Cellule P19 - Ricerca sul carcinoma embrionale con l'utilizzo delle cellule P19
P19 è una linea cellulare di carcinoma embrionale murino. È ampiamente utilizzata nella ricerca biomedica, principalmente per lo studio della biologia dello sviluppo, della biologia delle cellule staminali, della differenziazione cellulare e dello screening farmacologico. Poiché le cellule P19 possiedono capacità di differenziazione, possono rivelarsi utili nello studio di processi biologici complessi quali la formazione dei tessuti e lo sviluppo embrionale precoce. In questo articolo tratteremo gli aspetti fondamentali delle cellule P19 di origine murina.
- Terreno di coltura
- Terreno DMEM/Ham's F12 contenente il 5% di siero fetale bovino, 3,1 g/L di glucosio, 1,6 mM di L-glutammina, 1,0 mM di piruvato di sodio, 15 mM di HEPES e 1,2 g/L di NaHCO₃.
- Tempo di raddoppio
- Il tempo di raddoppio riportato per la linea cellulare P19 è di circa 2-3 giorni.
- Tipo di crescita
- La linea cellulare di carcinoma embrionale P19 è aderente.
- Livello di biosicurezza
- BSL-1
- Disponibile presso
- Cytion — Ordina P19
- Caratteristiche generali e origine delle cellule P19
- Informazioni sulla coltura delle cellule P19
- Linea cellulare P19: vantaggi e svantaggi
- Applicazioni di ricerca delle cellule P19
- Acquista oggi stesso la tua linea cellulare P19
- Cellule P19: pubblicazioni di ricerca
- Risorse per la linea cellulare P19: protocolli, video e altro
- Alla scoperta della linea cellulare P19: domande frequenti
- Riferimenti
- Domande frequenti
Caratteristiche generali e origine delle cellule P19
Conoscere le caratteristiche generali e l’origine di una linea cellulare è fondamentale prima di iniziare a lavorarci. Questa sezione tratterà i seguenti argomenti: Che cos’è la linea cellulare P19? Qual è la dimensione delle cellule P19? Qual è l’origine delle cellule P19?
- La P19 è un tipo di cellule di carcinoma embrionale pluripotenti ottenute originariamente da un teratocarcinoma sviluppatosi in un topo C3H/He. La linea cellulare è stata istituita per la prima volta nel 1982 da McBurney e Rogers.
- Le cellule P19 possono crescere in modo continuo in un terreno di coltura integrato con siero. Possono essere differenziate in altri tipi cellulari se esposte a farmaci non tossici quali l’acido retinoico e il dimetilsolfossido (DMSO) [1].
- Queste cellule di carcinoma murino presentano una morfologia di tipo epiteliale.
- La linea cellulare P19 presenta un cariotipo maschile euploide (n=40; XY).
Informazioni sulla coltura delle cellule P19
La linea cellulare P19 è ampiamente coltivata nei laboratori di ricerca grazie alle sue caratteristiche uniche. La sua coltura è semplice e gestibile. Questa sezione riporta tutte le informazioni fondamentali necessarie per mantenere e far crescere una coltura di cellule P19. Scopriremo: qual è il tempo di raddoppio delle cellule P19? Come si coltiva la linea cellulare P19? La P19 è una linea cellulare aderente?
Punti chiave per la coltura delle cellule P19
Tempo di raddoppio:
Il tempo di raddoppio riportato per la linea cellulare P19 è di circa 2-3 giorni.
Aderenzi o in sospensione:
La linea cellulare di carcinoma embrionale P19 è aderente.
Rapporto di subcoltura:
Le cellule P19 devono essere subcoltivate ogni 48 ore, mantenendo un rapporto di divisione di 1:10. Le cellule aderenti vengono lavate con soluzione salina tamponata con fosfato 1X e incubate con Accutase fino alla loro dissociazione. Le cellule vengono aggiunte al terreno di coltura e raccolte mediante centrifugazione. Le cellule raccolte vengono accuratamente risospese e trasferite in nuove fiasche.
Terreno di crescita:
terreno DMEM/Ham's F12 contenente il 5% di siero fetale bovino, 3,1 g/L di glucosio, 1,6 mM di L-glutammina, 1,0 mM di piruvato di sodio, 15 mM di HEPES e 1,2 g/L di NaHCO₃.
