BV2 sejtek - Központi idegrendszeri kutatás a BV2 mikroglia sejtekkel magyarázva
ABV2 egy egérből származó mikroglia sejtvonal, amelyet széles körben használnak az idegtudományi kutatásokban. Ez az immortalizált sejtvonal in vitro modellként szolgálhat a neurodegeneratív betegségek és a kapcsolódó sejtállapotok és folyamatok, azaz a neuroinflammáció tanulmányozására. Emellett a BV2 sejteket a primer mikroglia alternatív modellrendszerének tekintik.
Ez a cikk egy egér mikroglia sejtvonal, a BV2 eredetét, sejttenyésztési információit és kutatási alkalmazásait tárgyalja. Különösen a következőket fogjuk végigvenni:
- A BV2 sejtek eredete és általános jellemzői
- BV2 sejtvonal: A tenyésztéssel kapcsolatos információk
- A BV2 sejtek előnyei és korlátai
- A BV2 sejtvonal alkalmazása a kutatásban
- BV2 sejtek: BV2 sejtek: kutatási publikációk
- A BV2 sejtvonal forrásai: Protokollok, videók, és még sok más
1. A BV2 sejtek eredete és általános jellemzői
A cikk ezen szakasza a BV2 sejtvonal eredetét és azokat az általános jellemzőket ismerteti, amelyek megkülönböztetik más mikroglia sejtvonalaktól. Ebben tanulmányozni fogja: Mik azok a BV2 sejtek? Honnan származnak a BV2 sejtek? Mekkora a BV2 sejtek mérete?
- A BV2 mikroglia sejtvonalat újszülött (újszülött) C57/BL6 mikroglia sejtekből nyerték A sejtvonalat a sejtek v-raf/v-myc onkogént hordozó J2 retrovírussal történő fertőzésével immortalizálták [1].
- A nem stimulált BV2 sejtek amőbaszerű, hipertrófiás morfológiával rendelkeznek. Ez a morfológia a BV2 sejtek erősen aktivált és gyulladásos állapotát mutatja a primer mikrogliákhoz képest [2].
- A BV-2 sejtvonalra jelentett átmérő 10-15 μm között mozog.
BV2 Vs ECO 2 sejtvonal
Mindkettő egér mikroglia sejtvonal, de különböznek egymástól. A fő különbség az, hogy a BV2-t genetikai manipulációval immortalizálták, míg az ECO 2 spontán immortalizálódott. Továbbá az ECO 2 ugyanazokkal az általános jellemzőkkel rendelkezik, mint a BV2, de a tenyésztéséhez kolónia-stimuláló faktor-1 (CSF-1) kiegészítésre van szükség.
2.bV2 sejtvonal: A tenyésztéssel kapcsolatos információk
A sejtvonalkultúra kezelése és fenntartása előtt a sejttenyésztéssel kapcsolatos információk alapvető fontosságúak. Ez a cikkrész segít megismerni a BV2 sejtvonalak tenyésztésével kapcsolatos legfontosabb tudnivalókat. Különösen a következőkről fogunk beszélni: Mi a BV2 megduplázódási ideje? Milyen táptalajt használnak a BV2 sejtek tenyésztéséhez? A BV2 sejtvonal adherens vagy szuszpenziós? Hogyan olvasztjuk fel a BV2 sejteket?
