Cellule HK-2 - Analisi della funzione e della patologia renale con le cellule HK-2 nella ricerca nefrologica
HK-2 è una linea cellulare epiteliale renale umana immortalizzata comunemente utilizzata nella ricerca tossicologica. I ricercatori valutano gli effetti delle tossine ambientali su queste cellule renali. Inoltre, utilizzano le cellule HK-2 per studiare le malattie renali e i loro meccanismi sottostanti.
- Terreno di coltura
- Il terreno di coltura ideale per le cellule HK-2 è un terreno per linee cellulari cheratinocitarie contenente il 10% di siero fetale bovino, 0,05 mg/ml di estratto ipofisario bovino (BPE) e 5 ng/ml di fattore di crescita epidermico (EGF). Il terreno di coltura deve essere sostituito ogni 2-3 giorni alla settimana.
- Tempo di raddoppio
- Il tempo di raddoppio delle cellule HK-2 varia tra 47,3 h e 61,7 h.
- Tipo di crescita
- La linea cellulare epiteliale renale HK-2 è aderente.
- Livello di biosicurezza
- BSL-2
- Disponibile presso
- Cytion — Ordina HK-2
- Cellule HK-2: Origine e caratteristiche generali
- Linea cellulare HK-2: Informazioni sulla coltura
- Vantaggi e limiti delle cellule HK-2
- Applicazioni della linea cellulare HK-2 nella ricerca
- 5. Cellule HK-2: pubblicazioni di ricerca
- Risorse per la linea cellulare HK-2: protocolli, video e altro
- Domande frequenti
Cellule HK-2: origine e caratteristiche generali
È fondamentale conoscere l'origine e le caratteristiche generali di una linea cellulare per garantirne la corretta manipolazione, conservazione e utilizzo. Questa sezione dell'articolo tratterà i seguenti argomenti: Cosa sono le cellule HK-2 nel rene umano 2? Qual è il ruolo delle cellule HK-2? Cosa sono le cellule HK-2? Qual è l'origine della linea cellulare HK-2? Quali sono le dimensioni e la morfologia delle cellule HK-2?
- Le cellule del rene umano 2 (HK-2) sono un tipo di cellule tubulari prossimali provenienti dal tessuto renale normale di un adulto europeo. La linea cellulare HK-2 è stata ottenuta trasfettando cellule renali con un retrovirus ricombinante comprendente i geni E6/E7 del papillomavirus umano 16. Questo esperimento ha portato all'immortalizzazione e alla creazione di una linea cellulare epiteliale renale HK-2 in continua crescita.
- Le cellule HK-2 presentano una morfologia epiteliale.
- La dimensione delle cellule HK-2 varia tra 17,4 e 18,6 µm di diametro. Il diametro medio è di 18,2 µm [1].
Linea cellulare HK-2: informazioni sulla coltura
Le informazioni sulla coltura della linea cellulare renale umana 2 possono essere di grande aiuto prima di iniziare a lavorarci. In questa sezione dell'articolo vengono menzionate le informazioni fondamentali sulla coltura cellulare HK-2. Imparerete: Le cellule HK-2 sono aderenti? Qual è il tempo di raddoppio delle cellule HK-2? Quale terreno di coltura viene utilizzato per le cellule HK-2?
Punti chiave per la coltura delle cellule HK-2
Tempo di raddoppio della popolazione:
Il tempo di raddoppio delle cellule HK-2 varia tra 47,3 h e 61,7 h.
Adesive o in sospensione:
La linea cellulare epiteliale renale HK-2 è aderente.
Rapporto di subcoltura:
Le cellule HK-2 vengono subcoltivate con un rapporto compreso tra 1:2 e 1:4. Le cellule HK-2 aderenti vengono lavate con 1 x PBS e incubate a temperatura ambiente per 8-10 minuti dopo l'aggiunta della soluzione Accutase. Il terreno di coltura viene aggiunto alle cellule dissociate e centrifugato. Le cellule raccolte vengono accuratamente risospese e versate in nuove fiasche per la coltura.
