HK-2 sejtek – A vesefunkció és a veseelváltozások vizsgálata HK-2 sejtekkel a vese kutatásban
A HK-2 egy halhatatlanított emberi veseepiteliális sejtvonal, amelyet gyakran használnak toxikológiai kutatásokban. A kutatók ezeken a vesesejtekön értékelik a környezeti toxinok hatását. Ezenkívül HK-2 sejteket alkalmaznak a vesebetegségek és azok alapjául szolgáló mechanizmusok vizsgálatára is.
- Növekedési tápközeg
- A 10% borjú szérumot, 0,05 mg/ml szarvasmarha agyalapi mirigy kivonatot (BPE) és 5 ng/ml epidermális növekedési faktort (EGF) tartalmazó keratinocita sejtvonal táptalaj ideális HK-2 sejt táptalaj. A táptalajt hetente 2–3 naponta kell cserélni.
- Duplázódási idő
- A HK-2 sejtek duplázódási ideje 47,3 és 61,7 óra között mozog.
- Növekedési típus
- A HK-2 veseepiteliális sejtvonal adhezív.
- Biológiai biztonsági szint
- BSL-2
- Kapható
- Cytion — HK-2 megrendelése
HK-2 sejtek: eredet és általános jellemzők
A sejtvonal megfelelő kezelése, fenntartása és használata érdekében elengedhetetlenül fontos ismerni a sejtvonal eredetét és általános jellemzőit. A cikk ezen része a következőket tárgyalja: Mik azok a HK-2 sejtek az emberi vese 2-ben? Mi a HK2 szerepe? Mik azok a HK2 sejtek? Mi a HK-2 sejtvonal eredete? Milyen méretűek és milyen morfológiájúak a HK-2 sejtek?
- A Human Kidney 2 (HK-2) sejtek egyfajta proximális tubuláris sejtek, amelyek egy európai felnőtt normális vese szövetéből származnak. A HK-2 sejtvonalat úgy hozták létre, hogy a vesesejteket egy olyan rekombináns retrovírussal transzfektálták, amely a humán papillomavírus 16 E6/E7 génjeit tartalmazta. Ez a kísérlet a folyamatosan növekvő HK-2 veseepiteliális sejtvonal halhatatlanságát és létrehozását eredményezte.
- A HK-2 sejtek epiteliális morfológiát mutatnak.
- A HK-2 sejtek átmérője 17,4–18,6 µm között mozog. Az átlagos átmérő 18,2 µm [1].
HK-2 sejtvonal: Tenyésztési információk
A humán vese 2 sejtvonal tenyésztésével kapcsolatos információk jelentősen segíthetnek a munkában. A cikk ezen szakaszában a HK-2 sejtvonal tenyésztésével kapcsolatos legfontosabb információkat ismertetjük. Megtudhatja: A HK-2 sejtek adhezívek? Mennyi a HK-2 sejtek duplázódási ideje? Milyen táptalajt használnak a HK-2 sejtek tenyésztéséhez?
A HK-2 sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai
Populáció duplázódási ideje:
A HK-2 sejtek duplázódási ideje 47,3 és 61,7 óra között mozog.
Adhezív vagy szuszpenziós:
A HK-2 veseepiteliális sejtvonal adhezív.
Szubkultivációs arány:
A HK-2 sejteket 1:2 és 1:4 arányban szubkultiválják. Az adhezív HK-2 sejteket 1 x PBS-sel mossák, majd Accutase oldat hozzáadása után 8–10 percig szobahőmérsékleten inkubálják. A szétválasztott sejtekhez tenyésztő táptalajt adnak, majd centrifugálják. Az összegyűjtött sejteket óvatosan reszuszpendálják, és új lombikokba öntik tenyésztés céljából.
Növekedési tápközeg:
A 10% borjú szérumot, 0,05 mg/ml szarvasmarha agyalapi mirigy kivonatot (BPE) és 5 ng/ml epidermális növekedési faktort (EGF) tartalmazó keratinocita sejtvonal táptalaj ideális HK-2 sejt táptalaj. A táptalajt hetente 2–3 naponta kell cserélni.
Növekedési feltételek:
A humán vese 2 sejtvonal tenyészetét 37 °C-on, 5% CO2-ellátással, párásított inkubátorban tartják.