A BV2 sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai
|
Megduplázódási idő: |
A BV2 mikroglia sejtek nagyon gyorsan növekednek, a BV2 sejtek átlagos megduplázódási ideje 34,5 óra. |
|
Adhezív vagy szuszpenzióban: |
A BV2 egy adherens sejtvonal. |
|
Osztott arány: |
Ezt az adherens mikroglia sejtvonalat 1:2 és 1:4 közötti osztott arányban szubkultúráztatják. A sejteket PBS-szel mossuk és Accutase-zal (disszociációs oldat) inkubáljuk. 10 perc elteltével centrifugáljuk és betakarítjuk őket. Ezeket a sejteket ezután az ajánlott osztási aránynak megfelelően friss táptalajos lombikokba adagoljuk. |
|
Növesztőközeg: |
A BV2 sejtvonal tenyésztéséhez RPMI 1640 médiumot használunk. A BV2 RPMI-t 10% FBS-szel, 2,0 mM stabil glutaminnal, 2,0 g/L NaHCO3-mal egészítjük ki az ideális sejtnövekedés érdekében. A médiumot hetente 2-3 alkalommal megújítjuk. |
|
Növekedési feltételek: |
A BV2 kultúrákat 37°C-os, párásított inkubátorban tartjuk, folyamatos 5%-os CO2-ellátás mellett. |
|
Tárolás: |
A fagyasztott BV2 sejtes fiolákat -150 °C alatti hőmérsékleten, folyékony nitrogén gőzfázisában vagy elektromos fagyasztóban tartjuk. |
|
Fagyasztási folyamat és közeg: |
A BV2 sejtvonalakhoz CM-1 vagy CM-ACF fagyasztási közeg ajánlott. A sejteket lassú fagyasztási eljárással fagyasztják le, amely a sejtek életképességének megőrzése érdekében percenként csak 1 °C-os hőmérsékletcsökkenést tesz lehetővé. |
|
Felolvasztási folyamat: |
A fagyasztott BV2 sejtek üvegét vízfürdőben (37°C) 40-60 másodpercig gyorsan kell keverni, amíg egy kis jégcsomó nem marad. A felolvasztott sejteket friss tápfolyadékhoz adjuk, és centrifugáljuk a fagyasztási tápfolyadék összetevőinek eltávolítása érdekében. Az összegyűjtött sejteket ismét reszuszpendáljuk, és növekedés céljából tenyésztőlombikba öntjük. |
|
Biológiai biztonsági szint: |
A BV2 sejtvonal tenyésztéséhez az 1. biológiai biztonsági szint ajánlott. |
3.a BV2 sejtek előnyei és korlátai
Más sejtvonalakhoz hasonlóan a BV2 sejtek is rendelkeznek bizonyos előnyökkel és korlátozásokkal. Ezek közül néhányat itt említünk meg.
Előnyök
A BV2 sejtvonal előnyei a következők:
|
Elsődleges mikroglia-szerű jellemzők |
A BV2 sejtek rendelkeznek bizonyos primer mikroglia-szerű jellemzőkkel, és alternatív modellként használják a mikroglia funkcióinak és válaszainak tanulmányozására. F4/80, CD11b és Iba1 expresszálódnak, amelyek a primer mikroglia alapvető biomarkerei. |
|
Immortalizáció |
A BV2 sejtek immortalizáltak, ami lehetővé teszi számukra a folyamatos növekedést. Ez a tulajdonságuk ideális a hosszú távú sejtkultúrás kísérletekhez. |
Korlátozások
A BV2 sejtekkel kapcsolatos korlátok a következők:
|
Egér eredetű sejtvonal |
A BV2 sejtvonal egér mikroglia sejtekből származik. A BV2 sejtekkel végzett kutatási eredmények korlátozottan alkalmazhatók az emberre jellemző betegségekre és kutatásokra. |
|
In vitro modell |
A BV2 sejtek in vitro modellként szolgálnak a mikroglia funkcióinak tanulmányozására. Fontos azonban megjegyezni, hogy ezek nem feltétlenül reprodukálják teljes mértékben az in vivo agyban található mikroglia sejtek jellemzőit és összetettségét. |
4.a BV2 sejtvonal alkalmazásai a kutatásban
A BV2 sejtvonal számos alkalmazást kínál az idegtudományi kutatásban. Ebben a szakaszban a BV2 sejtek néhány gyakori kutatási felhasználását említjük.
Neurodegeneratív betegségek kutatása: Az egér mikroglia sejtvonal, a BV2 értékes kutatási eszköz a neurodegeneratív betegségek, például a Parkinson-kór, az Alzheimer-kór és a szklerózis multiplex tanulmányozására. A kutatók a BV2 sejtvonalak segítségével tanulmányozták a neurotoxicitást és a betegség patológiáját, valamint értékelték a terápiás szereket. Például egy 2020-ban végzett vizsgálatban a Rheum rhaponticum növényben jelen lévő természetes hidroxisztirolbén, a raponticin gyulladáscsökkentő és neuroprotektív hatását vizsgálták lipopoliszachariddal aktivált BV2 sejtek, mint Parkinson-kór modell segítségével. A vegyület mérsékli a lipopoliszacharid (LPS) által közvetített BV2-aktivációt a nitrogén-oxid-szintáz gátlásával, valamint a reaktív oxigénfajok és a proinflammatorikus mediátorok csökkentésével. Röviden, a raponticin gyulladáscsökkentő és neuroprotektív hatást fejt ki az LPS-indukált mikroglia modellre (BV2) [3]. Hasonlóképpen, egy tanulmány a jelátviteli útvonalak részvételét vizsgálta a neuroinflammációban. A kutatók lipopoliszacharid által közvetített BV2-aktiváción keresztül gyulladásos modellt fejlesztettek ki. Megállapították, hogy az AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB jelátviteli tengely részt vesz a neuroinflammációban. Emellett a béta-naftoflavon (BNF), egy természetes flavonoid gyulladáscsökkentő és neuroprotektív hatását is vizsgálták e modell segítségével. A vegyület ezeket a terápiás hatásokat a BV2 aktiváció gátlásával fejtette ki [4]. Hasonlóképpen, a kutatás BV2 sejteket használt, és a zonisamid hatóanyag mitokondriális diszfunkcióra gyakorolt javító hatását vizsgálta a mikroglia sejtekben. E tanulmány eredményei alátámasztják a zoniszamid klinikai alkalmazását a Parkinson-kór kezelésében [5].
