Linea cellulare HT-29
HT-29 è una linea cellulare di carcinoma colorettale umano con un'ampia gamma di applicazioni nella ricerca oncologica e tossicologica. Ad esempio, queste cellule sono sensibili ai trattamenti chemioterapici standard contro il carcinoma colorettale. Inoltre, la linea cellulare HT-29 è un modello in vitro ben caratterizzato per studiare la risposta dell'epitelio intestinale alle infezioni batteriche. Le cellule HT-29 imitano le caratteristiche delle cellule intestinali mature, cioè gli enterociti, e quindi sono adatte per studi sull'adesione e sui meccanismi.
- Terreno di coltura
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- Tempo di raddoppio
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- Tipo di crescita
- Adesivo
- Livello di biosicurezza
- BSL-1
- Disponibile presso
- Cytion — Ordina HT-29
- Cellule HT-29: Origine e informazioni generali
- Informazioni sulla coltura cellulare della linea cellulare HT-29
- Cellule HT-29: Vantaggi e limiti
- Cellule HT-29: Applicazioni
- 5. Pubblicazioni di ricerca sulle cellule HT-29
- Risorse sulle cellule HT-29: protocolli, video e altro
- Riferimenti
- Domande frequenti
Cellule HT-29: Origine e informazioni generali
Prima di utilizzare qualsiasi linea cellulare, è necessario conoscerne le caratteristiche generali e l'origine. Questa sezione vi aiuterà a capire: cosa sono le cellule HT-29? HT-29 è una linea cellulare di cancro del colon-retto? Qual è la morfologia delle cellule HT-29?
Cos'è la linea cellulare HT-29? HT-29 è una linea cellulare di adenocarcinoma colorettale istituita nel 1964 da Trempe e Fogh. Le cellule sono state originariamente derivate dal tumore primario di una donna caucasica (44 anni) affetta da adenocarcinoma colorettale [1]. Sin dalla sua creazione, questa linea cellulare è stata utilizzata per studiare la biologia dei tumori.
Morfologia delle cellule HT-29: la linea cellulare HT-29 presenta generalmente una morfologia di tipo epiteliale. Le cellule differenziate crescono in monostrati, formano giunzioni cellula-cellula strette e possiedono un bordo a spazzola apicale. Se queste cellule vengono coltivate in un terreno privo di glucosio o se vengono somministrati induttori come il butirrato o l'acido, mostrano caratteristiche simili a quelle degli enterociti.
Dimensione cellulare: il diametro della linea cellulare del cancro del colon-retto HT-29 è di 11 μm.
Genoma e ploidia: il numero modale di cromosomi per la linea cellulare HT-29 è 71. Può variare da 68 a 72. Inoltre, il numero di cromosomi semplificato per le cellule HT-29 è iper-triploide, con la componente 2S che si verifica con una frequenza del 2,4%.
Che cos'è l'HT29 MTX? L'HT29 MTX è una linea cellulare resistente al metotrexato isolata dalla linea cellulare originale HT-29 del cancro del colon umano mediante adattamento a 10 µM di metotrexato. Queste cellule presentano le caratteristiche delle cellule caliciformi mature che secernono muco.
Informazioni sulla coltura cellulare della linea cellulare HT-29
Conoscere i requisiti di base per la coltura di una linea cellulare può semplificare il lavoro. È importante sapere: qual è il tempo di raddoppio della linea cellulare HT-29? Qual è la densità di semina delle cellule HT-29? Quali terreni di coltura utilizzare per le cellule HT-29?
Tempo di raddoppio
Il tempo di raddoppio medio della linea cellulare HT-29 è di 24 ore.
Aderenza/sospensione
HT-29 è una linea cellulare aderente.
Densità di semina
La densità di semina raccomandata per le cellule HT-29 è di 3 x 10⁴ cellule/cm². Le cellule coltivate vengono lavate con PBS 1X e staccate dopo incubazione con Accutase per 8-10 minuti. Si aggiunge terreno fresco e le cellule vengono centrifugate. Il pellet cellulare viene risospeso e le cellule vengono distribuite in nuove fiasche alla densità cellulare raccomandata.
Terreno di coltura
Per una coltura ottimale delle cellule HT-29 si utilizza il Medium Minimo Essenziale di Eagle (EMEM) integrato con 2,5 mM di L-glutammina e 10% di FBS. Il terreno va sostituito 2 o 3 volte alla settimana.
Condizioni di crescita
Le cellule HT-29 richiedono un incubatore umidificato con temperatura di 37 °C e un apporto di CO2 al 5% per la crescita.
Conservazione
Queste cellule vengono conservate nella fase vapore dell'azoto liquido a una temperatura inferiore a -195 °C.
