HT-29 sejtvonal
Az HT-29 egy humán kolorektális ráksejtvonal, amely széles körű alkalmazási lehetőségeket kínál a rák- és toxikológiai kutatásokban. Ezek a sejtek például érzékenyek a kolorektális rák elleni standard kemoterápiás kezelésekre. Ezenkívül a HT-29 sejtvonal egy jól jellemzett in vitro modell a bélhám baktériumfertőzésre adott reakciójának vizsgálatára. A HT-29 sejtek utánozzák az érett bélsejtek, azaz az enterociták jellemzőit, ezért alkalmasak tapadási és mechanisztikai vizsgálatokra.
- Növekedési tápközeg
- Lásd a termékoldalt
- Duplázódási idő
- Lásd a termékoldalt
- Növekedési típus
- Adherens
- Biológiai biztonsági szint
- BSL-1
- Kapható
- Cytion — Rendelés HT-29
- HT-29 sejtek: Eredet és általános információk
- A HT-29 sejtvonal sejtkultúrájával kapcsolatos információk
- HT-29 sejtek: Előnyök és korlátozások
- HT-29 sejtek: Alkalmazások
- 5. Kutatási publikációk az HT-29 sejtekről
- HT-29 sejtek Források: protokollok, videók és egyéb anyagok
- Hivatkozások
- Gyakran ismételt kérdések
HT-29 sejtek: Eredet és általános információk
Bármely sejtvonal használata előtt ismernie kell annak általános jellemzőit és eredetét. Ez a szakasz segít megismerni: Mik azok a HT-29 sejtek? A HT-29 egy vastagbélrákos sejtvonal? Mi a HT-29 sejtek morfológiája?
Mi az a HT-29 sejtvonal? A HT-29 egy vastagbél-adenokarcinóma sejtvonal, amelyet 1964-ben Trempe és Fogh hoztak létre. A sejteket eredetileg egy kolorektális adenokarcinómában szenvedő kaukázusi nő (44 éves) primer tumorából nyerték [1]. Létrehozása óta ezt a sejtvonalat a rákok biológiájának tanulmányozására használják.
A HT-29 sejtek morfológiája: A HT-29 sejtvonal általában epitheliális jellegű morfológiával rendelkezik. A differenciált sejtek monorétegben növekednek, szoros sejt-sejt kapcsolódási pontokat képeznek, és apikális kefehatárral rendelkeznek. Ha ezeket a sejteket glükózhiányos táptalajon tenyésztik, vagy olyan induktorokat adnak hozzájuk, mint a butirát vagy a sav, enterocita-szerű jellemzőket mutatnak.
Sejtméret: A HT-29 kolorektális rákos sejtvonal átmérője 11 μm.
Genom és ploidia: A HT-29 sejtvonal kromoszómáinak modális száma 71. Ez 68 és 72 között változhat. Ezenkívül a HT-29 sejtek egyszerűsített kromoszómaszáma hipertriploid, a 2S komponens előfordulási aránya 2,4 %.
Mi az a HT29 MTX? A HT29 MTX egy metotrexát-rezisztens sejtvonal, amelyet az eredeti HT-29 humán vastagbélrákos sejtvonalból izoláltak 10 µM metotrexáthoz való adaptációval. Ezek a sejtek nyálkahártyát kiválasztó érett pohársejtek jellemzőit mutatják.
Az HT-29 sejtvonal tenyésztésével kapcsolatos információk
A sejtvonal alapvető tenyésztési követelményeinek ismerete megkönnyítheti a vele végzett munkát. Tudnia kell: mennyi a HT-29 sejtvonal duplázódási ideje? Mekkora a HT-29 sejtek beültetési sűrűsége? Milyen táptalajt használjon a HT-29 sejtekhez?
Duplázódási idő
A HT-29 sejtvonal átlagos duplázódási ideje 24 óra.
Adherens/szuszpenziós
A HT-29 egy adhezív sejtvonal.
Beültetési sűrűség
Az HT-29 sejtek esetében ajánlott beültetési sűrűség 3 x 104 sejt/cm2. A tenyésztett sejteket 1X PBS-sel mossuk, majd 8–10 perces Accutase-inkubáció után leválasztjuk. Friss táptalajt adunk hozzá, majd a sejteket centrifugáljuk. A sejtpelletet újra szuszpendáljuk, és a sejteket az ajánlott sejtsűrűségben új lombikokba adagoljuk.
Növekedési tápközeg
A HT-29 sejtek optimális tenyésztéséhez 2,5 mM L-glutaminnal és 10 % FBS-szel kiegészített Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM) táptalajt használnak. A táptalajt hetente 2–3 alkalommal kell cserélni.
Növekedési feltételek
A HT-29 sejtek növekedéséhez 37 °C hőmérsékletű, párásított inkubátor és 5 %-os CO2-ellátás szükséges.
Tárolás
Ezeket a sejteket folyékony nitrogén gázfázisában, -195 °C alatti hőmérsékleten tárolják.