5.bV2 sejtek: BV2: kutatási publikációk
Az alábbiakban néhány érdekes és legtöbbet idézett kutatási tanulmányt találunk, amelyekben BV2 sejtek szerepelnek.
Ez a kutatás a Journal of Alzheimer's Disease című folyóiratban jelent meg (2015). A tanulmány azt javasolta, hogy a mitokondriális károsodásból származó DAMP (damage-associated molecular pattern) mtDNS molekula gyulladásos változásokat okozhat a mikroglia sejtekben (BV2). Így ezek is hozzájárulhatnak az Alzheimer-kór neuroinflammációjához.
A FARMACIA-ban (2021) megjelent cikk BV2 sejteket használt, és meghatározta a Huanglian Jiedu Decoction (HLJDD) terápiás hatását az Alzheimer-kórra. A tanulmány megállapította, hogy a HLJDD elősegíti a BV2 amiloid-béta fagocitózist a Trm2 fehérje expressziójának felpörgetésével, amit a BV2 Western blot elemzéssel validáltak.
Az alfa-szinuklein aktiválja a BV2 mikroglia aggregációs állapotától függő BV2 mikrogliát
A Biochemical and Biophysical Research Communications (2016) című szaklapban megjelent kutatási cikk azt javasolta, hogy az alfa-szinuklein, a felnőtt központi idegrendszerben oldódó fehérje, aggregációs állapotától függően képes aktiválni a BV2 sejteket.
Ez a kutatás a Neuroscience Letters című szaklapban jelent meg 2013-ban. A tanulmány szerint az alfa-szinuklein által aktivált BV2 mikroglia sejtekből szekretált exoszómák a Parkinson-kórban a neurodegeneráció lényeges közvetítői lehetnek.
Ez a tanulmány a Frontiers Cellular Neuroscience (2019) című folyóiratban jelent meg. Azt javasolta, hogy az Idebenone, egy antioxidáns, modulálja a mikroglia polarizációt és csökkenti a gyulladást a lipopoliszachariddal aktivált BV2 sejtekben és az 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridin (MPTP) indukálta Parkinson-kór egérmodellben.
6.források a BV2 sejtvonalhoz: Bővebb információ: protokollok, videók és egyéb
A BV2-vel kapcsolatban rendelkezésre álló online források korlátozottak. Íme néhány közülük.
- A BV2 sejtvonal szubkultúrázása: Ez a weboldal linkje a BV2 sejtvonalak szubkultúrázásának rövid protokollját tartalmazza.
- Fagyasztott sejtek felolvasztása: Ez a videó segít elsajátítani a fagyasztott sejtek felolvasztásának és tenyésztésének alapvető protokollját.
A BV2 sejtek sejttenyésztési protokollját itt említi.
- BV2 sejttenyésztés: Ez a weboldal linkje tartalmazza a BV2 sejttenyésztési protokollt. Ezen kívül a BV2 sejtvonalhoz tartozó sejttenyésztő médiumok és fagyasztási médiumok összetételét is megadja.
Hivatkozások
- Wang, Y., Y. Peng és H. Yan, kommentár: Neuroinflammatorikus in vitro sejtkultúra modellek és a neurológiai betegségek lehetséges alkalmazásai. Front Pharmacol, 2021. 12: p. 792614.
- Sarkar, S., et al., Characterization and comparative analysis of a new mouse microglial cell model for studying neuroinflammatory mechanisms during neurotoxic insults. Neurotoxikológia, 2018. 67: p. 129-140.
- Zhao, F., et al., A rhaponticin neuroprotektív hatása a Parkinson-kór ellen: Betekintés az in vitro BV-2 modellből és az in vivo MPTP-indukált egérmodellből. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology, 2021. 35(1): p. e22631.
- Gao, X., et al., A béta-naftoflavon gátolja az LPS által kiváltott gyulladást a BV-2 sejtekben az AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB jelátviteli tengelyen keresztül. Immunobiology, 2020. 225(4): p. 151965.
- Tada, S., et al., Zonisamide Ameliorates Microglial Mitochondriopathy in Parkinson's Disease Models. Brain Sciences, 2022. 12(2): p. 268.