Linea cellulare HT-29

HT-29 è una linea cellulare di cancro del colon-retto umano con un'ampia gamma di applicazioni per la ricerca sul cancro e la tossicologia. Ad esempio, queste cellule sono sensibili ai trattamenti chemioterapici standard contro il cancro del colon-retto. Inoltre, la linea cellulare HT-29 è un modello in vitro ben caratterizzato per studiare la risposta dell'epitelio intestinale alle infezioni batteriche. Le cellule HT-29 imitano le caratteristiche delle cellule intestinali mature, cioè gli enterociti, e sono quindi adatte per studi di attaccamento e meccanicistici.

Questo articolo tratterà tutti gli aspetti della linea cellulare HT-29 che è necessario conoscere prima di lavorare con essa. Principalmente includerà:

Cellule HT-29: Origine e informazioni generali
Informazioni sulla coltura cellulare della linea HT-29
Cellule HT-29: Vantaggi e limiti
Cellule HT-29: Applicazioni
Pubblicazioni di ricerca sulle cellule HT-29
Risorse sulle cellule HT-29: Protocolli, video e altro

1. Cellule HT-29: Origine e informazioni generali

Prima di utilizzare qualsiasi linea cellulare, è necessario conoscerne le caratteristiche generali e l'origine. Questa sezione vi aiuterà a capire: Cosa sono le cellule HT-29? L'HT-29 è una linea cellulare per il cancro del colon-retto? Qual è la morfologia delle cellule HT-29?

Che cos'è la linea cellulare HT-29? HT-29 è una linea cellulare di adenocarcinoma colorettale creata nel 1964 da Trempe e Fogh. Le cellule sono state originariamente derivate dal tumore primario di una donna caucasica (44 anni) con adenocarcinoma colorettale [1]. Dalla sua creazione, questa linea cellulare è stata utilizzata per studiare la biologia dei tumori.

Morfologia delle cellule HT-29: La linea cellulare HT-29 ha generalmente una morfologia di tipo epiteliale. Le cellule differenziate crescono in monostrato, formano giunzioni strette cellula-cellula e possiedono un brush border apicale. Se queste cellule vengono coltivate in un terreno carente di glucosio o se vengono loro somministrati induttori come il butirrato o l'acido, mostrano caratteristiche simili agli enterociti.

Dimensioni delle cellule: Il diametro della linea cellulare di cancro colorettale HT-29 è di 11 μm.

Genoma e ploidia: Il numero modale di cromosomi per la linea cellulare HT-29 è 71. Può variare da 68 a 72. Può variare da 68 a 72. Inoltre, il numero di cromosomi semplificato per le cellule HT-29 è iper-triploide, con la componente 2S presente al 2,4%.

Che cos'è l'HT29 MTX? HT29 MTX è una linea cellulare resistente al metotrexato isolata dalla linea cellulare originale HT-29 del cancro del colon umano mediante adattamento al metotrexato 10 µM. Queste cellule presentano caratteristiche di cellule goblet mature secernenti muco.

Divisione e movimento delle cellule del cancro colorettale al microscopio.

2. Informazioni sulla coltura cellulare della linea HT-29

Conoscere i requisiti di base della coltura di una linea cellulare può facilitare il vostro lavoro con essa. È necessario sapere: qual è il tempo di raddoppiamento della linea cellulare HT-29? Qual è la densità di semina delle cellule HT-29? Quali sono i terreni di coltura per le cellule HT-29?

Tempo di raddoppio	Il tempo medio di raddoppio della linea cellulare HT-29 è di 24 ore.
Aderente/sospensione	HT-29 è una linea cellulare aderente.
Densità di semina	La densità di semina raccomandata per le cellule HT-29 è di 3 x¹⁰⁴ ^cellule/cm2. Le cellule cresciute vengono lavate con 1 X PBS e staccate dopo incubazione con Accutase per 8-10 minuti. Si aggiunge nuovo terreno e le cellule vengono centrifugate. Il pellet cellulare viene risospeso e le cellule vengono distribuite in nuove fiasche alla densità cellulare raccomandata.
Terreno di crescita	Per una coltura ottimale delle cellule HT-29 si utilizza il terreno minimo essenziale di Eagle (EMEM) integrato con 2,5 mM di L-glutamina e 10 % di FBS. Il terreno deve essere sostituito da 2 a 3 volte alla settimana.
Condizioni di crescita	Per la crescita delle cellule HT-29 è necessario un incubatore umificato con temperatura di 37°C e un apporto di_CO2 del 5%.
Conservazione	Queste cellule vengono conservate nella fase vapore dell'azoto liquido a una temperatura inferiore a -195°C.
Terreno di congelamento e processo	Il terreno di congelamento utilizzato per la linea cellulare HT-29 è il CM-1 o CM-ACF. Le cellule vengono congelate con un processo di congelamento lento che provoca un abbassamento della temperatura di 1 °C e protegge efficacemente la vitalità delle cellule.
Processo di scongelamento	Le cellule HT-29 congelate vengono scongelate in un bagnomaria a 37°C. Queste cellule possono essere risospese e distribuite direttamente nella fiasca di terreno di coltura fresco. Al contrario, le cellule scongelate possono essere centrifugate per rimuovere gli elementi del terreno di congelamento, risospese in terreno fresco e coltivate in fiasche.
Livello di biosicurezza	Il livello di biosicurezza 1 è utilizzato per manipolare e mantenere la linea cellulare HT-29.

