HK-2 sejtek - Vesefunkció és patológia vizsgálata HK-2 sejtekkel a vesekutatásban
AHK-2 egy immortalizált emberi vese epitél sejtvonal, amelyet a toxikológiai kutatásokban gyakran használnak. A kutatók a környezeti toxinok hatásait értékelik ezekre a vesesejtekre. Emellett a HK-2 sejteket a vesebetegségek és a mögöttes mechanizmusok vizsgálatára is használják.
Ez a cikk szinte minden lényeges információt ismertet a HK-2 sejtekről, beleértve általános jellemzőiket, sejttenyésztési körülményeiket, kutatási alkalmazásaikat és még sok minden mást. A következőket fogja megtudni:
- HK-2 sejtek: A HK HK HK-k: Eredet és általános jellemzők
- HK-2 sejtvonal: Zellkultúrával kapcsolatos információk
- A HK-2 sejtek előnyei és korlátai
- A HK-2 sejtvonal alkalmazása a kutatásban
- HK-2 sejtek: HK HK-2-2: Kutatási publikációk
- A HK-2 sejtvonal forrásai: Jegyzőkönyvek, videók és egyéb
1.hK-2 sejtek: HK HK-2: Eredet és általános jellemzők
A sejtvonal származását és általános jellemzőit feltétlenül ismerni kell a sejtvonal megfelelő kezeléséhez, karbantartásához és felhasználásához. A cikk ezen szakasza a következőkkel foglalkozik: Mik a HK-2 sejtek az emberi vese 2-ben? Mi a HK2 szerepe? Melyek a HK2 sejtek? Mi a HK-2 sejtvonal eredete? Milyen a HK-2 sejtek mérete és morfológiája?
- A humán vese 2 (HK-2) sejtek az európai felnőttek normális veseszövetéből származó proximális tubuláris sejtek egy típusa. A HK-2 sejtvonalat úgy hozták létre, hogy a vesesejteket a humán papillomavírus 16 E6/E7 génjeit tartalmazó rekombináns retrovírussal transzfektálták. Ez a kísérlet egy folyamatosan növekvő HK-2 veseepithel sejtvonal immortalizációját és létrehozását eredményezte.
- A HK-2 sejtek epiteliális morfológiát mutatnak.
- A HK-2 sejtek mérete 17,4-18,6 µm közötti átmérőjű. Az átlagos átmérő 18,2 µm [1].
2.hK-2 sejtvonal: A tenyésztéssel kapcsolatos információk
A humán vese-2 sejtvonal tenyésztésével kapcsolatos információk jelentősen segíthetnek a vele való munka előtt. A HK-2 sejtvonal kultúrájával kapcsolatos elengedhetetlen információk a cikk ezen részében szerepelnek. Tudni fogja: A HK-2 sejtek tapadnak-e? Mennyi a HK-2 sejtek megduplázódási ideje? Milyen táptalajt használnak a HK-2 sejtek tenyésztéséhez?
A HK-2 sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai
|
A populáció megduplázódási ideje: |
A HK-2 sejtek megduplázódási ideje 47,3 óra és 61,7 óra között mozog. |
|
Adhezív vagy szuszpenzióban: |
A HK-2 veseepitél sejtvonal tapadós. |
|
Szubkultivációs arány: |
A HK-2 sejteket 1:2 és 1:4 közötti arányban szubkultiválják. Az adherens HK-2 sejteket 1 x PBS-szel mossuk, és az Accutase oldat hozzáadása után 8-10 percig szobahőmérsékleten inkubáljuk. A disszociált sejtekhez tápfolyadékot adunk, majd centrifugáljuk. Az összegyűjtött sejteket óvatosan reszuszpendáljuk és új lombikokba öntjük a tenyésztéshez. |
|
Növesztőközeg: |
A keratinocita sejtvonal táptalaja, amely 10% magzati szarvasmarha szérumot, 0,05 mg/ml szarvasmarha hipofízis kivonatot (BPE) és 5 ng/ml epidermális növekedési faktort (EGF) tartalmaz, ideális HK-2 sejtközeg. A médiumot hetente 2-3 naponta kell cserélni. |
|
Növekedési feltételek: |
A humán vese 2 sejtvonal tenyészeteit 37 °C-on, 5%-os CO2-ellátással, párásított inkubátorban tartjuk. |
|
Tárolás: |
A fagyasztott sejteket folyékony nitrogén gőzfázisában vagy -150 °C alatti hőmérsékleten, ultraalacsony hőmérsékletű fagyasztóban tárolják. |
|
Fagyasztási folyamat és közeg: |
