HuH7 sejtek: A hepatoma és HCV kutatás kapuja
A humán hepatomából származó HuH7 sejtvonal tumorigén epithelszerű sejtek immortalizált gyűjteménye. Ez a vonal, valamint a HuH7.5 és HuH7.5.1 származékai a primer hepatociták gyakorlati helyettesítőjeként szolgálnak kísérleti kontextusban. Elsősorban a hepatitis C-vírus (HCV) fertőzés és a hepatóma patofiziológiájának vizsgálatára szolgáló sejttenyésztési modellekben használják.
A HuH7 sejtek eredete és jellemzői
A HuH7 sejtvonal eredetének, főbb jellemzőinek és optimális tenyésztési körülményeinek megértése alapvető fontosságú a kutatásban való alkalmazása előtt.
A HuH7 sejtvonalat Sato, J és Nakabayshi, H hozta létre 1982-ben, egy magasan differenciált hepatocita rákos vonalból származik. Eredetileg egy 57 éves japán férfi hepatocelluláris karcinómájából származik. A HuH7 sejteket az jellemzi, hogy képesek különböző fiziológiailag releváns anyagokat, például albumin és alfa-fetoprotein termelésére, és nagyfokú érzékenységet mutatnak a HCV-fertőzéssel szemben, ami alkalmassá teszi őket a HCV-replikon rendszerekben való felhasználásra. Ez a tulajdonság teszi a sejtvonalat értékessé a HCV-ellenes terápiák szűrése és fejlesztése szempontjából. A HuH7 sejtek epitélszerű, hatszögletű morfológiát mutatnak, és a növekedés során 2D monorétegekké alakulva tapadnak a felületekhez. a HuH7 sejtek átmérője átlagosan 21,9 µm, a nagyobb, lapított megjelenés felé hajlamosak. A HuH7 sejtvonalat heterogén kromoszómaszám jellemzi, amely jellemzően 55 és 63 között mozog, ami a sejtpopuláción belüli genetikai variabilitást tükrözi. Ez a heterogenitás a sejtkultúra során fellépő szelekciós nyomás következménye, és a különböző laboratóriumi körülmények között változhat.
Összehasonlító elemzés: HuH7 vs. HuH7.5 sejtvonalak
A HuH7.5 sejtvonal, amely a HuH7 származéka, elsősorban a RIG-I (DDX58) génben lévő miszense mutáció miatt különbözik, amely kulcsfontosságú az intracelluláris vírusellenes válasz szempontjából. Ez a mutáció fokozza a HuH7.5 sejtek megengedő képességét a genomi és szubgenomi HCV RNS replikációjára, ami megkülönbözteti a HuH7 szülő HuH7 sejtvonaltól a virológiai kutatásokban való hasznossága szempontjából.
HuH7 sejtek tenyésztése: Az optimális növekedéshez szükséges alapvető protokollok
A HuH7 sejtek, amelyek számtalan kutatási tanulmány szerves részét képezik, pontos tenyésztési körülményeket igényelnek ahhoz, hogy jól fejlődjenek. Ez a szakasz a HuH7 sejtek tenyésztésének alapvető szempontjait vizsgálja, biztosítva a sejtek fiziológiai jelentőségének fenntartását a tudományos vizsgálatokban.
A megduplázódási idő dinamikája
A HuH7 sejtek megduplázódási ideje jellemzően 24 óra, bár a sejttenyésztő közegek eltérései ezt az időtartamot 36-48 órára is meghosszabbíthatják, ami rávilágít a környezeti feltételek sejtburjánzásra gyakorolt hatására.
Adhéziós jellemzők
A HuH7 sejtek túlnyomórészt kétdimenziós monoréteget alkotnak, és a tenyésztőlemezek és lombikok felszínéhez tapadnak, ami hangsúlyozza, hogy a stabil fizikai szubsztrátumot részesítik előnyben a szuszpenziós kultúrákkal szemben.
Optimális vetési sűrűség
A HuH7 sejtek 30-90%-os konfluencia-tartományban tartása kritikus fontosságú a proliferációs arány 90%-os konfluencia felett történő csökkenésének megakadályozása érdekében. Az accutázzal történő szubkultiválás megkönnyíti a leválasztást, lehetővé téve a kísérleti igényekhez igazított sűrűségű vetést, az optimális (2×10⁴ sejt/cm²) és a telítési (6×10⁴ sejt/cm²) sűrűségtől kezdve.
Táplálkozási követelmények
A magas glükóztartalmú, 10% magzati szarvasmarha szérummal (FBS) kiegészített Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) ideális táplálkozási környezetet biztosít a HuH7 sejtek számára. A sejtek tartós egészségéhez elengedhetetlen a tápközeg rendszeres, ideális esetben heti 2-3 alkalommal történő megújítása.