Tárolás:
A fagyasztott sejteket folyékony nitrogén gőzfázisában vagy -150 °C alatti hőmérsékleten, ultraalacsony hőmérsékletű fagyasztóban tárolják.
Fagyasztási folyamat és táptalaj:
A CM-1 vagy CM-ACF fagyasztó táptalajok ideálisak a HK-2 sejtek fagyasztásához. Röviden: lassú fagyasztási módszert alkalmaznak, amely csak 1 Celsius-fokos hőmérsékletcsökkenést engedélyez percenként, és megvédi a sejteket a hőmérséklet-sokktól.
Felolvasztási folyamat:
A fagyasztott sejteket 37 °C-ra beállított vízfürdőben olvasztják fel. Ezeket a sejteket friss tenyészközeggel keverik össze és újra szuszpendálják. Ezután a sejteket egy új, tenyészközeget tartalmazó lombikba helyezik. 24 óra elteltével a közeget kicserélik, hogy eltávolítsák a fagyasztóközeg összetevőit.
Biológiai biztonsági szint:
A HK-2 sejtkultúrákat 1. biológiai biztonsági szintű laboratóriumokban tartják.
A HK-2 sejtek előnyei és korlátai
A HK-2 egy széles körben használt humán proximális tubulus epiteliális sejtvonal. Más sejtvonalakhoz hasonlóan ennek is vannak előnyei és korlátai. Ebben a részben a humán vese 2 sejtvonal néhány fontos előnyét és hátrányát ismertetjük.
Előnyök
A HK-2 sejtvonal fő előnyei a következők:
Jól jellemzett
A HK-2 sejtvonal morfológiája, mérete és genomja széles körben jellemzett. Számos kutatási tanulmány készült ezekről a normál vese sejtekre vonatkozóan.
Halhatatlanná tett
A HK-2 egy hosszú élettartamú, folyamatos sejtvonal, amely több passzáláson keresztül is szaporítható. Ez a tulajdonság biztosítja a sejtek folyamatos ellátását a laboratóriumi kísérletekhez.
Proximális tubulus epiteliális jellemzők
A HK-2 sejtek jól differenciált fenotípust mutatnak, amely jellemző az emberi vesében található proximális tubulus sejtekre (PTC-k). Ez az egyedülálló tulajdonság teszi a HK-2 sejteket értékes in vitro modellé a vesefiziológia, a sejtfolyamatok és a különböző ingerekre adott válaszok tanulmányozásához.
Korlátozások
Az HK-2 sejtvonal néhány korlátja:
In vitro modell
A HK-2 a normális vese sejtek in vitro modelljeként szolgál, különösen a proximális tubulus epiteliális sejtek jellemzőit mutatja. Ugyanakkor előfordulhat, hogy nem képes teljes mértékben leképezni az emberi vese szövetének és az in vivo mikro környezetnek a komplexitását.
A HK-2 sejtvonal alkalmazása a kutatásban
A HK-2 sejtvonal számos alkalmazási lehetőséget kínál a toxikológiai kutatásban. Itt néhány konkrét és jelentős kutatási felhasználási lehetőséget mutattunk be ennek az emberi proximális tubulusos sejtvonalnak.
- Vesefiziológia: A HK-2 sejteket általában a normális vesefiziológia és -funkciók tanulmányozására használják. A kutatók ezeket a proximális tubulus epiteliális sejteket alkalmazzák az ioncsatornák, a transzportfolyamatok és a vese homeosztázisát szabályozó egyéb sejtes mechanizmusok vizsgálatára. Például a kutatók tanulmányozták a Transient Receptor Potential Channel 6 (TRPC6) csatornák szerepét a (+)-Conocarpan (CNCP) – egy neolignan – által kiváltott sejthalálban a veseepithelsejtekben, HK-2 [2].
- Vesebetegségek: A humán vese 2 sejtvonalat különböző vesebetegségek, azaz az akut veseelégtelenség és a diabéteszes nefropátia, valamint azok alapjául szolgáló sejt- és molekuláris mechanizmusok vizsgálatára használják. Az ilyen kutatások például azt találták, hogy a klotho fehérje metilációs szintjei összefüggésben állnak a veseelégtelenséggel. A Klotho gén promóter metilációjának csökkentése fokozhatja annak expresszióját és enyhítheti a diabéteszes db/db egérmodellekben és a magas glükózszinttel kezelt HK-2 sejtekben kiváltott veseelégtelenséget [3].