Fagyasztóközeg és eljárás
Az HT-29 sejtvonalhoz használt fagyasztóközeg a CM-1 vagy a CM-ACF. A sejteket lassú fagyasztási eljárással fagyasztják le, amely 1 °C-os hőmérsékletcsökkenést eredményez, és hatékonyan védi a sejtek életképességét.
Felolvasztási eljárás
A fagyasztott HT-29 sejteket 37 °C-ra beállított vízfürdőben olvasztják fel. Ezeket a sejteket újra szuszpendálhatják, és közvetlenül a friss tenyészközegű lombikba adagolhatják. Ezzel ellentétben a felolvasztott sejteket centrifugálhatjuk a fagyasztó közeg elemeinek eltávolítása érdekében, majd friss tápközegben reszuszpendálhatjuk és lombikokban tenyészthetjük.
Biológiai biztonsági szint
Az HT-29 sejtvonal kezeléséhez és fenntartásához az 1. biológiai biztonsági szintet alkalmazzák.
HT-29 sejtek: Előnyök és korlátok
Minden sejtvonalnak megvannak a maga előnyei és hátrányai, amelyek megkülönböztetik a többi sejtvonalaktól. Ez a szakasz az HT-29 sejtekkel kapcsolatos főbb előnyöket és korlátokat tárgyalja.
Előnyök
A HT-29 sejtek fő előnyei a következők:
-
Könnyen tenyészthető
Az HT-29 sejtvonal kezelése és fenntartása egyszerű, tenyésztéséhez nincsenek bonyolult követelmények. Kutatólaboratóriumokban széles körben tenyésztik.
-
Bélsejtek in vitro modellje
A HT-29 sejtek meghatározott tenyésztési körülmények között érett bélsejtekké (enterocitákká és nyálkát termelő sejtekké) differenciálódhatnak. Ezeket sejtes modellként használják az emésztés és a biológiai hozzáférhetőség tanulmányozására.
-
Magas transzfekciós hatékonyság
A HT-29 vastagbélrákos sejtek magas transzfekciós hatékonysággal rendelkeznek, ezért alkalmasak génkifejeződés és -szabályozás vizsgálatokra. Különböző módszerekkel átmeneti és stabil transzfekciós kísérletek is elvégezhetők.
-
Gyógyszerérzékenység
A HT-29 sejtek érzékenyek a vastagbélrák kezelésében általánosan alkalmazott kemoterápiás gyógyszerekre, például a fluorouracilra és az oxaliplatinra. Ezeket a sejteket használják a gyógyszerrezisztencia vizsgálatához és a kolorektális karcinóma potenciális terápiás gyógyszereinek szűréséhez.
Korlátozások
-
Heterogenitás
Az HT-29 sejtek, más rákos sejtvonalakhoz hasonlóan, heterogenitást mutatnak, és előfordulhat, hogy nem alkotnak egységes sejtpopulációt. Ez befolyásolhatja az eredmények reprodukálhatóságát bizonyos vizsgálatokban, és kisebb eltéréseket okozhat a kísérleti eredményekben.
-
Korlátozott differenciálódás
A HT-29 sejtek differenciálódási potenciálja korlátozott. Nem differenciálódnak teljesen bél- vagy vastagbélsejtekké, hanem csak néhány jellegzetes tulajdonságot mutatnak. Ez a korlátozás korlátozhatja alkalmazásukat összetettebb biológiai folyamatok tanulmányozásában.
HT-29 sejtek: Alkalmazások
A HT-29 sejtvonalat széles körű alkalmazási lehetőségei miatt széles körben tenyésztik a kutató laboratóriumokban. Ez a szakasz csak néhány jelentős alkalmazási területét mutatja be a HT-29 sejteknek.
Rákkutatás: A HT-29 egy kolorektális adenokarcinóma sejtvonal, ezért a rák progressziójának, fejlődésének és az azt alátámasztó molekuláris mechanizmusoknak a tanulmányozására használják. Egy 2018-ban végzett tanulmány a HT-29 sejtvonalat használta a metasztázisért felelős sejtmolekulák vizsgálatára. A tanulmány megállapította, hogy a vimentin és a CXCR4 gének szabályozzák a sejtek metasztázisát. A microRNA-193a-5p mimik transzfekciója viszont csökkentheti e gének mRNS-szintjét, és sikeresen csökkentheti a ráksejtek metasztázisát [2].
Toxikológiai kutatás: A HT-29 sejtvonalat széles körben használják a toxikológiai kutatásokban. Ezeket a kolorektális karcinóma sejteket különböző vizsgálatokkal használják különböző gyógyszerjelöltek toxicitásának értékelésére. Például egy tanulmány a Syzygium cumini növény etanolos kivonatának toxicitási potenciálját vizsgálta a HT-29 sejtvonalon. Az eredmények a HT-29 sejtek növekedésének jelentős gátlását mutatták, ami a kivonat ígéretes rákellenes tulajdonságaira utal [3].