Környezeti feltételek
Az 5% CO₂-ra és 37°C-ra beállított párásított inkubátor optimálisan támogatja a HuH7 sejtkultúrát, szimulálva a sejtek aktivitását elősegítő fiziológiai körülményeket.
Hosszú távú tárolás
A HuH7 sejteket a hosszú távú megőrzés érdekében folyékony nitrogén gőzfázisában kell tárolni, így biztosítva életképességüket a jövőbeli kutatások számára.
Kriokonzerválás és helyreállítás
A sejtek életképességének fenntartása érdekében a kriokonzerválás során a fokozatos fagyasztási technika alkalmazása a legfontosabb. A sejteket speciálisan erre a célra kifejlesztett fagyasztási közegben, például CM-1-ben kell szuszpendálni, biztosítva a zökkenőmentes átmenetet a kriogén tárolásra. A felolvasztás után a sejtkultúrák újbóli létrehozásához elengedhetetlen a 37 °C-os vízfürdőben történő gyors, de kíméletes újraélesztés, majd centrifugálás a fagyasztási közeg eltávolítása érdekében, és a friss táptalajba történő újraszuszpendálás.
Biológiai biztonsági megfontolások
A HuH7 sejtvonal kezelése és szaporítása során ajánlott az 1. biológiai biztonsági szintű protokoll betartása, amely megfelel a laboratóriumi biztonsági és etikai előírásoknak.
Ezen aprólékosan felvázolt tenyésztési feltételek betartásával a kutatók biztosíthatják a HuH7 sejtek robusztus növekedését és fiziológiai jelentőségét a tudományos kutatások során, megnyitva az utat a hepatoma és a hepatitis C vírus kutatásának úttörő felfedezései előtt.
Fedezze fel a HuH7 sejteket az Ön tudományos áttöréseihez
HuH7 sejtek: Hu7 Hu7: Előnyök és hátrányok
A HuH7 sejtvonal egyszerre kínál előnyöket és korlátokat. Vegyük át ennek a sejtvonalnak a lehetséges előnyeit és hátrányait, mivel ez segíthet eldönteni, hogy megfelelő-e a kísérleteihez.
A HuH7 sejtvonal előnyei
A HuH7 sejtek számos olyan jellemző tulajdonsággal rendelkeznek, amelyek vonzóvá teszik őket a kutatási felhasználás szempontjából.
- Könnyű szaporítás: A HuH7 sejtvonal más humán hepatóma sejtvonalakkal ellentétben szérum hozzáadása nélkül is könnyen tenyészthető; a CLS azonban a 10% FBS-t és 2 mM L-glutamint tartalmazó RPMI 1640-et ajánlja. A HuH-7 sejtek olyan növekedési faktort választanak ki, amely segíti a sejtek szérum nélküli növekedését.
- Transzfekciós rugalmasság: A HuH7 sejtvonalat széles körben használják transzfekciós célokra a HCV-genom iránti nagyfokú befogadóképessége miatt. Ezért ezek a sejtek kulcsfontosságúak a HCV-ellenes gyógyszerek szűrésében és fejlesztésében.
- A humán hepatociták alternatívája: A HuH7 sejtvonal kiválóan helyettesíti a humán hepatocitákat. Segíthet a kutatóknak a máj gyógyszer-transzporterek tanulmányozásában és bizonyos gyógyszerek MRP-kkel (multi-drug resistance-associated proteinekkel) való kölcsönhatásának megértésében.
- Xenograft egérmodell kifejlesztése: A HuH7 sejteket egy sejtvonalból származó xenograft egérmodell előállítására használták. Ez az állatmodell értékes betekintést nyújthat a kutatók számára a protein-kináz inhibitorokkal és a rákellenes terápiákkal kapcsolatban.
- Rákkutatás: A HuH7 sejtvonal egy emberi májrákos sejtvonal, amely segíti a kutatókat a májrákos vizsgálatok elvégzésében.
A HuH-7 sejtvonal korlátai
A HuH7 sejtvonal tenyésztésével kapcsolatban vannak bizonyos korlátozások.
Mikrobiális szennyeződés: A bakteriális szennyeződés a leggyakoribb probléma a sejttenyésztés során. Ha fertőzés történik, azt a táptalaj pH-változása és zavarossága alapján lehet megkülönböztetni. A bakteriális szennyeződések közül a mikoplazma-szennyeződés általában nem szembetűnő. Lassan azonban befolyásolja a sejtvonal morfológiáját, génexpresszióját és egyéb jellemzőit.