Cellule HT-29 con ingrandimento 10x e 20x.

3. Cellule HT-29: Vantaggi e limiti

Ogni linea cellulare ha pro e contro unici che la distinguono da altre linee cellulari. In questa sezione verranno illustrati i principali vantaggi e limiti associati alle cellule HT-29.

Vantaggi

I principali vantaggi delle cellule HT-29 sono:

Facilità di coltura
La linea cellulare HT-29 è facile da gestire e mantenere, senza requisiti complessi per la coltura. È ampiamente coltivata nei laboratori di ricerca.
Modello in vitro di cellule intestinali
Le cellule HT-29 possono differenziarsi in cellule intestinali mature (enterociti e cellule produttrici di muco) in condizioni di coltura specifiche. Sono utilizzate come modello cellulare per studiare la digestione e la biodisponibilità degli alimenti.
Alta efficienza di trasfezione
Le cellule di cancro del colon HT-29 offrono un'elevata efficienza di trasfezione, che le rende adatte a studi di espressione e regolazione genica. Gli esperimenti di trasfezione transitoria e stabile possono essere eseguiti con diversi metodi.
Sensibilità ai farmaci
Le cellule HT-29 sono sensibili ai farmaci chemioterapici come il fluorouracile e l'oxaliplatino, comunemente usati nel trattamento del cancro del colon. Sono utilizzate per studiare la resistenza ai farmaci e per lo screening di potenziali farmaci terapeutici per il carcinoma colorettale.

Limitazioni

Eterogeneità
Le cellule HT-29, come altre linee cellulari tumorali, presentano eterogeneità e possono non formare una popolazione cellulare uniforme. Questo può influire sulla riproducibilità dei risultati in alcuni saggi e portare a piccole variazioni nei risultati sperimentali.
Differenziazione limitata
Le cellule HT-29 hanno un potenziale di differenziazione limitato. Non si differenziano completamente in cellule intestinali o del colon, ma presentano solo alcune caratteristiche. Questo limite può limitare il loro uso nello studio di processi biologici più complessi.

4. cellule HT-29: Applicazioni

La linea cellulare HT-29 è ampiamente coltivata nei laboratori di ricerca grazie alla sua ampia gamma di applicazioni. Questa sezione tratterà solo alcune applicazioni significative delle cellule HT-29.

Ricerca sul cancro: HT-29 è una linea cellulare di adenocarcinoma colorettale, quindi viene utilizzata per studiare la progressione, lo sviluppo e i meccanismi molecolari sottostanti del cancro. Uno studio condotto nel 2018 ha utilizzato la linea cellulare HT-29 per studiare le molecole cellulari responsabili delle metastasi. Questo studio ha osservato che i geni vimentina e CXCR4 regolano la metastasi cellulare. Mentre la trasfezione del mimico del microRNA-193a-5p può ridurre i livelli di mRNA di questi geni e diminuire con successo la metastasi delle cellule tumorali [2].

Ricerca tossicologica: La linea cellulare HT-29 è ampiamente utilizzata nella ricerca tossicologica. Queste cellule di carcinoma del colon-retto vengono utilizzate per valutare la tossicità di diversi candidati farmaci utilizzando diversi saggi. Ad esempio, uno studio ha esplorato il potenziale di tossicità di un estratto etanolico della pianta Syzygium cumini sulla linea cellulare HT-29. I risultati hanno mostrato una significativa soppressione di HT-29 e un'elevata concentrazione di sostanze tossiche. I risultati hanno mostrato una significativa soppressione della crescita delle cellule HT-29, indicando le promettenti proprietà antitumorali dell'estratto [3].

Microbiologia: la HT-29 può essere utilizzata come sistema cellulare ospite per studiare la patogenesi di potenziali microbi, cioè batteri e virus. I ricercatori possono infettare le cellule HT-29 con i microbi per studiarne la virulenza e la risposta dell'ospite. Uno studio di questo tipo ha utilizzato cellule HT-29 per esplorare le proprietà probiotiche dei batteri lattici [4]. Un altro studio ha utilizzato cellule HT-29 per valutare l'efficacia e la sicurezza dei trattamenti con batteriofagi [5].

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5. Pubblicazioni di ricerca sulle cellule HT-29

Questa sezione illustra alcune pubblicazioni di rilievo sulle cellule HT-29, che vi aiuteranno a elaborare il vostro studio di ricerca.