Mikrobiológia: A HT-29 felhasználható gazdasejt-rendszerként potenciális mikroorganizmusok, azaz baktériumok és vírusok patogenezisének vizsgálatára. A kutatók mikrobákkal fertőzhetik meg a HT-29 sejteket, hogy vizsgálják azok virulenciáját és a gazdaszervezet reakcióját. Egy ilyen tanulmányban HT-29 sejteket használtak a tejsavbaktériumok probiotikus tulajdonságainak feltárására [4]. Egy másik tanulmányban HT-29 sejteket használtak a bakteriofágkezelések hatékonyságának és biztonságosságának értékelésére [5].
5. Az HT-29 sejtekről szóló tudományos publikációk
Ez a szakasz néhány figyelemre méltó, HT-29 sejtekről szóló publikációt mutat be, amelyek segítenek a kutatási tanulmány kidolgozásában.
Ez a tanulmány a Syzygium cumini etanolos kivonatot javasolta potenciális rákellenes szerként a HT-29 kolorektális ráksejtvonal ellen. A kivonat jelentősen gátolta a ráksejtek növekedését.
A Bioscience Reports folyóiratban megjelent cikkben egy Tetradrine nevű vegyület rákellenes hatását tesztelték HT-29 sejteken. Az eredmények kimutatták, hogy a tetrandrine a sejtjelátviteli útvonalak szabályozása révén gátolja a ráksejtek szaporodását és növekedését.
Ez a tanulmány azt állította, hogy a miRNA-193a-5p potenciálisan szabályozhatja a HT-29 sejtek metasztázisát a metasztázissal kapcsolatos gének szabályozásával.
Ez a cikk 2018-ban jelent meg a Nature Scientific Reports folyóiratban. A tanulmány a javasolt bakteriofágkezelés hatékonyságának értékeléséhez a HT-29 tumorigenikus sejtvonalat használta bélsejt-modellként.
Ebben a tanulmányban a kutatók HT-29 sejteket használtak a tejsavbaktériumok probiotikus aktivitásának vizsgálatához. Érdekes módon a tanulmány kimutatta, hogy a laktobacillusok megakadályozzák a patogén baktériumok tapadását a vastagbélsejtekhez.
HT-29 sejtek Források: protokollok, videók és egyéb anyagok
Ez a szakasz néhány, a HT-29 sejtekről elérhető online forrást ismertet, amelyek segítenek megismerni azok fenntartásának, tenyésztésének és transzfekciójának protokolljait.
Sejtkultúra-protokollok
Az alábbi források útmutatást nyújtanak az HT-29 sejtek szubkultiválásához.
- HT-29 sejtek tenyésztése: Ez a link alapvető ismereteket nyújt a HT-29 sejtek tenyésztőközegéről, felolvasztásáról és szubkultiválásáról.
- HT-29 tenyészetek fenntartása: Ez a cikk minden hasznos információt tartalmaz az HT-29 sejtek tenyésztéséről és fenntartásáról.
Transzfekciós protokollok
A HT-29 sejtvonal transzfekciós hatékonysága kiváló, ezért gyakran használják génkifejeződési vizsgálatokhoz. Az alábbi források leírják a sejtek transzfekciójára alkalmazható protokollokat.
- HT-29 transzfekciója: Ez a weboldal link részletes protokollt tartalmaz az HT-29 sejtek transzfekciójáról.
- HT-29 sejtvonal transzfekciója: Ez a dokumentum a HT-29 sejtvonal plazmid DNS-sel történő transzfekciójának protokollját írja le.
A HT-29 sejtvonalhoz kapcsolódó videók
Íme néhány videó a tumorigenikus sejtvonal tenyésztéséről és fenntartásáról.
- Sejtek átültetése: Ez a videó az adhezív sejtvonalak átültetési protokollját mutatja be.
- HT-29 sejtek transzfekciója: Ez a videó bemutatja a HT-29 sejtek transzfekciójára alkalmazott módszert.
Reméljük, hogy a cikkben szereplő információk hasznosak és elegendőek az HT-29 sejtvonal kezeléséhez és fenntartásához. Ha tanulmányában HT-29 sejteket kíván használni, rendeljen tőlünk.
Hivatkozások
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles és I. Recio, HT29 sejtvonal. Az élelmiszer-bioaktív anyagok hatása az egészségre: in vitro és ex vivo modellek, 2015: 113–124. o.
- Shirafkan, N. és társai, a mikroRNS-193a-5p gátolja az emberi HT-29 vastagbélrákos sejtek migrációját a metasztázis útvonalának elnyomásával. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): 8775–8783. o.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean és R. Safaralizadeh, A Syzygium cumini etanolos kivonat rákellenes hatásának értékelése a HT-29 vastagbélrákos sejtvonalon. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: 575–581. o.
- Fonseca, H.C. és társai, A lactobacillusok probiotikus tulajdonságai és az enteropatogén baktériumok Caco-2 és HT-29 sejtekhez való adhéziójának gátlására gyakorolt hatása. Probiotics and antimicrobial proteins, 2021. 13: 102–112. o.
- Shan, J. és társai, A bakteriofágok az emberi sejtekkel rendelkező baktériumokra virulensebbek, mint a baktériumkultúrában; a HT-29 sejtekből nyert ismeretek. Tudományos jelentések, 2018. 8(1): 5091. o.
