Humán köldökvénás endotélsejtek (HUVEC)
AHUVEC elsődleges endotélsejtek, amelyek az orvosbiológiai kutatásban kulcsfontosságú eszközként szolgálnak. Segítenek a kutatóknak az angiogenezis, az érrendszeri biológia és az olyan betegségek, mint az érelmeszesedés és a rák tanulmányozásában. A HUVEC-eket az endotélsejtek viselkedésének, a sejtek jelátviteli mechanizmusainak és a gyógyszerek tesztelésének vizsgálatára használják, értékes betekintést nyújtva a szív- és érrendszeri betegségek és a rák lehetséges terápiáiba vagy kezeléseibe. Modellrendszerként is szolgálnak az érbiológiai vizsgálatokhoz.
Ez a cikk tartalmazza mindazokat az alapvető információkat, amelyekre a HUVEC sejtekkel való munka előtt szüksége van. Kitér a következőkre:
- A HUVEC sejtek eredete és általános tulajdonságai
- A HUVEC sejtvonalra vonatkozó tenyésztési információk
- HUVEC sejtvonal: HUVECV HUVEC HUV: Előnyök és korlátozások: Előnyök és korlátozások
- A HUVEC sejtek alkalmazása a kutatásban
- HUVEC sejteket tartalmazó publikációk
- Források a HUVEC sejtvonalhoz: Jegyzőkönyvek, videók, és még sok más
1. A HUVEC sejtek eredete és általános jellemzőis
Egy sejtvonal eredetének és általános tulajdonságainak ismerete kulcsfontosságú annak eldöntésében, hogy alkalmas-e az Ön vizsgálatához. Ez a szakasz segít megismerni ezeket a HUVEC endotélsejtekkel kapcsolatos alapvető információkat: Mire használják a HUVEC sejteket? Mi a HUVEC sejtek teljes alakja? Melyek a HUVEC megkülönböztető jellemzői? Mi a Huvec morfológia? Mekkora a HUVEC sejtek átmérője? Mi a Huvec sejtek mérete?
- A HUVEC sejteket az emberi köldökzsinórvéna endotheliumából nyerik.
- A HUVEC morfológiája endotélszerű. Általában poligonális alakúak, és középen kerek maggal rendelkeznek.
- A HUVEC sejtek mérete 17 μm átmérőjű.
- Ezek az endotélsejtek diploidok. Modális kromoszómaszámuk 46.
HUVEC TERT2
A HUVEC TERT2 egy immortalizált sejtvonal, amely primer humán köldökvénás endotélsejtekből (HUVEC) származik. Ezt a humán telomeráz reverz transzkriptáz (TERT) génnek a HUVEC sejtek genomjába történő bevitelével fejlesztették ki. Ez a módosítás segített meghosszabbítani az élettartamukat a kultúrában, lehetővé téve a hosszabb távú kísérleteket a primer HUVEC-ekkel kapcsolatos korlátozások nélkül.
Mi a különbség a HUVEC és a HMEC-1 között?
A HUVEC és a HMEC-1 endotélsejtvonalak szerkezete és komplexitása összehasonlítható. A HMEC-1 sejtek azonban a sejtek méretét és szemcsézettségét tekintve homogénebb populációt mutatnak, mint a HUVEC-ek. Ez csökkentheti a kísérleti adatok eltéréseit.
2.a HUVEC sejtvonalra vonatkozó tenyésztési információk
A cikk ezen szakasza arra összpontosít, hogy felvértezze Önt a HUVEC sejttenyésztéssel kapcsolatos alapvető ismeretekkel. Ez nagyban segíti majd a velük végzett munkáját. Itt találja meg a válaszokat az alábbi gyakran feltett kérdésekre: Mi a HUVEC megduplázódási ideje? Mi a HUVEC sejtek vetési sűrűsége? Hány passzázs van a HUVEC-ekben? Mi a HUVEC sejtmédia? Hogyan kell a HUVEC-eket tenyészteni?