- Toxikológiai vizsgálatok: A HK-2 sejtek kiváló kutatási eszközök különböző gyógyszerek, vegyi anyagok és környezeti szennyező anyagok potenciális hatásainak értékeléséhez. A vizsgálatok segíthetnek a kutatóknak a gyógyszerek biztonságosságának és a vese sejtekre gyakorolt mellékhatásainak értékelésében. Például egy 2022-ben publikált tanulmány értékelte a Polygonatumkingianum (PK) természetes gyógynövény poliszacharidjainak és vizes kivonatának potenciális hatásait az urán által kiváltott nefrotoxicitásra HK-2 sejtekben. Megállapították, hogy a PK védő hatást fejt ki és megakadályozza az uránmérgezést a vesesejtekben [4].
5. HK-2 sejtek: Kutatási publikációk
Az alábbiakban néhány érdekes kutatási publikációt mutatunk be, amelyek a HK-2 veseepiteliális sejteket tárgyalják.
A Diabetes, Metabolic Syndrome, and Obesity (2022) folyóiratban megjelent tanulmány szerint a kör alakú HIPK3 RNS csökkentheti a magas glükózszint toxicitása által okozott HK-2 sejtek szaporodásának gátlását. Ezenkívül gátolhatja a sejtek elhalását a miR-326/miR-487a-3p/SIRT1 kaszkád szabályozásával.
A Nanomedicine (2020) folyóiratban megjelent kutatási publikáció az arany nanorészecskék (AuNPs) különböző toxicitási mechanizmusait értékelte 786-0 ráksejtekben és HK-2 proximális tubulus epiteliális sejtekben.
A magas glükózszint által kiváltott toxicitás a HK-2 sejtekben a miRNA-320c gátlásával enyhíthető
Ez a cikk a Renal Failure (2022) folyóiratban jelent meg. Az eredmények szerint a mikroRNS-320c a PTEN-t célba véve és a PI3K/AKT jelátvitelt gátolva csökkentheti a magas glükózszint által kiváltott toxicitást a vese sejtekben (HK-2).
A Tissue Engineering Part A (2022) folyóiratban megjelent tanulmány szerint a mesenchimális őssejtekből származó exoszómák megakadályozzák a HK-2 vesesejtek epiteliális-mesenchimális átalakulását.
A Journal of Pharmacy and Pharmacology (2019) cikkben olvasható, hogy az lncRNA TapSAKI a mikroRNS-22/PTEN/TLR4/NF-κB jelátviteli út szabályozásával fokozza a HK-2 sejtek gyulladásos reakcióját és sejthalálát.
Források az HK-2 sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyebek
A HK-2 egy jól ismert sejtvonal. Íme néhány forrás, amely leírja a HK-2 sejtkultúra protokollját.
- HK-2 sejtkultúra: Ez a weboldal rengeteg információt tartalmaz az HK-2 sejtkultúráról. Például megadja az HK-2 sejtközeg receptjét, a passzálási protokollt, valamint a proliferatív és kriokonzervált kultúrák kezelésére és fenntartására vonatkozó protokollt.
- Sejtek átültetése: Ez a videó segít megismerni az adhezív sejtvonalak általános osztási vagy átültetési protokollját.
Hivatkozások
- Handl, J. és munkatársai: Az ismételt passzálás hatása az emberi proximális tubuláris HK-2 sejtek toxikus vegyületekkel szembeni érzékenységére. Physiological Research, 2020. 69(4): 731. o.
- Yang, G. és munkatársai, A TRPC6 csatornák aktiválása hozzájárul a (+)-konokarpán által kiváltott apoptotikus sejthalálhoz HK-2 sejtekben. Food and Chemical Toxicology, 2019. 129: 281–290. o.
- Yang, X.H. és munkatársai, Az EGCG enyhíti a vese károsodását a klotho hipermetilációjának visszafordításával diabéteszes db/db egerekben és HK-2 sejtekben. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2020. 2020.
- Li, W. és munkatársai, A Polygonatum kingianum poliszacharidok és vizes kivonat védő hatása az urán által kiváltott toxicitásra emberi vese (HK-2) sejtekben. International Journal of Biological Macromolecules, 2022. 202: 68–79. o.