ARPE-19 sejtek – Az ARPE-19-cel végzett retinális pigmentepiteliális sejtekre irányuló kutatások bemutatása
Az ARPE-19-ek emberi eredetű, spontán keletkezett retinális pigmentepiteliális sejtek. Ezeket a retinális biológia, a kóros állapotok és a terápiás beavatkozások (farmakológia) különböző aspektusainak tanulmányozására használják. Ez a cikk átfogó betekintést nyújt az ARPE-19 immortalisált sejtekbe. Főként a sejtvonal általános jellemzőit, tenyésztési feltételeit és különböző kutatási alkalmazásait tárgyalja. Ezért elolvasásával alapos ismereteket szerezhet a következőkről:
- Növekedési tápközeg
- Az ARPE-19 sejtvonal tenyésztéséhez DMEM vagy Ham’s F12 táptalajt használnak. Az ARPE-19 táptalajt 5% FBS-sel, 3,1 g/l glükózzal, 15 mM HEPES-szel, 1,6 mM L-glutaminnal, 1,0 mM nátrium-piruváttal és 1,2 g/l NaHCO3-mal egészítik ki. A táptalajt hetente 2–3 alkalommal cserélik.
- Duplázódási idő
- Az ARPE-19 sejtek duplázódási ideje körülbelül 55–65 óra. A sejtek populációja legfeljebb 48-szorosára növekedhet.
- Növekedési típus
- Az ARPE-19 adhezív sejtvonal.
- Biológiai biztonsági szint
- BSL-1
- Kapható
- Cytion — Rendeljen ARPE-19-et
- ARPE-19 sejtek: Eredet és általános jellemzők
- ARPE-19 sejtvonal: Tenyésztési információk
- Az ARPE-19 sejtek előnyei és korlátai
- Az ARPE-19 sejtvonal alkalmazása a kutatásban
- ARPE-19 sejtek: Kutatási publikációk
- Források az ARPE-19 sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyebek
- ARPE-19 sejtek: Eredet és általános jellemzők
- ARPE-19 sejtvonal: Tenyésztési információk
- Az ARPE-19 sejtek előnyei és korlátai
- Az ARPE-19 sejtvonal alkalmazása a kutatásban
- 5. ARPE-19 sejtek: Kutatási publikációk
- Források az ARPE-19 sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyéb anyagok
- Gyakran ismételt kérdések
ARPE-19 sejtek: eredet és általános jellemzők
A sejtvonal eredetének és általános jellemzőinek ismerete elengedhetetlen a kutatásban való hatékony felhasználásához. Ez a cikk az ARPE sejtvonalról szóló összes információt tartalmazza. Például: Mi az ARPE-19 sejtvonal? Miért érdemes az ARPE-19 sejteket használni? Mi az ARPE-19/HPV-16 sejtvonal? Az ARPE-19 sejtek halhatatlanok? Mi az ARPE 19 sejtek morfológiája és mérete?
- Az ARPE-19 halhatatlan retinális pigmentepiteliális sejtvonal egy balesetben fejsérülés következtében elhunyt 19 éves férfi szeméből származik. 1986-ban Amy Aotaki-Keen hozta létre.
- Ezek a sejtek retinális pigmentepiteliális sejtmarkereket, azaz CRALBP-t és RPE-65-öt expresszálnak, ami arra utal, hogy morfológiai és funkcionális polaritással jellemezhető stabil monorétegeket képesek kialakítani.
- Az ARPE-19 sejtek epitheliális sejtekhez hasonló morfológiával rendelkeznek.
- Az ARPE-19 sejtek többnyire normális kariotípussal rendelkeznek, kivéve egy deléciót a 9. kromoszóma hosszú karján és egy adíciót a 19. kromoszóma hosszú karján. Ezenkívül néhány aneuploidia is megfigyelhető [1].
ARPE-19 sejtvonal: Tenyésztési információk
Az alapvető sejtkultúra-információk elengedhetetlenek a sejtvonal megfelelő kezeléséhez és fenntartásához. Ez a szakasz segít megismerni az ARPE-19 sejtvonal tenyésztésének legfontosabb pontjait. Megtudhatja: mi az ARPE-19 duplázódási ideje? Mi az ARPE-19 beültetési sűrűsége? Mi az ARPE-19 sejtsűrűsége? Mi az ARPE-19 fagyasztó tápközeg? Hogyan tenyészthető az ARPE-19 sejtvonal?
Az ARPE-19 sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai
Populáció duplázódási ideje:
Az ARPE-19 sejtvonal duplázódási ideje körülbelül 55–65 óra. A sejtek akár 48-szoros populációduplázódáson is áteshetnek.
Adherens vagy szuszpenziós:
Az ARPE-19 egy adhezív sejtvonal.