Terreno e processo di congelamento
Il mezzo di congelamento utilizzato per la linea cellulare HT-29 è CM-1 o CM-ACF. Le cellule vengono congelate mediante un processo di congelamento lento che provoca un calo di temperatura di 1 °C e protegge efficacemente la vitalità delle cellule.
Processo di scongelamento
Le cellule HT-29 congelate vengono scongelate in un bagno d'acqua a 37 °C. Queste cellule possono essere risospese e trasferite direttamente in una fiasca contenente terreno di coltura fresco. In alternativa, le cellule scongelate possono essere centrifugate per rimuovere gli elementi del mezzo di congelamento, risospese in mezzo fresco e coltivate in fiasche.
Livello di biosicurezza
Per la manipolazione e la conservazione della linea cellulare HT-29 viene utilizzato il livello di biosicurezza 1.
Cellule HT-29: vantaggi e limiti
Ogni linea cellulare presenta pro e contro specifici che la distinguono dalle altre linee cellulari. Questa sezione tratterà i principali vantaggi e limiti associati alle cellule HT-29.
Vantaggi
I principali vantaggi delle cellule HT-29 sono:
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Facili da coltivare
La linea cellulare HT-29 è facile da gestire e mantenere, senza requisiti complessi per la coltura. È ampiamente coltivata nei laboratori di ricerca.
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Modello in vitro di cellule intestinali
Le cellule HT-29 possono differenziarsi in cellule intestinali mature (enterociti e cellule produttrici di muco) in specifiche condizioni di coltura. Sono utilizzate come modello cellulare per studiare la digestione degli alimenti e la biodisponibilità.
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Elevata efficienza di trasfezione
Le cellule di cancro al colon HT-29 offrono un'elevata efficienza di trasfezione, rendendole adatte a studi sull'espressione e la regolazione genica. È possibile eseguire esperimenti di trasfezione sia transitoria che stabile utilizzando vari metodi.
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Sensibilità ai farmaci
Le cellule HT-29 sono sensibili a farmaci chemioterapici come il fluorouracile e l'oxaliplatino, comunemente utilizzati nel trattamento del cancro del colon. Sono utilizzate per studiare la resistenza ai farmaci e per lo screening di potenziali farmaci terapeutici per il carcinoma colorettale.
Limiti
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Eterogeneità
Le cellule HT-29, come altre linee cellulari tumorali, presentano eterogeneità e potrebbero non formare una popolazione cellulare uniforme. Ciò può influire sulla riproducibilità dei risultati in determinati test e portare a lievi variazioni nei risultati sperimentali.
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Differenziazione limitata
Le cellule HT-29 hanno un potenziale di differenziazione limitato. Non si differenziano completamente in cellule intestinali o del colon, ma presentano solo alcune caratteristiche distintive. Questa limitazione può restringere il loro impiego nello studio di processi biologici più complessi.
Cellule HT-29: Applicazioni
La linea cellulare HT-29 è ampiamente coltivata nei laboratori di ricerca grazie alla sua vasta gamma di applicazioni. Questa sezione tratterà solo alcune delle applicazioni significative delle cellule HT-29.
Ricerca sul cancro: l'HT-29 è una linea cellulare di adenocarcinoma colorettale, pertanto viene utilizzata per studiare la progressione del cancro, lo sviluppo e i meccanismi molecolari sottostanti. Uno studio condotto nel 2018 ha utilizzato la linea cellulare HT-29 per indagare le molecole cellulari responsabili delle metastasi. Questo studio ha osservato che i geni vimentina e CXCR4 regolano la metastasi cellulare. La trasfezione del mimico del microRNA-193a-5p può invece ridurre i livelli di mRNA di questi geni e diminuire con successo la metastasi delle cellule tumorali [2].
Ricerca tossicologica: la linea cellulare HT-29 è ampiamente utilizzata nella ricerca tossicologica. Queste cellule di carcinoma colorettale vengono utilizzate per valutare la tossicità di diversi farmaci candidati utilizzando diversi test. Ad esempio, uno studio ha esplorato il potenziale di tossicità di un estratto etanolico della pianta Syzygium cumini sulla linea cellulare HT-29. I risultati hanno mostrato una significativa soppressione della crescita delle cellule HT-29, indicando le promettenti proprietà antitumorali dell'estratto [3].
Microbiologia: le cellule HT-29 possono essere utilizzate come sistema cellulare ospite per studiare la patogenesi di potenziali microbi, ovvero batteri e virus. I ricercatori possono infettare le cellule HT-29 con microbi per studiarne la virulenza e la risposta dell'ospite. Uno studio di questo tipo ha utilizzato le cellule HT-29 per esplorare le proprietà probiotiche dei batteri dell'acido lattico [4]. Un altro studio ha utilizzato le cellule HT-29 per valutare l'efficacia e la sicurezza dei trattamenti con batteriofagi [5].