A HUVEC sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai
|
Megduplázódási idő: |
A HUVEC sejtek megduplázódási ideje nagyjából 23,5 óra. Mindazonáltal ez a sejttenyésztési körülményektől és a passzázsszámtól függően változhat. |
|
Adhezív vagy szuszpenzióban: |
A HUVEC egy adherens sejtvonal. A sejtek növekednek és monoréteget alkotnak. |
|
Osztott arány: |
A HUVEC-ek szubkultiválási aránya 1:2 és 1:4 között van. Ültetéshez; a sejteket 1x foszfátpuffer sóoldattal mossuk, és környezeti hőmérsékleten 8-10 percig disszociációs oldatot (Accutase) adunk hozzá. Ezt követően táptalajt adunk hozzá, és a levált sejteket centrifugáljuk. A felülúszót el kell dobni, és a sejtpelletet óvatosan reszuszpendáljuk. A sejteket új tenyésztőlombikba adagoljuk a növekedéshez. |
|
Növesztőközeg: |
A HUVEC sejtek tenyésztéséhez az Endothelial Cell Growth Mediumot használják. A médiumot 2-3 naponta cseréljük. A HUVEC sejtek legfeljebb 8-10 passzázsig használhatóak. |
|
Növekedési feltételek: |
A humán endotél sejtvonalat (HUVEC) 37°C-on, 5% CO2-t tartalmazó, párásított inkubátorban tartjuk. |
|
Tárolás: |
A HUVEC sejteket általában -150 °C alatti hőmérsékleten, ultraalacsony hőmérsékletű fagyasztóban vagy folyékony nitrogén gőzfázisában tárolják. Ez hosszabb ideig védi a sejtek életképességét. |
|
Fagyasztási folyamat és közeg: |
A HUVEC sejtek tartósításához CM-1 vagy CM-ACF fagyasztási közeg használata javasolt. Általában a lassú fagyasztási folyamat ajánlott, mivel ez percenként csak 1 °C-os hőmérsékletcsökkenést tesz lehetővé, megakadályozva a sejtek sokkhatását és fenntartva az életképességet. |
|
Felolvasztási folyamat: |
A fagyasztott sejtek felolvasztásához helyezze őket 37 °C-os, előmelegített vízfürdőbe 40-60 másodpercre, amíg csak egy kis jégcsomó marad. Ezután adjunk friss tápfolyadékot a sejtekhez, és centrifugáljuk. Erre a lépésre azért van szükség, hogy a sejtek eltávolítsák a fagyasztóközeg maradványait. Reszuszpendálja a sejtpelletet, és helyezze át a sejteket egy új lombikba a táptalajjal. |
|
Biológiai biztonsági szint: |
A HUVEC sejtkultúrák megfelelő kezeléséhez 1. biológiai biztonsági szintű laboratórium szükséges. |
3. Előnyök és korlátozások
Más humán sejtvonalakhoz hasonlóan a HUVEC sejteknek is megvannak a maguk előnyei és korlátai. Ebben a szakaszban néhány figyelemre méltó, a kutatásban való felhasználásukat jelentősen befolyásoló tulajdonsággal foglalkozunk.
Előnyök
A HUVEC sejtek legfontosabb előnyei a következők:
-
Endotélsejt modell
Rendkívül releváns modell az angiogenezis, az érrendszeri biológia és az endotél működésével kapcsolatos betegségek tanulmányozására.
-
Könnyen tenyészthető
Viszonylag könnyen izolálhatók emberi köldökzsinórból. Nincsenek kényes sejttenyésztési követelmények, és könnyen karbantarthatók a kutatólaboratóriumokban.
Korlátozások
A HUVEC endotélsejtvonalhoz kapcsolódó korlátok a következők:
-
Véges élettartam
A HUVEC-ek élettartama véges, jellemzően 8-10 passzázsra jó, ami korlátozza a hosszú távú kísérleteket. A passzázsok számának növekedésével szeneszcencián mehetnek keresztül.
4. A HUVEC sejtek alkalmazása a kutatásban
A HUVEC sejtek jelentős potenciállal rendelkeznek az orvosbiológiai területen történő különböző alkalmazásokban. A következőkben a HUVEC sejtek néhány fontos kutatási felhasználási módját emeljük ki.
- Szív- és érrendszeri betegségekkel kapcsolatos vizsgálatok: A HUVEC-sejtvonal értékes endotélsejtmodell, így betekintést nyújt a szív- és érrendszeri betegségek, például az ateroszklerózis, a trombózis és a magas vérnyomás hátterében álló mechanizmusokba. A kutatók ezeket a sejteket az endotheldiszfunkció, az oxidatív stressz és a gyulladás hátterében álló mechanizmusok vizsgálatára használják. Például egy 2020-ban végzett tanulmány HUVEC-eket használt, és feltárta, hogy a hosszú nem kódoló RNS TTTY15 kulcsfontosságú szerepet játszik a hipoxia által közvetített érrendszeri endotélsejt-károsodás javításában a miRNS-186-5p tengely megcélzásával [1].
