alle cellule epiteliali.
2. Informazioni sulla coltura della linea cellulare HT22
Le cellule HT22 sono utilizzate nei laboratori di ricerca sulle neuroscienze. Prima di coltivare queste cellule, i ricercatori cercano informazioni essenziali sulla coltura cellulare che rendano il loro lavoro facile ed efficiente. Questa sezione copre tutti i punti chiave per la coltura delle cellule HT22. Saprete che: Qual è il tempo di raddoppio delle cellule HT22? Come si coltivano le cellule HT22? Qual è il protocollo di coltura delle cellule HT22? Qual è il terreno di coltura delle cellule HT22?
Punti chiave per la coltura delle cellule HT22
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Tempo di raddoppiamento: |
Il tempo di raddoppiamento delle cellule HT22 è di circa 15 ore. |
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Aderenti o in sospensione: |
Le cellule HT22 sono aderenti. |
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Rapporto di subcoltivazione: |
Il rapporto di subcoltivazione per le cellule ippocampali HT22 è compreso tra 1:3 e 1:6. In breve, il terreno viene rimosso e le cellule aderenti vengono risciacquate con 1 x PBS. La soluzione dissociante di accutasi viene aggiunta alla fiasca e le cellule vengono incubate per 8-10 minuti a temperatura ambiente. Successivamente, si aggiunge del terreno di coltura fresco e le cellule vengono raccolte in una fiala per la centrifugazione. Il pellet cellulare ottenuto viene accuratamente risospeso e le cellule vengono distribuite in una fiasca di coltura per la crescita. |
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Terreno di coltura: |
Per la coltura delle cellule HT22 si utilizza il terreno DMEM. È integrato con il 10% di FBS, 4,5 g/L di glucosio, 4 mM di L-Glutamina, 1,5 g/L di NaHCO3 e 1,0 mM di piruvato di sodio per una crescita cellulare ottimale. |
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Condizioni di crescita: |
Le colture cellulari HT22 sono mantenute in un incubatore umidificato (temperatura di 37 °C) con unapporto di CO2 del 5%. |
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Conservazione: |
Le cellule HT22 congelate possono essere conservate a lungo termine a una temperatura inferiore a -150 °C nella fase vapore dell'azoto liquido o in un congelatore elettrico a bassissima temperatura. |
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Processo e terreno di congelamento: |
Le cellule HT22 possono essere congelate nei terreni CM-1 o CM-ACF utilizzando un metodo di congelamento lento. Questo processo consente di ridurre la temperatura del campione di solo 1 °C al minuto, protegge le cellule dagli shock e contribuisce a mantenerne la vitalità. |
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Processo di scongelamento: |
Le cellule vengono scongelate in un bagno d'acqua a 37 °C per 40-60 secondi, finché non rimane un piccolo grumo di ghiaccio. Successivamente, si aggiunge il terreno di coltura alle cellule e le si centrifuga per eliminare i componenti del terreno di congelamento. Il pellet cellulare viene risospeso e le cellule vengono versate nella nuova fiasca contenente il terreno di coltura. Successivamente, le cellule vengono incubate a 37 °C in un incubatore per almeno 24 ore. |
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Livello di biosicurezza: |
Per la coltura delle cellule HT22 è obbligatorio un laboratorio di livello di biosicurezza 1. |
3. Vantaggi e svantaggi della linea cellulare HT22
Le cellule ippocampali HT22 presentano alcuni vantaggi e svantaggi che le differenziano da altre linee cellulari neuronali. Di seguito sono riportati alcuni vantaggi e svantaggi di questa linea cellulare.
Vantaggi
I vantaggi della linea cellulare neuronale murina HT22 sono:
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Velocità di crescita
Le cellule HT22 hanno un tempo di raddoppiamento di 15 ore, che consente una sperimentazione rapida ed efficiente e aiuta a ottenere risultati di ricerca tempestivi.
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Immortalizzazione
HT22 è una linea cellulare immortalizzata, che garantisce una crescita continua per periodi prolungati. Ciò fornisce una disponibilità costante di cellule, riduce i tempi e i costi e facilita gli esperimenti a lungo termine con risultati coerenti.
Svantaggi
Gli svantaggi delle cellule HT22 sono
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Origine murina
La linea cellulare HT22 è stata derivata dal tessuto dell'ippocampo del cervello di un topo, che potrebbe non rappresentare appieno la complessità della fisiologia e del comportamento delle cellule neuronali umane, limitandone la rilevanza traslazionale.