Valutazione dell'effetto antitumorale dell'estratto etanolico di Syzygium cumini sulla linea cellulare HT-29 del colon-retto

Questo studio ha proposto l'estratto etanolico di Syzygium cumini come potenziale agente antitumorale contro la linea cellulare HT-29 del cancro colorettale. L'estratto ha soppresso in modo significativo la crescita delle cellule tumorali.

La tetrandrina inibisce la crescita delle cellule di carcinoma del colon HT-29 attraverso il percorso Bcl-2/Caspase 3/PARP e la fase G1/S

Questa pubblicazione su Bioscience Reports ha testato l'attività antitumorale di un composto, la tetradrina, sulle cellule HT-29. I risultati hanno rivelato che la tetradrina inibisce la proliferazione e la crescita delle cellule tumorali attraverso la regolazione delle vie di segnalazione cellulare.

il microRNA-193a-5p inibisce la migrazione delle cellule umane di cancro del colon HT-29 attraverso la soppressione della via della metastasi

Questo studio propone che il miRNA-193a-5p possa potenzialmente regolare la metastasi delle cellule HT-29 attraverso la regolazione dei geni correlati alla metastasi.

I batteriofagi sono più virulenti nei confronti dei batteri con cellule umane di quanto non lo siano in coltura batterica; approfondimenti sulle cellule HT-29

Questo lavoro è stato pubblicato su Nature Scientific Reports nel 2018. Questo studio ha utilizzato la linea cellulare tumorale HT-29 come modello cellulare intestinale per valutare l'efficacia del trattamento con batteriofagi proposto.

Proprietà probiotiche dei lattobacilli e loro capacità di inibire l'adesione di batteri enteropatogeni alle cellule Caco-2 e HT-29

In questo studio, i ricercatori hanno utilizzato cellule HT-29 per indagare le attività probiotiche dei batteri lattici. È interessante notare che lo studio ha indicato che i lattobacilli impediscono l'adesione dei batteri patogeni alle cellule del colon.

6. Cellule HT-29 Risorse: Protocolli, video e altro

In questa sezione sono descritte alcune risorse online disponibili sulle cellule HT-29 che aiutano ad apprendere i loro protocolli di mantenimento, coltura e trasfezione.

Protocolli di coltura cellulare

Le seguenti risorse vi guideranno nella subcoltura delle cellule HT-29.

Coltura delle cellule HT-29: Questo link fornisce le conoscenze di base sul terreno di coltura, lo scongelamento e la subcoltura delle cellule HT-29.
Mantenimento delle colture di HT-29: Questo articolo contiene tutte le informazioni utili sulla coltura e sul mantenimento delle cellule HT-29.

Protocolli di trasfezione

La linea cellulare HT-29 ha una grande efficienza di trasfezione ed è spesso utilizzata negli studi di espressione genica. Le seguenti risorse descrivono i possibili protocolli di trasfezione per queste cellule.

Trasfezione di HT-29: Questo link al sito web contiene il protocollo dettagliato per la trasfezione delle cellule HT-29.
Trasfezione della linea cellulare HT-29: Questo documento descrive il protocollo di trasfezione della linea cellulare HT-29 con DNA plasmidico.

Video relativi alla linea cellulare HT-29

Ecco alcuni video sulla coltura e il mantenimento di questa linea cellulare tumorigenica.

Passaggio delle cellule: Questo video mostra il protocollo di passaging delle cellule per le linee cellulari aderenti.
Trasfezione di cellule HT-29: Questo video vi guiderà sul metodo di trasfezione utilizzato per le cellule HT-29.

Riteniamo che le informazioni contenute in questo articolo siano preziose e sufficienti per gestire la linea cellulare HT-29 e il suo mantenimento. Se intendete utilizzare le cellule HT-29 nel vostro studio, ordinate da noi.

Riferimenti

Martínez-Maqueda, D., B. Miralles e I. Recio, Linea cellulare HT29. The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, 2015: p. 113-124.
Shirafkan, N., et al., microRNA-193a-5p inibisce la migrazione delle cellule umane di cancro del colon HT-29 attraverso la soppressione della via delle metastasi. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
Khodavirdipour, A., R. Zarean e R. Safaralizadeh, Valutazione dell'effetto antitumorale dell'estratto etanolico di Syzygium cumini sulla linea cellulare HT-29 del colon-retto. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: p. 575-581.
Fonseca, H.C., et al., Proprietà probiotiche dei lattobacilli e loro capacità di inibire l'adesione di batteri enteropatogeni alle cellule Caco-2 e HT-29. Probiotici e proteine antimicrobiche, 2021. 13: p. 102-112.
Shan, J., et al., I batteriofagi sono più virulenti nei confronti dei batteri con cellule umane di quanto non lo siano in coltura batterica; intuizioni dalle cellule HT-29. Rapporti scientifici, 2018. 8(1): p. 5091.