Szubkultivációs arány:
Az ARPE-19 szubkultivációs aránya 1:3 és 1:5 között van. Az adhezív sejteket 1x PBS-sel öblítik, majd 8–10 percig diszociációs oldattal (accutase) inkubálják. A levált sejteket friss táptalajjal keverik össze, majd centrifugálják. A sejtpelletet ismét reszuszpendálták, és friss táptalajt tartalmazó tenyésztőedénybe öntötték.
Növekedési tápközeg:
Az ARPE-19 sejtvonal tenyésztéséhez DMEM vagy Ham’s F12 táptalajt használnak. Az ARPE-19 táptalajt 5% FBS-sel, 3,1 g/l glükózzal, 15 mM HEPES-szel, 1,6 mM L-glutaminnal, 1,0 mM nátrium-piruváttal és 1,2 g/l NaHCO3-mal egészítik ki. A táptalajt hetente 2–3 alkalommal cserélik.
Növekedési feltételek:
Az ARPE-19 sejteket 37 °C hőmérsékletű, párásított inkubátorban tartják, 5% CO2-ellátással.
Tárolás:
A sejtvonal folyékony nitrogén gőzfázisában vagy -150 °C alatti hőmérsékleten tárolható a sejtek hosszú távú életképességének megőrzése érdekében.
Fagyasztási folyamat és táptalaj:
Az ARPE-19 fagyasztó táptalajaként CM-1 vagy CM-ACF-et használnak. Röviden: a sejteket lassú fagyasztási módszerrel fagyasztják le, amely csak 1 °C/perc hőmérsékletcsökkenést engedélyez, és megvédi a sejteket a hőmérséklet-sokktól.
Felolvasztási folyamat:
A sejteket 37 °C-ra előre beállított vízfürdőben olvasztják fel. Miután egy kis jégdarab marad, a sejteket friss tenyészközegbe helyezik és centrifugálják. Ezzel eltávolítják a fagyasztó közeg elemeit. Ezután a sejtpelletet újra szuszpendálják, és a sejteket tenyésztés céljából lombikba helyezik.
Biológiai biztonsági szint:
Az ARPE-19 sejteket biológiai biztonsági szintű laboratóriumokban kezelik.
Az ARPE-19 sejtek előnyei és korlátai
Az ARPE-19 sejteket széles körben használják a retinális sejtbiológiai kutatásokban. Más sejtekhez hasonlóan ezeknek is vannak előnyeik és korlátaik. Néhányat közülük ebben a szakaszban sorolunk fel:
Előnyök
Az ARPE-19 sejtvonal fő előnyei a következők:
Retinális sejtmodell
Az ARPE-19 sejtek nagyon hasonlítanak az emberi retinális pigmentepiteliális sejtekhez, ezért ideálisak a retinális betegségek tanulmányozásához és gyógyszervizsgálatokhoz.
Stabil növekedési ütem
Ezek a sejtek stabil növekedést mutatnak és hosszú ideig fenntarthatók, ami megkönnyíti a hosszú távú kísérleteket.
Transzfekcióra való alkalmasság
Az ARPE-19 sejtvonal kiváló transzfekciós gazda, amelyet széles körben használnak mind átmeneti, mind stabil expressziós vizsgálatokban.
Korlátozások
Az ARPE-19 sejtvonalhoz kapcsolódó néhány korlátozás:
Korlátozott differenciálódás
Az ARPE-19 differenciálódása az elsődleges retinális sejtekhez képest korlátozott. Ez potenciálisan hatással lehet bizonyos differenciálódással kapcsolatos vizsgálatokra.
Az ARPE-19 sejtvonal alkalmazása a kutatásban
Az ARPE-19 sejtvonal számos alkalmazási lehetőséget kínál a retinális kutatásban. Itt néhány konkrét és jelentős kutatási felhasználási lehetőségről beszéltünk ennek a retinális pigmentepiteliális sejtvonalnak.
- Retinális betegségek kutatása: Az ARPE-19 sejtek értékes betekintést nyújtanak a retinális patogenezisbe. A kutatók a sejteket használják a betegség mechanizmusainak és a lehetséges kezeléseknek a vizsgálatára. Egy 2020-ban végzett tanulmány megállapította, hogy a hsa_circ_0041795 kör alakú RNS kölcsönhatásba lép a miRNA-646-tal és a VEGFC-vel, elősegítve a magas glükózszint által kiváltott károsodást az ARPE-19 emberi retinális pigmentepiteliális sejtekben. Ezért a tanulmány ezt a kör alakú RNS-t javasolja hatékony terápiás és diagnosztikai célpontként a diabéteszes retinopátia leküzdésére [2]. Hasonlóképpen, Jing Yang és munkatársai ARPE-19 sejteket használtak, és betekintést nyújtottak a diabéteszes retinopátia patogenezisébe. Kutatásuk során megállapították, hogy az lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) gátlása elnyomhatja a gyulladásos reakciót és az epitheliális-mesenchimális átalakulást a magas glükózszintnek kitett ARPE-19 sejtekben [3].
