B16 sejtek – Alapvető útmutató a B16 melanoma sejtekhez az onkológiai kutatásban
A B16 egy egérből származó bőrrák (melanoma) sejtvonal. Ez a sejtvonal hatékony in vitro modell az emberi bőrrákok tanulmányozásához. Gyakran használják szilárd tumorok kialakulásának és a ráksejtek áttétképződésének vizsgálatára.
- Növekedési tápközeg
- A B16 sejteket 10 %-os borjúszérumot (FBS) tartalmazó EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) táptalajon tenyésztik. A tenyésztő táptalajt hetente 2-3 alkalommal kell cserélni.
- Duplázódási idő
- A B16 sejtek átlagos populációduplázódási ideje becslések szerint 24 óra.
- Növekedési típus
- A B16 sejtek adhezívek és monorétegben növekednek.
- Biológiai biztonsági szint
- BSL-1
- Kapható
- Cytion — B16 rendelése
Ez a cikk segít megérteni a B16 melanoma sejtvonal alapjait. Konkrétan a következőket tárgyalja:
- A B16 sejtvonal általános jellemzői és eredete
- A B16 sejtvonal tenyésztésével kapcsolatos információk
- B16 sejtvonal: Előnyök és hátrányok
- A B16 sejtek alkalmazási területei
- 5. A B16 sejteket bemutató kutatási publikációk
- Források a B16 sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyebek
- Gyakran ismételt kérdések
A B16 sejtvonal általános jellemzői és eredete
A cikk ezen része a B16 melanoma sejtvonal jellemzőit tárgyalja. Megtudhatja a válaszokat a következő gyakran feltett kérdésekre. Például: Mi a B16 rákos sejtvonal? Honnan származnak a B16 sejtek? Milyen méretűek a B16 sejtek?
- A B16 sejtvonalat 1954-ben hozták létre. Ezek a sejtek C57BL/6J egerekből származnak, amelyeknél spontán daganat alakult ki a bőrön a maine-i Jackson Laboratories laboratóriumban.
- Ezek melanin termelő hámsejtek, amelyek képesek áttétet képezni a lépben, a májban és a tüdőben.
- A B16 melanoma sejtek monorétegként növekednek, és hámsejtszerű, orsó alakú sejtmorfológiát mutatnak.
- A B16 sejtvonal mérete körülbelül 15,4 μm.
- A B16 sejteknek különálló szubklónjai vannak, beleértve a B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 és B16F10 típusokat. Ezek a szubvonalak eltérnek az anya B16 sejtektől, és megőrzik néhány specifikus jellemzőjüket. Például eltérő morfológiával, sejtmérettel és egyéb tulajdonságokkal rendelkeznek. A B16F10 magas tüdőmetasztatikus képességgel rendelkezik, a B164A5 pedig a legagresszívebb bőrrákos sejtvonal a B16F10, a B16-GMCSF és a B16FLT3-hoz képest [1].
A B16 sejtvonal tenyésztésével kapcsolatos információk
A sejtvonal fenntartása vagy tenyésztése előtt érdemes megismerni a duplázódási idővel, a sejttípussal, a tenyésztőközeggel, a tenyésztési feltételekkel stb. kapcsolatos legfontosabb információkat. Ez a szakasz a B16 sejtek tenyésztéséhez szükséges összes információt tartalmazza.
A B16 sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai
A populáció duplázódási ideje:
A B16 sejtek átlagos populációduplázódási ideje becslések szerint 24 óra.
Adherens vagy szuszpenziós:
A B16 sejtek adhezívek és monorétegben növekednek.
Beültetési sűrűség:
A B16 sejtek beültetéséhez 1–2 x 104 sejt/cm2 sejtsűrűség ajánlott. A tapadó B16 sejteket 1 x PBS-sel öblítik le, majd Accutase oldattal leválasztják a felületről. A sejteket centrifugálják, majd a sejtpelletet újra szuszpendálják a tenyészközegben. Később ezeket a sejteket egy új lombikba helyezik tenyésztés céljából.
Növekedési tápközeg:
A B16 sejteket 10 %-os borjúszérumot (FBS) tartalmazó EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) táptalajban tenyésztik. A tenyésztő táptalajt hetente 2-3 alkalommal kell cserélni.
Növekedési feltételek:
A B16 sejtvonal tenyésztéséhez 5 %-os CO2-ellátással és 37 °C hőmérsékletű, párásított inkubátort használnak.
Tárolás:
Ezeket a sejteket -150 °C alatti hőmérsékleten vagy folyékony nitrogén gőzfázisában tárolják a sejtek életképességének megőrzése érdekében.