A CM-1 vagy CM-ACF fagyasztási közeg ideális a HK-2 sejtek fagyasztásához. Röviden, lassú fagyasztási módszert választanak, amely percenként csak 1 Celsius-fokos hőmérséklet-csökkenést tesz lehetővé, és megvédi a sejteket a sokktól. |
|
Felolvasztási folyamat: |
A fagyasztott sejteket 37 Celsius-fokos vízfürdőben olvasztjuk fel. A sejtekhez friss táptalajt adunk, és újraszuszpendáljuk őket. Ezt követően a sejteket egy új, tenyésztőközeget tartalmazó lombikba adagoljuk. 24 óra elteltével a tápfolyadékot kicseréljük a fagyasztási tápfolyadék összetevőinek eltávolítása érdekében. |
|
Biológiai biztonsági szint: |
A HK-2 sejtkultúrákat 1. biológiai biztonsági szintű laboratóriumokban tartják fenn. |
3.a HK-2 sejtek előnyei és korlátai
A HK-2 egy széles körben használt humán proximális tubulus epitél sejtvonal. Más sejtvonalakhoz hasonlóan ez is rendelkezik néhány előnnyel és korláttal. Ez a szakasz a humán vese-2 sejtvonal néhány kulcsfontosságú előnyét és hátrányát tárgyalja.
Előnyök
A HK-2 sejtvonal fő előnyei a következők:
|
Jól jellemzett |
A HK-2 sejtvonal morfológiája, mérete és genomja tekintetében széleskörűen jellemzett. Számos kutatást végeztek ezeken a normál vesesejteken. |
|
Immortalizált |
A HK-2 egy folyamatos, meghosszabbított élettartamú sejtvonal, amely lehetővé teszi, hogy több passzázson keresztül szaporítsák. Ez a tulajdonsága biztosítja a folyamatos sejtellátást a laboratóriumi kísérletekhez. |
|
A proximális tubulus epithelialis jellemzői |
A HK-2 sejtek jól differenciált fenotípust mutatnak, amely az emberi vesében található proximális tubulus sejtekre (PTC) jellemző. Ez az egyedülálló tulajdonság teszi a HK-2 sejteket értékes in vitro modellé a vese fiziológiájának, a sejtfolyamatoknak és a különböző ingerekre adott válaszoknak a tanulmányozására. |
Korlátozások
Az alábbiakban a HK-2 sejtvonal néhány korlátját ismertetjük:
|
In vitro modell |
A HK-2 a normál vesesejtek in vitro modelljeként szolgál, különösen a proximális tubulus epitélsejtek jellemzőit mutatja. Azonban nem biztos, hogy teljes mértékben reprodukálja az emberi veseszövet és az in vivo található mikrokörnyezet összetettségét. |
4.a HK-2 sejtvonal alkalmazása a kutatásban
A HK-2 sejtvonalnak számos alkalmazása van a toxikológiai kutatásban. Az alábbiakban ennek a humán proximalis tubuláris sejtvonalnak néhány specifikus és jelentős kutatási felhasználási módját ismertetjük.
- Vesefiziológia: A HK-2 sejteket általában a normál vesefiziológia és -funkciók tanulmányozására használják. A kutatók ezeket a proximális tubulus epitélsejteket alkalmazzák az ioncsatornák, a transzportfolyamatok és a vese homeosztázisát szabályozó egyéb sejtmechanizmusok vizsgálatára. A kutatók például a tranziens receptor potenciálcsatorna 6 (TRPC6) csatornák szerepét vizsgálták a (+)-konokarpan (CNCP), egy neolignán által indukált sejthalálban a HK-2 vesehámsejtekben [2].
- Vesebetegségek: A humán vese-2 sejtvonalat különböző vesebetegségek, azaz az akut vesekárosodás és a diabéteszes nefropátia, valamint az ezek hátterében álló sejt- és molekuláris mechanizmusok vizsgálatára használják. Ilyen például a kutatás megállapította, hogy a klotho fehérje metilációs szintje összefügg a vesekárosodással. A Klotho gén promóterének metilációjának csökkentése fokozhatja annak expresszióját és enyhítheti a diabéteszes db/db egérmodellekben és magas glükózzal kezelt HK-2 sejtekben indukált vesekárosodást [3].
