Cellule DLD-1: applicazioni e approfondimenti sulle cellule DLD-1 nella ricerca sul cancro del colon-retto
La DLD-1 è una linea cellulare di carcinoma colorettale umano comunemente impiegata nella ricerca sul cancro. Si tratta di uno strumento prezioso per lo studio di vari aspetti del cancro al colon, tra cui lo sviluppo del tumore, la progressione, i meccanismi molecolari sottostanti e la risposta agli agenti terapeutici. Pertanto, la DLD-1 è fondamentale per comprendere la malattia e sviluppare potenziali strategie terapeutiche.
- Terreno di coltura
- Per la coltura delle cellule DLD-1 si utilizza RPMI 1640 con integratori, tra cui siero fetale bovino (FBS) al 10%, glutammina stabile a 2,1 mM e NaHCO3 a 2,0 g/L. Il terreno di coltura deve essere sostituito 2-3 volte alla settimana.
- Tempo di raddoppio
- Il tempo di raddoppio delle cellule DLD-1 è di circa 15 ore.
- Tipo di crescita
- La DLD-1 è una linea cellulare aderente di carcinoma del colon umano. Le cellule crescono in monostrati.
- Livello di biosicurezza
- BSL-1
- Disponibile presso
- Cytion — Ordina DLD-1
- Caratteristiche generali e origine delle cellule DLD-1
- Informazioni sulla coltura della linea cellulare DLD-1
- Linea cellulare DLD-1: vantaggi e limiti
- Applicazioni di ricerca della linea cellulare DLD-1
- 5. Pubblicazioni di ricerca sulle cellule DLD-1
- Risorse per la linea cellulare DLD-1: protocolli, video e altro
- Domande frequenti
Caratteristiche generali e origine delle cellule DLD-1
Prima di lavorare su una linea cellulare, la prima cosa che un ricercatore deve considerare è la sua origine e le sue caratteristiche generali. Questa sezione dell'articolo è un'introduzione dettagliata alla linea cellulare DLD-1. Tratterà le seguenti domande frequenti: Cosa sono le cellule DLD-1? Cos'è una linea cellulare tumorale DLD-1? Quali sono le mutazioni della linea cellulare DLD-1? Qual è la dimensione di una cellula DLD-1? Qual è la morfologia delle cellule DLD-1?
- La DLD-1, una linea cellulare di cancro al colon, ha origine dall'intestino crasso di un paziente maschio di 67 anni affetto da adenocarcinoma colorettale. È stata isolata da D.L. Dexter e colleghi nel periodo 1977-1979. Questa linea cellulare condivide la stessa origine con le linee cellulari HCT-8, HCT-15 e HRT-18.
- Come i tumori colorettali, le cellule DLD-1 presentano un fenotipo di instabilità dei microsatelliti [1].
- Le mutazioni DLD-1 includono KRAS, P53, BRAF, BRCA1 e BRCA2. A causa dello stato P53 di DLD-1, della mutazione DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 e DLD-1 KRAS, queste cellule sono considerate ideali per gli studi sul cancro.
- Queste cellule possiedono una morfologia di tipo epiteliale.
- La dimensione della linea cellulare DLD-1 è di circa 15 µm.
- La linea cellulare di cancro colorettale umano DLD-1 possiede un cariotipo pseudodiploide. Circa l'86% delle cellule possiede un numero cromosomico modale di 46. Tuttavia, la poliploidia può esistere anche nel 17,1% della popolazione cellulare.
Informazioni sulla coltura della linea cellulare DLD-1
Prima di coltivare qualsiasi linea cellulare, è necessario conoscerne i requisiti di base per la coltura cellulare. Questa sezione metterà in evidenza i punti importanti da apprendere prima di iniziare a lavorare sulla linea cellulare DLD-1. Ciò include: Qual è il tempo di raddoppio delle cellule DLD-1? Qual è il terreno di coltura DLD-1? Qual è la densità di semina delle cellule DLD-1? Come si coltivano le cellule DLD-1?
Punti chiave per la coltura delle cellule DLD-1
Tempo di raddoppio:
Il tempo di raddoppio delle cellule DLD-1 è di circa 15 ore.