- Gyógyszervizsgálatok: Az ARPE-19 sejteket gyógyszerek és vegyületek hatékonyságának és biztonságosságának értékelésére használják, segítve a retinális betegségek kezelésének vagy terápiáinak fejlesztését. Például egy 2019-ben végzett tanulmány megállapította, hogy a Syzygium malaccense bioaktív anyagai védő hatást fejtenek ki a hidrogén-peroxid által kiváltott stressz ellen az emberi retinális pigmentepiteliális sejtekben, az ARPE-19-ben [4]. Ezt követően egy tanulmány kimutatta a Prunella vulgaris var. L kivonat terápiás szerepét a kék fény által kiváltott károsodás ellen ARPE-19 sejtekben és egérmodellekben [5].
5. ARPE-19 sejtek: Kutatási publikációk
Az alábbiakban néhány érdekes kutatási publikációt mutatunk be, amelyek az ARPE-19 retinális pigmentepiteliális sejteket tárgyalják.
Az ARPE-19 sejtek mikroRNS-válaszainak értékelése az oxidatív stressz hatására
Ez a kutatási cikk 2018-ban jelent meg a Cutaneous and Ocular Toxicology című folyóiratban. A tanulmány az ARPE-19 humán retinális pigmentepiteliális sejtekben hidrogén-peroxid kezeléssel kiváltott oxidatív stresszre adott miRNA-expressziót értékelte.
A World Journal of Stem Cells (2021) folyóiratban megjelent publikáció szerint az ARPE-19 sejtek kondicionált táptalaja olyan növekedési faktorokat tartalmaz, amelyek elősegítik a zsírszövetekből származó mesenchimális őssejtek idegsejt-differenciálódását.
Ez a tanulmány az International Journal of Molecular Sciences (2019) folyóiratban jelent meg. A tanulmány megállapítja, hogy a kvercetin megakadályozza a MAPK és az NF-κB kaszkádok aktiválódását, ezzel gátolva az IL-1β által stimulált kemokinek felszabadulását az ARPE-19 sejtekben, és javítva a gyulladásos választ.
Ez a kutatási cikk az International Journal of Molecular Sciences (2018) folyóiratban jelent meg. A tanulmány az oxidatív stressz és a gyulladás lehetséges hatásait értékelte a SIRT1 (Sirtuin 1) és a DNMT-k (DNS-metiltranszferázok) funkcióira, valamint a LINE-1 (long interspersed nuclear element-1) metilációjára az ARPE-19 sejtekben.
Az Antioxidants (2022) folyóiratban megjelent cikk megállapította, hogy a Chrysanthemum boreale virágkivonatok védő hatást gyakorolnak az N-retinilidén-N-retinil-etanolamin (A2E) által kiváltott retinális károsodás ellen ARPE-19 sejtekben.
Források az ARPE-19 sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyebek
Az ARPE-19 egy széles körben használt retinális epiteliális sejtvonal. Az ARPE-19 sejtek tenyésztésére és transzfekciójára vonatkozó elérhető források itt találhatók:
- ARPE-19 transzfekció: Ez a videó lépésről lépésre bemutatja az ARPE-19 sejtvonal transzfekciós protokollját.
Íme néhány forrás, amely leírja az ARPE-19 sejtkultúra-protokollt:
- ARPE-19 sejtkultúra-protokoll: Ez a link az ARPE-19 sejtek tenyésztésével és fenntartásával kapcsolatos információkat tartalmaz. Az ARPE-19 táptalajról, a tenyésztési feltételekről, az áttenyésztési protokollokról, valamint a proliferatív és kriokonzervált kultúrák kezeléséről szóló információkat tartalmaz.
Hivatkozások
- Schnichels, S. és társai, Retina in a dish: Cell cultures, retinal explants and animal models for common diseases of the retina. Progress in retinal and eye research, 2021. 81: 100880. o.
- Sun, H. és X. Kang, az hsa_circ_0041795 hozzájárul a magas glükózszint által kiváltott emberi retinális pigmentepiteliális sejtek (ARPE 19) károsodásához a miR-646 felszívásán és a VEGFC aktiválásán keresztül. Gene, 2020. 747: 144654. o.
- Yang, J. és társai, A csendesített SNHG1 gátolta a magas glükózszint által kiváltott epiteliális-mezenchimális átalakulást és gyulladásos reakciót az ARPE-19 sejtekben. J Inflamm Res, 2021. 14: 1563–1573. o.
- Arumugam, B. és munkatársai: A Syzygium malaccense-ből származó miricetin-származékok védő hatása a hidrogén-peroxid által kiváltott stressz ellen az ARPE-19 sejtekben. Molecular vision, 2019. 25: 47. o.
- Kim, J., K. Cho és S.-Y. Choung, A Prunella vulgaris var. L kivonat védő hatása a kék fény által kiváltott károsodások ellen ARPE-19 sejtekben és egér retinában. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: 622–631. o.