5. Pubblicazioni scientifiche sulle cellule HT-29
Questa sezione illustrerà alcune pubblicazioni degne di nota sulle cellule HT-29 che ti aiuteranno a pianificare il tuo studio di ricerca.
Questo studio ha proposto l'estratto etanolico di Syzygium cumini come potenziale agente antitumorale contro la linea cellulare del cancro del colon-retto HT-29. L'estratto ha significativamente inibito la crescita delle cellule tumorali.
Questa pubblicazione su Bioscience Reports ha testato l'attività antitumorale di un composto, la tetrandrina, sulle cellule HT-29. I risultati hanno rivelato che la tetrandrina inibisce la proliferazione e la crescita delle cellule tumorali attraverso la regolazione delle vie di segnalazione cellulare.
Questo studio ha ipotizzato che il miRNA-193a-5p possa potenzialmente regolare la metastasi delle cellule HT-29 attraverso la regolazione dei geni correlati alla metastasi.
Questo articolo è stato pubblicato su Nature Scientific Reports nel 2018. Questo studio ha utilizzato la linea cellulare tumorigenica HT-29 come modello cellulare intestinale per valutare l'efficacia del trattamento con batteriofagi proposto.
In questo studio, i ricercatori hanno utilizzato le cellule HT-29 per studiare le attività probiotiche dei batteri lattici. È interessante notare che lo studio ha indicato che i lattobacilli impediscono l'adesione dei batteri patogeni alle cellule del colon.
Risorse sulle cellule HT-29: protocolli, video e altro
Questa sezione tratterà alcune risorse online disponibili sulle cellule HT-29 che aiuteranno a imparare i loro protocolli di mantenimento, coltura e trasfezione.
Protocolli di coltura cellulare
Le seguenti risorse ti guideranno nella subcoltura delle cellule HT-29.
- Coltura delle cellule HT-29: questo link fornirà le conoscenze di base sul terreno di coltura, lo scongelamento e la subcoltura delle cellule HT-29.
- Mantenimento delle colture HT-29: questo articolo contiene tutte le informazioni utili sulla coltura e il mantenimento delle cellule HT-29.
Protocolli di trasfezione
La linea cellulare HT-29 ha un'ottima efficienza di trasfezione ed è spesso utilizzata negli studi sull'espressione genica. Le seguenti risorse descrivono i possibili protocolli di trasfezione per queste cellule.
- Trasfezione di HT-29: questo link al sito web contiene il protocollo dettagliato per la trasfezione delle cellule HT-29.
- Trasfezione della linea cellulare HT-29: questo documento descrive il protocollo di trasfezione della linea cellulare HT-29 con DNA plasmidico.
Video relativi alla linea cellulare HT-29
Ecco alcuni video sulla coltura e il mantenimento di questa linea cellulare tumorigenica.
- Passaggio delle cellule: questo video mostra il protocollo di passaggio delle cellule per le linee cellulari aderenti.
- Trasfezione delle cellule HT-29: questo video vi guiderà nel metodo di trasfezione utilizzato per le cellule HT-29.
Ci auguriamo che le informazioni contenute in questo articolo siano utili e sufficienti per consentirvi di gestire e mantenere la linea cellulare HT-29. Se avete intenzione di utilizzare le cellule HT-29 nel vostro studio, ordinatele da noi.
Riferimenti
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles e I. Recio, linea cellulare HT29. L'impatto dei bioattivi alimentari sulla salute: modelli in vitro ed ex vivo, 2015: pagg. 113-124.
- Shirafkan, N., et al., microRNA‐193a‐5p inibisce la migrazione delle cellule tumorali del colon HT‐29 umane attraverso la soppressione della via metastatica. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean e R. Safaralizadeh, Valutazione dell'effetto antitumorale dell'estratto etanolico di Syzygium cumini sulla linea cellulare colorettale HT-29. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: pp. 575-581.
- Fonseca, H.C., et al., Proprietà probiotiche dei lattobacilli e loro capacità di inibire l'adesione dei batteri enteropatogeni alle cellule Caco-2 e HT-29. Probiotics and antimicrobial proteins, 2021. 13: pp. 102-112.
- Shan, J., et al., I batteriofagi sono più virulenti nei confronti dei batteri presenti nelle cellule umane rispetto a quanto lo siano nelle colture batteriche; approfondimenti dalle cellule HT-29. Scientific reports, 2018. 8(1): p. 5091.