Kultúraidőszak: Bár a HuH7 sejtvonal halhatatlan, a tenyésztési időszak túllépése fokozatosan befolyásolhatja a sejtek egészségét. Ez befolyásolhatja a proliferációs rátát és a génexpressziót, ami csökkentheti az eredmények reprodukálhatóságát. A HuH7 sejtvonal esetében a passzázsszámot 20-25 alatt kell tartani.
A HuH-7 sejtek alkalmazása
Ez a humán hepatomából származó sejtvonal számos kutatási alkalmazást kínál. Az alábbiakban néhány kutatási területet írunk le, ahol a HuH7 sejtvonalat használják.
Gyógyszerrezisztencia: A HuH7 egy hepatocelluláris karcinóma (HCC) sejtvonal, amely felhasználható a potenciális májrákkezelésekkel szembeni gyógyszerrezisztencia vizsgálatára. Egy 2021-ben végzett tanulmány a HuH7 sejteket, amelyeket kísérletileg rezisztenssé tettek a sorafenibre, új és hatékony terápiás szerek, azaz mitokondrium-akkumuláló önszerveződő peptidek kifejlesztésére használta.
Genetikai betekintés és molekuláris profilalkotás a HuH7 sejteken keresztül: A különböző HuH7 sejtvonalak, beleértve a különböző származékokat és variánsokat is, lehetővé tették a génexpresszió és a specifikus genomikai markerek betegségben betöltött szerepének mélyebb megértését. Az olyan technikákat, mint a Raman-spektroszkópia, amelyet olyan kutatók, mint Evgeny Gladilin vezettek be, molekuláris és sejtprofilok készítésére alkalmazták a HuH7-sejteken, betekintést nyújtva a vírusfertőzésre adott sejtválaszba. A Raman-spektroszkópiában rejlő lehetőségek olyan módszerekkel kombinálva, mint a kvantitatív proteomika, megkönnyítették a gazdasejtek válaszainak feltárását, beleértve az interferonválaszt és a lipidcseppekben bekövetkező változásokat, amelyek kritikus fontosságúak a HCV-replikáció és a SARS hatásainak megértéséhez. A különböző onkogén markerek expressziója vizsgálható, hogy megértsük viselkedésüket bármilyen kezelésre adott válaszként, mint például egy tanulmányban, amely HuH7 sejteket használt a Kaempferol vegyület hatásának vizsgálatára az MMP9 és az AKT útvonal génjeinek expressziós mintázatára. Ezek az útvonalak szabályozzák a hepatocelluláris karcinóma metasztázisát és invazivitását. Egy másik, nemrégiben készült tanulmány szintén a Wnt/β-katenin jelátviteli kaszkád génjének szerepét vizsgálta a HCC-sejtek túlélésében és növekedésében.
Gyógyszerfejlesztés: A HuH7 sejteket széles körben használják a májrák elleni gyógyszerszűrési és -fejlesztési vizsgálatokban. Számos tanulmányt végeztek számos növényi kivonat, növényi alapú vegyületek, nanorészecskék és más terápiás szerek HCC elleni gátló potenciáljának vizsgálatára. Egy 2022-ben végzett tanulmány egy radionuklid pro-apoptotikus és rákellenes tulajdonságait vizsgálta a hepatocelluláris karcinóma ellen HuH7 sejtvonalon.
HuH7 sejtek: A HuH7 sejtek avíruskutatás és a sejtanalízis egyik fókuszpontjává váltak a vírusfertőzések és a fertőző betegségek, különösen a hepatitis C vírus (HCV) és a koronavírusokkal, például a SARS-CoV-2 vírussal való kölcsönhatásaik, amelyek a 2019-es koronavírusos betegségért felelősek (COVID-19), tanulmányozásának sarokkövévé váltak. A HuH7 sejteket használó kísérleti HCV-sejtkultúra-rendszerek (HCVcc) kifejlesztése jelentősen előmozdította a HCV bonyolult szaporodási folyamatának és a HCV-fertőzéshez nélkülözhetetlen gazdatényezőknek a tanulmányozását. Ez magában foglalja a HCV RNS-replikáció hatékonyságának és a fertőző virionok termelésének vizsgálatát. A HuH7 sejtek különböző vonalai, beleértve az öregedő és fertőzött változatokat is, változatos panelt biztosítanak a fertőzés multiplicitásának, a vírusszaporodásnak és a vírusok, például a SARS elleni gátlási mechanizmusoknak a vizsgálatához.
Összefoglalva, a HuH7 sejtek vizsgálata a tudományos vizsgálatok széles spektrumát öleli fel, a vírusfertőzéseket alátámasztó molekuláris mechanizmusoktól az e kórokozók által kiváltott részletes sejtválaszokig. A HuH7-kutatáson keresztül a tudományos közösség továbbra is feltárja a gazdatest-vírus kölcsönhatások összetett dinamikáját, hozzájárulva a vírusellenes stratégiák fejlesztéséhez és a vírusbetegségek sejtes meghatározó tényezőinek megértéséhez.