Terreno di crescita:
Il terreno di coltura ideale per le cellule HK-2 è un terreno per linee cellulari cheratinocitarie contenente 10% di siero fetale bovino, 0,05 mg/ml di estratto ipofisario bovino (BPE) e 5 ng/ml di fattore di crescita epidermico (EGF). Il terreno di coltura deve essere sostituito ogni 2-3 giorni a settimana.
Condizioni di crescita:
Le colture della linea cellulare renale umana 2 vengono mantenute in un incubatore umidificato con un'alimentazione di CO2 al 5% a 37 °C.
Conservazione:
Le cellule congelate vengono conservate nella fase vapore dell'azoto liquido o a una temperatura inferiore a -150 °C in un congelatore a temperatura ultra-bassa.
Processo di congelamento e terreno:
I terreni di congelamento CM-1 o CM-ACF sono ideali per il congelamento delle cellule HK-2. In breve, si opta per un metodo di congelamento lento che consente un abbassamento della temperatura di solo 1 grado Celsius al minuto e protegge le cellule da qualsiasi shock.
Processo di scongelamento:
Le cellule congelate vengono scongelate in un bagno d'acqua a una temperatura di 37 °C. A queste cellule vengono aggiunti terreni di coltura freschi e vengono risospese. Successivamente, le cellule vengono trasferite in una nuova fiasca contenente terreno di crescita. Dopo 24 ore il terreno viene sostituito per rimuovere i componenti del mezzo di congelamento.
Livello di biosicurezza:
Le colture cellulari HK-2 sono mantenute in laboratori di livello di biosicurezza 1.
Vantaggi e limiti delle cellule HK-2
HK-2 è una linea cellulare epiteliale del tubulo prossimale umano ampiamente utilizzata. Come altre linee cellulari, presenta alcuni vantaggi e limiti. Questa sezione illustrerà alcuni dei principali pro e contro della linea cellulare renale umana 2.
Vantaggi
I principali vantaggi della linea cellulare HK-2 includono:
Ben caratterizzata
La linea cellulare HK-2 è ampiamente caratterizzata in termini di morfologia, dimensioni e genoma. Sono stati condotti numerosi studi di ricerca su queste cellule renali normali.
Immortalizzata
HK-2 è una linea cellulare continua con una durata di vita prolungata, che le consente di essere propagata attraverso diversi passaggi. Questa caratteristica garantisce una fornitura continua di cellule per gli esperimenti di laboratorio.
Caratteristiche epiteliali del tubulo prossimale
Le cellule HK-2 presentano un fenotipo ben differenziato, caratteristico delle cellule del tubulo prossimale (PTC) presenti nel rene umano. Questa caratteristica unica rende le cellule HK-2 un prezioso modello in vitro per lo studio della fisiologia renale, dei processi cellulari e delle risposte a vari stimoli.
Limiti
Ecco alcune limitazioni della linea cellulare HK-2:
Modello in vitro
HK-2 funge da modello in vitro delle cellule renali normali, mostrando in particolare le caratteristiche delle cellule epiteliali del tubulo prossimale. Tuttavia, potrebbe non replicare completamente la complessità del tessuto renale umano e del microambiente presente in vivo.
Applicazioni della linea cellulare HK-2 nella ricerca
La linea cellulare HK-2 ha numerose applicazioni nella ricerca tossicologica. Di seguito abbiamo discusso alcuni usi specifici e significativi di questa linea cellulare del tubulo prossimale umano nella ricerca.
- Fisiologia renale: le cellule HK-2 sono comunemente utilizzate per studiare la fisiologia e le funzioni renali normali. I ricercatori impiegano queste cellule epiteliali del tubulo prossimale per studiare i canali ionici, i processi di trasporto e altri meccanismi cellulari che regolano l'omeostasi renale. Ad esempio, i ricercatori hanno studiato il ruolo dei canali Transient Receptor Potential Channel 6 (TRPC6) nella morte cellulare indotta dal (+)-Conocarpan (CNCP), un neolignano, nelle cellule epiteliali renali HK-2 [2].