4. Applicazioni di ricerca della linea cellulare HT22
Le cellule HT22 sono ampiamente utilizzate nella ricerca neurobiologica. In questa sezione dell'articolo vengono discusse alcune promettenti applicazioni di questa linea cellulare:
- Ricerca sulle neuroscienze: Le cellule HT22 sono ampiamente utilizzate nella ricerca sulle malattie neurodegenerative, come il morbo di Alzheimer e il morbo di Parkinson. Sono considerate un valido strumento di ricerca per studiare la neurotossicità e i meccanismi di stress ossidativo legati a queste malattie. Una ricerca condotta nel 2020 ha rilevato che la via PI3K/AKT/CREB è coinvolta nella tossicità neurale indotta dall'iperglicemia nelle cellule HT22 [2]. Analogamente, uno studio recente ha proposto che la via Nrf2/HO-1 e l'asse di segnalazione NF- κB svolgano ruoli significativi nella tossicità da beta amiloide delle cellule HT22 [3].
- Screening dei farmaci: Le cellule HT22 sono ampiamente utilizzate per test e screening di farmaci. Aiutano i ricercatori a identificare potenziali agenti terapeutici con effetti neuroprotettivi per combattere le malattie neurodegenerative. Uno studio condotto nel 2019 ha esplorato il potenziale neuroprotettivo del composto tetraidro curcumina in cellule ippocampali HT22 trattate con glutammato. In questo caso, il glutammato induce stress ossidativo nelle cellule HT22 e causa la morte cellulare attivando le protein-chinasi attivate dal mitogeno [4].
5. Pubblicazioni di ricerca con cellule HT22
Ecco alcuni interessanti lavori di ricerca che hanno come protagonista la linea cellulare HT22:
Questo studio pubblicato sull'International Journal of Molecular Medicine (2019) ha proposto il potenziale neuroprotettivo della crocina, un composto isolato dal Crocus sativus L., nellecellule HT22danneggiate dalL-glutammato.
Questa pubblicazione su Neuropharmacology (2018) riporta che i derivati dell'ossindolo proteggono dalla morte cellulare HT22 indotta dallo stress ossidativo.
Questo documento di ricerca è stato pubblicato sul Journal of Ginseng Research nel 2019. Questo studio ha esplorato gli effetti neuroprotettivi di un prodotto naturale, il ginsenoside Rb2, utilizzando la linea cellulare HT22. Lo studio ha rilevato che il ginsenoside rb2 ha ridotto efficacemente lo stress ossidativo e la morte cellulare indotti dal glutammato nelle cellule ippocampali murine HT22.
Questo studio pubblicato su Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) ha valutato il potenziale citotossico delle nanoparticelle d'argento nella linea cellulare HT22.
La ferrostatina-1 protegge le cellule HT-22 dalla tossicità ossidativa
Questo articolo di ricerca è stato pubblicato nel 2020 nella rivista Neural regeneration research. Proponeva che la ferrostatina-1, un inibitore della ferroptosi, prevenisse la tossicità ossidativa nelle cellule ippocampali HT22.
6. Risorse per le cellule HT22: Protocolli, video e altro
Alcune risorse online sulle cellule HT22 spiegano i loro protocolli di trasfezione, differenziazione e coltura cellulare:
- Trasfezione HT22: Questo documento contiene un protocollo ottimizzato per la trasfezione di HT22 in piastre di coltura cellulare a 24 e 96 pozzetti.
- Differenziamento delle cellule HT22: Questo articolo fornisce una guida completa al protocollo di differenziazione delle cellule HT22.
Il seguente link contiene il protocollo di coltura delle cellule HT22:
- Sottocoltura delle cellule HT22: Questo link vi aiuterà a conoscere il protocollo di subcoltivazione per la linea cellulare HT22. Inoltre, vi aiuterà ad apprendere il protocollo per indurre neurotossicità nelle cellule.
- Cellule ippocampali HT22: Questo sito web contiene molte informazioni utili sul tempo di raddoppio delle cellule HT22, sui mezzi di coltura e sui protocolli di coltura cellulare.
Riferimenti
- He, M., et al., La differenziazione rende suscettibili all'eccitotossicità i neuroni HT22. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., La fisetina previene le cellule HT22 dalla neurotossicità indotta dal glucosio elevato attraverso la via di segnalazione PI3K/Akt/CREB. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Effetti protettivi della berberina contro la neurotossicità indotta dalla β-amiloide in cellule HT22 attraverso la via Nrf2/HO-1. Chimica bioorganica, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Effetti neuroprotettivi della tetraidrocurcumina contro lo stress ossidativo indotto dal glutammato nelle cellule HT22 dell'ippocampo. Molecole, 2019. 25(1): p. 144.