HuH-7 publikációk
A HuH7 sejtvonalat különböző célokra használó publikációk sokasága jelent meg. Az alábbiakban néhány közelmúltbeli és jelentős publikációt említünk meg.
Ez a tanulmány a Nature Scientific Reports című folyóiratban jelent meg 2021-ben. A tanulmány kísérletileg indukált szorafenib-rezisztens hepatocelluláris karcinóma sejteket (HuH7 sejtvonal) használt a közelmúltban kifejlesztett Mito-FF (mitokondrium-akkumuláló önszerveződő peptidek) pro-apoptotikus és tumorellenes hatásainak vizsgálatára.
Ezt a cikket Po-Chung Ju és munkatársai az Environmental Toxicology folyóiratban publikálták 2021-ben. Ebben a tanulmányban a kutatók egy növényi alapú vegyület, a kaempferol áttétképződés-ellenes potenciálját vizsgálták a hepatocelluláris karcinóma sejtekkel (HuH7) szemben. Emellett a májráksejtek metasztázisát és invázióját szabályozó jelátviteli útvonalakat is vizsgálták.
Ez a tanulmány a Drug Development Research folyóiratban jelent meg 2022-ben. Ez a tanulmány a daphnetin vegyület rákellenes szerepét magyarázza a HCC ellen. Ez a növényi eredetű vegyület gátolja a Wnt/β-katenin jelátvitelt, hogy korlátozza a rákos sejtek növekedését.
A Drug Design, Development, and Therapy folyóiratban megjelent kutatási cikk az EGFR jelátvitel szerepét írja le a hepatocelluláris karcinóma növekedésében és metasztázisában. A tanulmány HuH7 sejteket használt fel az RGFP966, egy hiszton-deacetiláz 3 (HDAC3) inhibitor HCC elleni gátló hatásának vizsgálatára az EGFR útvonal génjeinek elnyomása révén.
A Cells folyóiratban megjelent publikáció a HuH7 sejtek felhasználását jelzi egy radionuklid, azaz a rénium-perrenát HCC-ellenes potenciáljának vizsgálatában.
Ez a tanulmány az International Journal of Nanomedicine című folyóiratban jelent meg. A tanulmány HuH7 sejteket használt a kurkumin-tartalmú kitozán nanorészecskék vírusellenes aktivitásának vizsgálatára a HCV 4a genotípusával szemben.
HuH-7 erőforrások: HUMH HuH-77: protokollok, videók és egyéb anyagok: protokollok, videók és egyéb
A HuH7 sejtvonal tenyésztéséhez és fenntartásához számos forrás áll rendelkezésre. Az alábbiakban megismerheti a HuH7 sejttenyésztési és transzfekciós protokollok magyarázatához rendelkezésre álló forrásokat és oktató videókat.
Sejttenyésztési protokollok
Az alábbi források segíthetnek a HuH7 tenyésztésének és fenntartásának megkezdésében.
HuH-7 sejttenyésztési információk és források: Ez a weboldal számos hasznos információt tartalmaz, beleértve a HuH7 sejtvonal szubkultúrázási protokollját, tárolását és kezelését.
- HuH7 sejttenyésztési protokoll
A HuH7 transzfekciós protokolljai
A HuH7 sejteket többféleképpen transzfektálják. Az alábbi források a transzfekciós protokollokra, a szükséges reagensekre és vegyszerekre, hasznos tippekre és óvintézkedésekre vonatkozó információk nagy részét tartalmazzák.
- HUH-7 transzfekció: Ez a weboldal részletesen ismerteti a HuH7 sejtvonal transzfekciós reagenseit. Ezenkívül a következő linkeket is tartalmazza az egyszerű Huh7 transzfekciós protokollhoz és a Huh7 CRISPR/Cas9 transzfekciós protokollhoz.
A HuH7 sejtvonalhoz kapcsolódó videók
Számos oktatóvideó áll rendelkezésre az alapvető szubkultúrázási, lemezképzési és transzfekciós protokollokról, és még sok másról.
- Sejtek passziválása: Sejtkultúra alapjai: Ez a videó a sejtvonal alapvető tenyésztési protokolljáról szól.
Arra számítunk, hogy az ebben a cikkben található információk segítenek Önnek abban, hogy alapvető és haladó ismereteket szerezzen a HuH7 sejtvonallal kapcsolatban, mielőtt dolgozna rajta. Ha ezeket a sejteket szeretné felhasználni a kutatómunkájában, megrendelheti tőlünk.