Condizioni di crescita:
Per la crescita e la coltura della linea cellulare di carcinoma embrionale P19 è indispensabile un incubatore umidificato impostato a 37 °C con un'alimentazione di CO₂ al 5%.
Conservazione:
Le fiale di cellule P19 congelate devono essere conservate a una temperatura inferiore a -150 °C in un congelatore o nella fase vapore dell’azoto liquido per mantenere la vitalità delle cellule a lungo termine.
Processo di congelamento e terreno di coltura:
È possibile utilizzare i terreni di coltura CM-1 o CM-ACF per congelare le cellule P19 mediante un metodo di congelamento lento che protegga le cellule da eventuali shock e ne preservi la vitalità.
Processo di scongelamento:
Le cellule P19 congelate possono essere scongelate in un bagno d’acqua a 37 °C agitando rapidamente la fiala per 40-60 secondi. Alle cellule viene aggiunto un terreno fresco e vengono centrifugate per rimuovere gli elementi del terreno di congelamento. Il pellet cellulare viene nuovamente risospeso e le cellule vengono trasferite in una nuova fiasca per la coltura.
Livello di biosicurezza:
Per la linea cellulare P19 sono necessari laboratori con livello di biosicurezza 1.
Linea cellulare P19: vantaggi e svantaggi
In questa sezione verranno illustrati i vantaggi e gli svantaggi della linea cellulare P19.
Vantaggi
- Potenziale di differenziazione: le cellule P19 possono differenziarsi in vari tipi cellulari, tra cui cardiomiociti, neuroni e cellule microgliali. Per la differenziazione richiedono farmaci non tossici, quali l’acido retinoico e il dimetilsolfossido (DMSO). L'acido retinoico induce lo sviluppo di neuroni, microglia e astroglia, mentre il DMSO avvia lo sviluppo di cardiomiociti pulsanti e cellule muscolari lisce. Pertanto, le cellule P19 sono utili per lo studio della differenziazione cellulare e dei processi di sviluppo.
- Sistema modello: La linea cellulare pluripotente di carcinoma embrionale P19 è un modello prezioso per lo studio dello sviluppo embrionale precoce. I ricercatori utilizzano le cellule P19 per chiarire le vie di segnalazione cellulare e i meccanismi cellulari e molecolari coinvolti in questi processi.
Svantaggi
- Origine murina: la P19 è una linea cellulare di carcinoma embrionale murino. Di conseguenza, i risultati degli studi che utilizzano queste cellule potrebbero non essere pienamente trasferibili alla biologia e ai processi umani.
Applicazioni di ricerca delle cellule P19
Le cellule P19 hanno diverse applicazioni di ricerca grazie alla loro capacità di differenziazione e alla loro rilevanza per la biologia dello sviluppo e la ricerca sulle cellule staminali. Alcune delle principali applicazioni di ricerca delle cellule di carcinoma embrionale P19 includono:
- Studi sulla differenziazione cellulare: come è noto, le cellule P19 possono differenziarsi in neuroni, cellule microgliali, cellule muscolari lisce e cardiomiociti; pertanto sono ampiamente utilizzate per studiare i processi di differenziazione cellulare. Inoltre, contribuiscono alla ricerca sullo sviluppo neurale e cardiaco e sui meccanismi sottostanti. Uno studio condotto nel 2018 ha rilevato che le specie reattive dell’ossigeno (ROS) guidano la differenziazione delle cellule P19 in specifici tipi cellulari e impediscono l’induzione di altri [3]. Un altro studio ha approfondito il processo di differenziazione neurale mediato dall’acido retinoico, rilevando il coinvolgimento della via di segnalazione PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Biologia dello sviluppo: le cellule P19 rappresentano un modello inestimabile per lo studio dello sviluppo embrionale precoce. Aiutano i ricercatori a comprendere processi biologici complessi, come la formazione dei tessuti durante lo sviluppo embrionale. La ricerca ha utilizzato le cellule P19 per studiare i fattori molecolari che contribuiscono alla formazione del difetto del setto ventricolare (VSD). I risultati hanno rivelato che un RNA non codificante lungo, SNHG6, contribuisce al VSD regolando negativamente il miRNA-101 e attivando la via Wnt/β-catenina [5].