- Malattie renali: la linea cellulare renale umana 2 viene utilizzata per studiare diverse malattie renali, come il danno renale acuto e la nefropatia diabetica, e i loro meccanismi cellulari e molecolari sottostanti. Ad esempio, alcune ricerche hanno scoperto che i livelli di metilazione della proteina Klotho sono collegati al danno renale. La riduzione della metilazione del promotore del gene Klotho può aumentarne l’espressione e alleviare il danno renale indotto nei modelli murini diabetici db/db e nelle cellule HK-2 trattate con glucosio elevato [3].
- Studi tossicologici: le cellule HK-2 sono un ottimo strumento di ricerca per valutare i potenziali effetti di vari farmaci, sostanze chimiche e inquinanti ambientali. Questi studi possono aiutare i ricercatori a valutare la sicurezza dei farmaci e gli effetti collaterali sulle cellule renali. Ad esempio, uno studio pubblicato nel 2022 ha valutato i potenziali effetti dei polisaccaridi e dell'estratto acquoso dell'erba naturale Polygonatum kingianum (PK) sulla nefrotossicità indotta dall'uranio nelle cellule HK-2. È stato riscontrato che il PK esercita effetti protettivi e previene l'avvelenamento da uranio nelle cellule renali [4].
5. Cellule HK-2: Pubblicazioni scientifiche
Di seguito sono riportate alcune interessanti pubblicazioni di ricerca che trattano delle cellule epiteliali renali HK-2.
Questo studio pubblicato su Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity (2022) ha ipotizzato che l'RNA circolare HIPK3 possa ridurre l'inibizione della proliferazione delle cellule HK-2 causata dalla tossicità da iperglicemia. Inoltre, può inibire la morte cellulare regolando la cascata miR-326/miR-487a-3p/SIRT1.
Questa pubblicazione di ricerca su Nanomedicine (2020) ha valutato diversi meccanismi di tossicità delle nanoparticelle d'oro (AuNPs) nelle cellule tumorali 786-0 e nelle cellule epiteliali del tubulo prossimale HK-2.
Questo articolo è stato pubblicato su Renal Failure (2022). I risultati indicano che il microRNA-320c può ridurre la tossicità indotta dall'alto livello di glucosio nelle cellule renali (HK-2) agendo sul PTEN e inibendo la via di segnalazione PI3K/AKT.
Questo studio pubblicato su Tissue Engineering Part A (2022) ha suggerito che gli esosomi derivati da cellule staminali mesenchimali prevengono la transizione epiteliale-mesenchimale delle cellule renali HK-2.
L'articolo pubblicato su Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) afferma che l'lncRNA TapSAKI potenzia la risposta infiammatoria e la morte cellulare delle cellule HK-2 regolando la via di segnalazione microRNA-22/PTEN/TLR4/NF-κB.
Risorse per la linea cellulare HK-2: protocolli, video e altro
HK-2 è una linea cellulare molto conosciuta. Ecco alcune risorse che descrivono il protocollo di coltura cellulare HK-2.
- Coltura cellulare HK-2: questo sito web è ricco di informazioni sulla coltura cellulare HK-2. Ad esempio, fornisce la ricetta del terreno di coltura per le cellule HK-2, il protocollo di passaggi e il protocollo per la gestione e il mantenimento di colture proliferative e crioconservate.
- Passaggio delle cellule: questo video vi aiuterà a imparare un protocollo generale di divisione o passaggio per le linee cellulari aderenti.
Riferimenti
- Handl, J., et al., L'effetto del passaggio ripetuto sulla suscettibilità delle cellule HK-2 del tubulo prossimale umano ai composti tossici. Physiological Research, 2020. 69(4): p. 731.
- Yang, G., et al., L'attivazione dei canali TRPC6 contribuisce alla morte cellulare apoptotica indotta dal (+)-conocarpan nelle cellule HK-2. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: p. 281-290.
- Yang, X.H., et al., L'EGCG attenua il danno renale invertendo l'ipermetilazione del klotho nei topi diabetici db/db e nelle cellule HK-2. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Effetti protettivi dei polisaccaridi e dell'estratto acquoso di Polygonatum kingianum sulla tossicità indotta dall'uranio nelle cellule renali umane (HK-2). International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: p. 68-79.