Fagyasztási folyamat és táptalaj:
A B16 sejtek lassú fagyasztási eljárással történő fagyasztásához CM-1 vagy CM-ACF fagyasztóközeget használnak.
Felolvasztási folyamat:
A fagyasztott B16 sejteket 37 °C-on, antimikrobiális szert tartalmazó vízfürdőben olvasztják fel. A felolvasztott sejteket közvetlenül tenyészthetik úgy, hogy növekedési táptalajt tartalmazó lombikokba helyezik őket. Ezenkívül ezeket a sejteket centrifugálhatják a fagyasztó közeg összetevőinek eltávolítása érdekében, majd új táptalajban tenyészthetik őket.
Biológiai biztonsági szint:
A B16 sejtvonalat biológiai biztonsági szintű laboratóriumban kell kezelni és tárolni.
B16 sejtvonal: Előnyök és hátrányok
Más sejtvonalakhoz hasonlóan a B16 is egyedi előnyök és hátrányok keverékével rendelkezik. Ebben a szakaszban felsoroljuk ennek a melanoma sejtvonalnak néhány jelentős előnyét és hátrányát.
Előnyök
A B16 az első hatékony egérsejt-eszköz, amelyet előnyei miatt széles körben használnak a metasztázisok kutatásában. A bőrrákos sejtvonal néhány előnye:
Könnyen tenyészthető
A B16 sejtvonal könnyen tenyészthető kutató laboratóriumokban. Széles körben használják a rákos sejtek biológiájának, jelátviteli útvonalainak és egyéb jellemzőinek tanulmányozására.
Gyors növekedés
A B16 melanoma sejtvonal magas szaporodási arányt mutat, ami alkalmassá teszi a sejtosztódás és a növekedési folyamatok tanulmányozására.
Tumorképző képesség
A B16 egy tumorigenikus sejtvonal, amely tumorhoz hasonló tulajdonságokkal rendelkezik, mint például az invázió, a migráció és a proliferáció. Értékes segítséget nyújt a tumor kialakulásának, progressziójának és metasztázisának tanulmányozásában.
Hátrányok
A B16 sejtvonalhoz kapcsolódó hátrányok a következők:
Az emberi relevancia hiánya
Mivel a B16 egy egér melanóma sejtvonal, nem feltétlenül tükrözi pontosan az emberi bőrrák biológiáját, ami korlátozza a kutatási eredmények átültethetőségét.
Heterogenitás
A B16 sejtek heterogének, ugyanazon tenyészetben is változatos genetikai és fenotípusos tulajdonságokat mutatnak. Ez befolyásolhatja az eredmények megbízhatóságát és reprodukálhatóságát.
A B16 sejtek alkalmazásai
A B16 sejtvonalat széles körben használják kutatási tanulmányokban. A sejtvonal néhány ígéretes alkalmazási területe:
- Tumorbiológia: Ez az egér bőrrákos sejtvonal tumorigenikus, és széles körben használják a tumorbiológia megértéséhez. Számos tanulmányt végeztek a B16 sejtek felhasználásával a tumorsejtek növekedése, szaporodása és metasztázisa mögött álló sejtes mechanizmusok feltárására. Egy 2020-ban végzett kutatásban B16 sejteket használtak a hosszú nem kódoló RNS, az LncRNA MEG3 szerepének vizsgálatára a melanoma kialakulásában, növekedésében és metasztázisában. A kutatás megállapította, hogy a nem kódoló RNS modulálja a miRNA-21/E-kadherin tengelyt, hogy stimulálja ezeket a sejtes eseményeket [2]. Hasonlóképpen, kutatást végeztek a Notch1 jelátvitel potenciális szerepének vizsgálatára a tumor által kiváltott immunszuppresszióban B16 sejtek felhasználásával [3].
- Gyógyszerkutatás: A B16 sejteket használják a gyógyszerjelöltek potenciális terápiás hatásainak validálására és tesztelésére. Egy tanulmány a B16 sejtvonalat felhasználva értékelte a neogamboginsav, egy természetes vegyület, tumorellenes hatását. A tanulmány eredményei kimutatták, hogy ez a vegyület a PI3K/Akt/mTOR jelátviteli útvonalat modulálja, ami a rákos sejtek elhalását okozza [4]. Egy másik tanulmány a B16 sejtvonal felhasználásával vizsgálta a ginsenosid Rg3, egy szaponin, melanoma elleni hatását. A kutatás azt állította, hogy ez a természetes vegyület az ERK és az Akt útvonalak leregulálásával vált ki tumorellenes hatást [5].