- Toxikológiai vizsgálatok: A HK-2 sejtek kiváló kutatási eszköznek számítanak a különböző gyógyszerek, vegyi anyagok és környezeti szennyező anyagok lehetséges hatásainak értékelésére. A vizsgálatok segíthetnek a kutatóknak a gyógyszerek biztonságosságának és a vesesejtekre gyakorolt mellékhatásainak értékelésében. Ilyen például egy 2022-ben közzétett tanulmány, amely egy természetes gyógynövény, a Polygonatumkingianum (PK) poliszacharidjainak és vizes kivonatának lehetséges hatásait értékelte az urán által kiváltott nefrotoxicitásra HK-2 sejtekben. Megállapították, hogy a PK védőhatást fejt ki és megakadályozza az uránmérgezést a vesesejtekben [4].
5.hK-2 sejtek: HK HK-2: kutatási publikációk
Az alábbiakban néhány érdekes kutatási publikáció található, amelyekben HK-2 vesehámsejtek szerepelnek.
A Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity (2022) című szaklapban megjelent tanulmány azt javasolta, hogy a cirkuláris RNS HIPK3 csökkentheti a magas glükóztoxicitás okozta HK-2 sejtproliferációs gátlást. Ezenkívül a miR-326/miR-487a-3p/SIRT1 kaszkád szabályozásával gátolhatja a sejthalált.
A Nanomedicine (2020) című folyóiratban megjelent kutatási közleményben az arany nanorészecskék (AuNPs) különböző toxicitási mechanizmusait vizsgálták 786-0 ráksejtekben és HK-2 proximális tubuláris epitélsejtekben.
A magas glükóz által kiváltott toxicitás a HK-2 sejtekben a miRNS-320c gátlásával enyhíthető
Ez a cikk a Renal Failure (2022) című folyóiratban jelent meg. Az eredmények szerint a mikroRNS-320c a PTEN célba juttatásával és a PI3K/AKT szignál gátlásával csökkentheti a magas glükóz által kiváltott toxicitást a vesesejtekben (HK-2).
A Tissue Engineering Part A (2022) című szaklapban megjelent tanulmány azt javasolta, hogy a mesenchymalis őssejtekből származó exoszómák megakadályozzák a HK-2 vesesejtek epitelialis-mezenchymalis átmenetét.
A Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) cikke szerint az lncRNS TapSAKI a mikroRNS-22/PTEN/TLR4/NF-κB jelátviteli útvonal szabályozásával fokozza a HK-2 sejtek gyulladásos válaszát és a sejthalált.
6.a HK-2 sejtvonalra vonatkozó források: HK2 HK-2: protokollok, videók és egyéb eszközök: protokollok, videók és egyéb
A HK-2 egy híres sejtvonal. Az alábbiakban néhány forrás található, amelyek leírják a HK-2 sejttenyésztési protokollt.
- HK-2 sejttenyésztés: Ez a weboldal HK-2 sejttenyésztési információkkal gazdagodott. Ilyen például a HK-2 sejtközeg receptje, a passzázs protokoll, valamint a proliferatív és kriokonzervált kultúrák kezelésére és fenntartására vonatkozó protokoll.
- Sejtpasszázs: Ez a videó segít megtanulni egy általános osztási vagy passzázs protokollt az adherens sejtvonalakhoz.
Hivatkozások
- Handl, J., et al., The effect of repeated passaging on the susceptibility of human proximal tubular HK-2 cells to toxic compounds. Physiological Research, 2020. 69(4): p. 731.
- Yang, G., et al., A TRPC6 csatornák aktiválása hozzájárul a (+)-konokarpan által kiváltott apoptotikus sejthalálhoz HK-2 sejtekben. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: p. 281-290.
- Yang, X.H., et al., Az EGCG mérsékli a vesekárosodást a klotho-hipermetiláció visszafordításán keresztül diabéteszes db/db egerekben és HK-2 sejtekben. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2020. 2020.
- Li, W., et al., Polygonatum kingianum poliszacharidok és vizes kivonat védő hatása az urán által kiváltott toxicitásra emberi vese (HK-2) sejtekben. International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: p. 68-79.