Aderenzi o in sospensione:
La DLD-1 è una linea cellulare aderente di carcinoma del colon umano. Le cellule crescono in monostrati.
Densità di semina:
Le cellule DLD-1 vengono seminate a una densità compresa tra 1 e 2 x 104 cellule/cm2. Le cellule aderenti vengono lavate con tampone fosfato salino (PBS) 1x e incubate con soluzione di passaggio (Accutase) a temperatura ambiente. Dopo un'incubazione di 8-10 minuti, le cellule distaccate vengono aggiunte al terreno di coltura e centrifugate. Il pellet cellulare viene quindi risospeso con cura e le cellule vengono trasferite in nuovi recipienti di coltura contenenti terreno di crescita.
Terreno di crescita:
Per la coltura delle cellule DLD-1 si utilizza RPMI 1640 con integratori del terreno, tra cui siero fetale bovino (FBS) al 10%, glutammina stabile a 2,1 mM e NaHCO3 a 2,0 g/L. Il terreno va sostituito 2-3 volte alla settimana.
Condizioni di crescita:
Le colture di DLD-1 vengono mantenute in un incubatore umidificato a 37 °C con un'alimentazione di CO2 al 5%.
Conservazione:
Le cellule DLD-1 vengono conservate nella fase vapore dell'azoto liquido o in un congelatore elettrico a temperatura ultra-bassa (a una temperatura inferiore a -150 °C).
Processo di congelamento e terreno:
Per congelare le cellule DLD-1 si possono utilizzare i terreni di congelamento CM-1 o CM-ACF. Si raccomanda sempre un processo di congelamento lento, che consenta una diminuzione graduale della temperatura di 1 °C, prevenendo così lo shock termico delle cellule e proteggendone la vitalità.
Processo di scongelamento:
Le cellule congelate vengono scongelate in un bagno d'acqua preimpostato a una temperatura di 37 °C per 40-60 secondi fino a quando rimane un piccolo grumo di ghiaccio. Successivamente, le cellule vengono aggiunte a un mezzo fresco e centrifugate. Questo passaggio è necessario per rimuovere i componenti del mezzo di congelamento dalle cellule. Le cellule raccolte vengono risospese in un mezzo di crescita e trasferite in una fiasca per la crescita.
Livello di biosicurezza:
La linea cellulare DLD-1 è conservata in laboratori di livello di biosicurezza 1.
Linea cellulare DLD-1: vantaggi e limiti
In questa sezione dell'articolo esamineremo i vantaggi e i limiti della linea cellulare DLD-1 del cancro al colon.
Vantaggi
I principali vantaggi della linea cellulare DLD-1 sono:
Modello di cancro del colon-retto
Le cellule DLD-1 presentano mutazioni comunemente riscontrate nei pazienti affetti da cancro del colon-retto, quali la mutazione DLD-1 KRAS, DLD-1 BRCA e DLD-1 BRCA2. Questa rilevanza le rende un modello cellulare clinicamente appropriato per lo studio di questa malattia.
Linea cellulare tumorigenica
Le cellule DLD-1 sono tumorigeniche. Possono causare tumori quando vengono iniettate in topi nudi. Pertanto, i ricercatori utilizzano queste cellule per sviluppare modelli tumorali xenotrapiantati che aiutano a studiare la formazione, lo sviluppo e la progressione del tumore in vivo.
Limiti
I limiti associati alle cellule DLD-1 sono:
Eterogeneità
Le popolazioni di cellule tumorali del colon DLD-1 presentano eterogeneità genetica e fenotipica. Ciò può influenzare la generalizzabilità dei risultati della ricerca.
Applicazioni di ricerca della linea cellulare DLD-1
La linea cellulare DLD-1 offre una vasta gamma di applicazioni nella ricerca sul cancro. In questa sezione vengono discusse alcune delle applicazioni più importanti.
- Studio sul cancro: le cellule DLD-1 fungono da prezioso modello in vitro per comprendere i meccanismi molecolari alla base della crescita, dello sviluppo e della progressione del cancro del colon-retto. Inoltre, vengono utilizzate per studiare l'espressione genica, le vie di segnalazione e l'influenza di specifiche mutazioni genetiche sul comportamento delle cellule tumorali. Una ricerca condotta nel 2022 ha osservato che la cascata di segnalazione PI3K/Akt/YAP regola la migrazione e l'invasione della linea cellulare DLD-1 del cancro del colon-retto [2].