- Test farmacologici: la linea cellulare P19 di carcinoma embrionale murino viene utilizzata anche per lo screening di potenziali candidati farmacologici. Uno studio ha utilizzato neuroni derivati da cellule P19 differenziate e ha indagato gli effetti neuroprotettivi inibitori dell’acetilcolinesterasi della L-Dopa sintetica e dell’estratto acquoso di semi di Mucuna pruriens. I risultati hanno mostrato che l’estratto vegetale ha dato risultati promettenti rispetto alla L-Dopa [6].
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Cellule P19: Pubblicazioni scientifiche
Questa sezione dell'articolo tratterà alcune interessanti pubblicazioni di ricerca incentrate sulle cellule P19.
Questo articolo è stato pubblicato su Oncology Reports nel 2017. Lo studio ha ipotizzato che gli ormoni sessuali ipofisari guidino l’adesione, la proliferazione e la migrazione delle linee cellulari di teratocarcinoma, comprese le cellule P19.
Questa pubblicazione sulla rivista Experimental & Molecular Medicine (2018) ha utilizzato le cellule P19 per studiare la funzione dell’RNA lungo non codificante uc.4. I risultati hanno rivelato che uc.4 influenza la differenziazione cellulare modulando la via di segnalazione del TGF-beta.
Questo articolo di ricerca è stato pubblicato nel 2018 sul Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Lo studio ha rilevato che l’estratto naturale di tessuto cerebrale e la coltura cellulare 3D possono accelerare la differenziazione delle cellule del carcinoma embrionale P19 in cellule neurali.
Questo studio è stato pubblicato nel 2020 sul Journal of Ethnopharmacology. Lo studio ha suggerito che l’estratto di foglie di Cichorium intybus L. possa indurre la differenziazione delle cellule del carcinoma embrionale P19 in cellule β pancreatiche produttrici di insulina.
Questa ricerca è stata pubblicata su Molecules (2022). Lo studio ha esaminato gli effetti neuroprotettivi e di inibizione dell’acetilcolinesterasi dell’estratto di semi di Mucuna pruriens sui neuroni della linea cellulare P19.
Risorse sulla linea cellulare P19: protocolli, video e altro
Di seguito sono riportate alcune risorse sulle cellule P19.
- Protocollo di differenziazione neuronale delle cellule P19: questo articolo contiene il protocollo di differenziazione neuronale delle cellule P19 e altre informazioni utili sulla differenziazione delle cellule P19.
- Trasfezione delle cellule P19: questo link vi aiuterà a conoscere il protocollo di trasfezione delle cellule P19.
Il seguente link contiene il protocollo di coltura delle cellule P19.
- Cellule P19: questo sito web contiene tutte le informazioni utili sulla linea cellulare P19, comprese le condizioni di coltura, i terreni di coltura per le cellule P19, la divisione cellulare e molto altro ancora.
Esplorazione della linea cellulare P19: Domande frequenti
Bibliografia
- McBurney, M.W., Cellule di carcinoma embrionale P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): pp. 135-40.
- Bressler, J., et al., Linea cellulare di carcinoma embrionale P19: un modello per lo studio delle interazioni gene-ambiente. Cell Culture Techniques, 2011: pp. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey e G. Rödel, I ROS mitocondriali guidano la differenziazione delle cellule P19 pluripotenti murine. Stem Cell Research, 2018. 30: pp. 180-191.
- Fu, F., et al., L’acido retinoico all-trans induce la differenziazione delle cellule P19 in neuroni coinvolti nella via di segnalazione PI3K/Akt/GSK3β. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): pp. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., L’RNA non codificante lungo SNHG6 contribuisce alla formazione del difetto del setto ventricolare attraverso la regolazione negativa di miR-101 e l’attivazione della via Wnt/β-catenina. Die Pharmazie – Rivista internazionale di scienze farmaceutiche, 2019. 74(1): pp. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., L’estratto acquoso dei semi di Mucuna pruriens ha mostrato effetti neuroprotettivi e di inibizione dell’acetilcolinesterasi migliori rispetto alla L-dopa sintetica. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.