5. A B16 sejtekkel kapcsolatos kutatási publikációk
Íme néhány jelentős kutatási publikáció a B16 melanoma sejtvonalról.
A Cancer Cell International folyóiratban (2020) megjelent publikáció szerint a hosszú, nem kódoló RNS, a MEG3 a miRNA-21/E-kadherin tengely modulálásával fokozza a B16 melanoma sejtek kialakulását, növekedését és metasztázisát.
Ez a cikk 2018-ban jelent meg az International Journal of Molecular Medicine folyóiratban. A tanulmány a psoralen-származék – a 4-metil-6-fenil-2H-furo[3,2-g]kromen-2-on (MPFC) – melanogén hatását és mechanizmusait vizsgálta B16 sejtekben. A tanulmány azt állította, hogy ez a származék a PKA és a p38 MAPK sejtjelátvitel stimulálásával elősegíti a melanogenezist.
Ezt a kutatást 2018-ban publikálták a Journal of Experimental & Clinical Cancer Research folyóiratban. A tanulmány eredményei arra utalnak, hogy a Notch1 jelátvitel aktiválása a B16 sejtekben megakadályozhatja a daganatellenes immunitást a TGF-β1 gén expressziójának fokozásával.
Ezt a tanulmányt Chunlan Wu és munkatársai végezték 2020-ban, és az Acta Biochimica Polonica folyóiratban tették közzé. A kutatás megállapítja, hogy a neogamboginsav, egy természetes vegyület, a PI3K/Akt/mTOR jelátviteli kaszkád modulálásával okozhatja a B16 melanoma sejtek halálát.
Ez a kutatási cikk 2018-ban jelent meg az European Journal of Medicinal Chemistry folyóiratban. Ebben a tanulmányban a kutatók B16 melanoma sejtek felhasználásával vizsgálták egy vegyület, az irídium (III) komplex rákellenes hatását.
Az ailanthon sejtciklus-leállást és apoptózist indukál a B16 és A375 melanoma sejtekben
Ez a tanulmány azt állította, hogy az Ailanthone nevű növényi bioaktív anyag rákellenes hatással rendelkezik, mivel apoptózist és sejtciklus-leállást indukálhat B16 és A375 melanoma sejtekben. Ez a cikk 2019-ben jelent meg a Biomolecules folyóiratban.
Források a B16 sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyebek
A B16 sejtvonalról kevés forrás áll rendelkezésre, amely ismertetné a tenyésztési és transzfekciós protokollokat.
- Melanoma sejtek tenyésztése: Ez a videó értékes tippeket nyújt a melanoma sejtvonalak tenyésztéséhez.
- Sejtvonal szubkultiválása: Ez a videó egy sejtvonal általános szubkultiválási protokollját ismerteti.
- A B16F10 sejtvonal transzfekciója: Ez a videó a B16 melanoma sejtek egyik alvonalának transzfekciós protokollját ismerteti. Segítségével optimalizálhatja a B16 sejtek transzfekciós protokollját.
Az alábbiakban néhány sejtkultúra-protokoll található a B16 sejtekhez.
- B16 sejtek tenyésztése: Ez a weboldal minden szükséges információt tartalmaz a B16 sejtek tenyésztéséhez, beleértve a tenyésztőközeget, az altenyésztést, a sejtek felolvasztását és fagyasztását.
Hivatkozások
- Danciu, C. és munkatársai, Négy különböző B 16 egér melanoma sejtvonal viselkedése: C57 BL/6J bőr. International journal of experimental pathology, 2015. 96(2): 73–80. o.
- Wu, L., et al., Az LncRNA MEG3 elősegíti a melanoma növekedését, metasztázisát és kialakulását a miR-21/E-kadherin tengely modulálása révén. Cancer cell international, 2020. 20: 1–14. o.
- Yang, Z. és munkatársai, A Notch1 jelátvitel a melanomasejtekben a TGF-β1 felregulációján keresztül elősegítette a tumor által kiváltott immunszuppressziót. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): 1–13. o.
- Wu, C. és munkatársai: A neogamboginsav a PI3K/Akt/mTOR jelátviteli útvonalon keresztül indukálja a B16 melanomasejtek apoptózisát. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): 197–202. o.
- Meng, L. és munkatársai: A ginsenosid Rg3 tumorellenes hatása a melanómában az ERK és Akt útvonalak leregulációján keresztül. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): 2069–2079. o.