- Sviluppo di farmaci: i ricercatori utilizzano la linea cellulare DLD-1 per testare l'efficacia dei farmaci antitumorali e valutarne il potenziale per il trattamento del cancro al colon. Ciò contribuisce allo sviluppo di farmaci e alla lotta efficace contro la malattia. Uno studio condotto nel 2022 ha utilizzato la linea cellulare tumorale DLD-1 ed ha esplorato l'attività antitumorale delle ftalocianine di silicio, composti sintetizzati chimicamente. I risultati dello studio hanno suggerito che questi composti sono potenti agenti antitumorali [3]. È interessante notare che un'altra ricerca ha scoperto il potenziale antitumorale di una proteina P8 derivata da un probiotico utilizzando cellule DLD-1 [4].
5. Pubblicazioni scientifiche sulle cellule DLD-1
Questa sezione metterà in evidenza alcune pubblicazioni interessanti e spesso citate che trattano la linea cellulare DLD-1 del carcinoma del colon.
Questa pubblicazione è apparsa sul Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). Lo studio ha scoperto che la diosmina, un flavonoide, induceva la morte cellulare nelle cellule DLD-1 e causava anche l'arresto del ciclo cellulare; pertanto, può essere un potenziale agente antitumorale.
Questo studio pubblicato su Animal Cells and Systems (2018) ha suggerito che la bromelina, un enzima, reprime la mutazione KRAS in DLD-1 ed esercita potenti effetti citotossici.
Questo articolo di ricerca è stato pubblicato nel 2019 sulla rivista “Environmental Toxicology”. Lo studio ha esplorato gli effetti antitumorali di un composto naturale, il bergapten, utilizzando una linea cellulare colorettale DLD-1.
Questo studio pubblicato sul Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023) ha scoperto che i nanocompositi di curcumina/ossido di ferro sono altamente efficaci contro le cellule tumorali colorettali DLD-1.
Questo articolo di ricerca è stato pubblicato nel 2020 sul Turkish Journal of Biology. Lo studio ha ipotizzato che un prodotto naturale, l'epibrassinolide, mediando l'attivazione dell'AKT nelle cellule DLD-1, stimoli l'autofagia correlata alle poliamine.
Risorse per la linea cellulare DLD-1: protocolli, video e altro
Di seguito sono riportate alcune risorse sulle cellule DLD-1:
- Trasfezione DLD-1: questo video tutorial è una guida completa sul protocollo di trasfezione in vitro delle cellule DLD-1.
- Cellule DLD-1: questo articolo di ricerca descrive brevemente i requisiti per la coltura delle cellule DLD-1, inclusi i terreni di coltura e le condizioni di coltura. Inoltre, può aiutarti a comprendere il protocollo di trasfezione utilizzato per le cellule DLD-1.
I seguenti link contengono il protocollo per la coltura delle cellule DLD-1, cellule di cancro al colon di origine umana.
- Linea cellulare DLD-1: questo sito web fornisce informazioni di base sulla linea cellulare DLD-1. Vi aiuterà a conoscere diversi protocolli di coltura delle cellule DLD-1, tra cui la subcoltura e la gestione delle colture crioconservate e proliferanti.
Riferimenti
- Gavrilas, L.I., et al., Geni pro-apoptotici come nuovi bersagli per trattamenti singoli e combinatori con resveratrolo e curcumina nel cancro del colon-retto. Food & function, 2019. 10(6): p. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., La segnalazione PI3K/Akt/YAP promuove la migrazione e l'invasione delle cellule tumorali del colon-retto DLD-1. Oncology Letters, 2022. 23(4): p. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Attività antitumorale di nuove ftalocianine di silicio contro la linea cellulare di adenocarcinoma colorettale (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): p. 19863-19873.
- An, B.C., et al., Ruoli antitumorali della proteina P8 derivata dai probiotici nella linea cellulare del cancro del colon-retto DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): p. 9857.