- Rákkutatás: HUVEC-ek ideálisak az érrendszeri biológia tanulmányozására. Ezért a daganatos angiogenezis és az endotélsejtek kölcsönhatásainak vizsgálatára használják őket. Ez segíti a kutatókat annak megértésében, hogy a daganatok hogyan jutnak többlet vérellátáshoz és hogyan szaporodnak. Például Hui Wang és munkatársai megállapították, hogy a szájüregi laphámsejtes karcinóma (OSCC) sejtek által felszabadított exoszómák megemelik a miRNS-210-3p szintjét és csökkentik az ephrin A3 expresszióját a HUVEC sejtekben, és elősegítik a csövek kialakulását a PI3K/AKT kaszkád szabályozásán keresztül, amint azt a HUVEC csövek kialakulásának vizsgálatával megerősítették [2].
- Drogvizsgálat: A HUVEC endotélsejteket széles körben használják drogtesztelésre. A kutatók a HUVEC sejtek segítségével in vitro értékelhetik a természetes vegyületek, nanorészecskék és egyéb terápiás szerek gyógyszerhatékonyságát, toxicitását és lehetséges mellékhatásait. Egy tanulmány például a Rheum ribes kivonatból szintetizált ezüst nanorészecskék toxicitását értékelte HUVEC sejtek felhasználásával [3].
5. HUVEC sejteket tartalmazó publikációk
A cikk ezen szakasza felsorol néhány gyakran idézett és érdekes kutatási publikációt, amelyekben HUVEC sejtek szerepelnek.
Ez a tanulmány az Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology (2019) című folyóiratban jelent meg. Megállapította, hogy a gamma-aminovajsav (GABA), egy neurotranszmitter, gátolja a H2O2által kiváltottoxidatív stresszt a HUVEC sejtekben; így hatékony farmakológiai szer lehet az oxidatív károsodással összefüggő szív- és érrendszeri betegségek ellen.
A Biochemical and Biophysical Research Communications (2020) című folyóiratban megjelent tanulmány azt vizsgálta, hogy az ösztrogén hogyan szabályozza egy jelátvivő, a glikoprotein130 (gp130) jelátvivőjét a HUVEC sejtekben.
A szubsztrát merevsége szabályozta az A549 sejtek és HUVEC-ek migrációs és angiogenezis-potenciálját
A Journal of Cellular Physiology (2017) című folyóiratban megjelent kutatási cikk a különböző szubsztrátmerevségnek az endotélsejtek (A549 és HUVECs) migrációjára és angiogenezisére gyakorolt hatását vizsgálta. E hatások értékelésére HUVEC migrációs és HUVEC angiogenezis vizsgálatokat végeztek.
A réz-oxid nanorészecskék lizoszomális lerakódása HUVEC sejtek pusztulását váltja ki
A Biomaterials (2018) című szaklapban megjelent kutatás a réz-oxid nanorészecskék érrendszeri endotélsejtekben kifejtett toxicitásáért felelős lehetséges mechanizmusokat vizsgálja.
A Medicine (2020) című szaklapban megjelent tanulmány azt javasolta, hogy egy természetes vegyület, a kvercetin az AP-1 és az NF-kB jelátviteli útvonalak szabályozásával gátolja a TNF-alfa által közvetített HUVEC apoptózist és gyulladást.
6. Források a HUVEC sejtvonalhoz: Jegyzőkönyvek, videók, és még több
Az alábbiakban néhány, a HUVEC sejtekkel kapcsolatban elérhető online forrás található.
- HUVEC transzfekció: Ez a weboldal linkje átfogó ismereteket nyújt a HUVEC transzfekcióval kapcsolatban. Tartalmaz például transzfekciós reagensekkel kapcsolatos információkat és az in vitro HUVEC transzfekcióra vonatkozó protokollt.
A következő link tartalmazza a HUVEC sejttenyésztési protokollt.
- HUVEC sejttenyésztés: Ez a dokumentum segít megismerni a HUVEC sejttenyésztési protokollokat a szubkultúrázáshoz és a kriokonzervált tenyészetek kezeléséhez.
Hivatkozások
- Zheng, J., et al., LncRNS TTTY15 szabályozza a hipoxia által kiváltott érrendszeri endotélsejt-károsodást a miR-186-5p célzott megcélzásán keresztül a szív- és érrendszeri betegségekben. European Review for Medical & Pharmacological Sciences, 2020. 24(6).
- Wang, H., et al., OSCC exoszómák szabályozzák a miR-210-3p-t célzó EFNA3-at, hogy elősegítsék a szájüregi rák angiogenezisét a PI3K / AKT útvonalon keresztül. BioMed research international, 2020. 2020.
- Unal, İ. és S. Egri, Ezüst nanorészecskék bioszintézise a Rheum ribes vizes kivonatának felhasználásával, jellemzése és toxicitásának értékelése HUVEC-eken és Artemia salinán. Inorganic and Nano-Metal Chemistry, 2022: p. 1-14.