A375 sejtvonal – Útmutató a melanóma kutatásához

Az A375 egy humán melanoma sejtvonal, amelyet széles körben használnak a toxikológiai és immuno-onkológiai kutatásokban. A kutatók ezt a sejtvonalat használják a rákbiológia és a jelátviteli útvonalak tanulmányozására, potenciális rákellenes szerek tesztelésére vagy szűrésére, valamint új és hatékony terápiák kifejlesztésére.

Az A375 sejtek eredete és általános jellemzői

A sejtvonal eredetének és általános jellemzőinek ismerete segíthet a kutatásban való felhasználásának megtervezésében. A cikk ezen része az A375 sejtvonal eredetét és jellemzőit tárgyalja. Például: mi az A375 sejtvonal? Melyek az A375 sejtvonal jellemzői? Honnan származnak az A375 sejtek? Milyen az A375 melanoma sejtek morfológiája? Mekkora az A375 sejtek mérete?

• Az A375 bőrrákos sejtvonal egy 54 éves, rosszindulatú melanómában szenvedő nő szilárd daganatának explantátum-tenyészetéből származik [1].
• Az A375 sejtek epitheliális jellegű morfológiával rendelkeznek.
• Az A375 sejtek mérete viszonylag kisebb, mint más sejtvonalaké. Átmérőjük nagyjából 12 µm.
• Az A375 melanoma sejtek hipotriploidok. A sejtvonal modális kromoszómaszáma 62. Általában minden sejtnek kilenc marker kromoszómája van, valamint egy-egy példánya a normális N2, N6 és N22 kromoszómáknak.

A375 sejtek: Információk a sejtkultúrához

Az A375 sejtkultúrák fenntartása egyszerű. Nincsenek különösebb sejtkultúra-követelményeik. Ez a szakasz segít megismerni a szükséges sejtkultúra-információkat. Például mi az A375 sejtek duplázódási ideje? Mi az A375 sejtvonal táptalaja? Mi az A375 sejtek beültetési sűrűsége? Az A375 melanóma sejtek adhezívek?

Az A375 sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai

Populáció duplázódási ideje:

Az A375 sejtek duplázódási ideje 20 óra.

Adhezív vagy szuszpenziós:

Az A375 egy adhezív humán melanoma sejtvonal.

Beültetési sűrűség:

Az A375 sejtkultúrákhoz az 1 x 10⁴ sejt/cm² sejtsűrűség ideális. Az adhezív sejteket 1 x foszfátpuffer-sóoldattal (PBS) öblítik le, majd passzázsoló oldattal (Accutase) inkubálják. Ezt követően a sejtekhez tenyészközeget adnak, majd centrifugálják őket. A learatott sejteket tenyészközegben reszuszpendálják, majd új lombikokba helyezik őket növekedés céljából.

Növekedési tápközeg:

A DMEM ajánlott ideális A375 táptalajként, ha 10% borjú szérummal (FBS), 4,5 g/l glükózzal, 1,5 g/l NaHCO3-mal, 4 mM L-glutaminnal és 1,0 mM nátrium-piruváttal egészítik ki. Az A375 táptalajt hetente 2-3 alkalommal kell cserélni.

Növekedési feltételek:

Az A375 melanoma sejteket párásított inkubátorban (37 °C) tenyésztik, 5% CO2-ellátással.

Tárolás:

A fagyasztott A375 sejteket -150 °C alatt, folyékony nitrogén gőzfázisában vagy elektromos fagyasztóban kell tárolni.

Fagyasztási eljárás és táptalaj:

Az A375 sejtvonal fagyasztásához CM-1 vagy CM-ACF táptalajt használnak. A sejtek életképességének megőrzése érdekében olyan lassú fagyasztási eljárást választottak, amely lehetővé teszi a hőmérséklet fokozatos, 1 °C-os csökkenését.

Felolvasztási folyamat:

A fagyasztott A375 melanoma sejtek fioláját 40–60 másodpercig gyorsan rázják vízfürdőben, amíg csak egy kis jégdarab marad benne. A sejtekhez friss táptalajt adnak, majd centrifugálják őket a fagyasztó táptalaj elemeinek eltávolítása érdekében. A kapott sejtpelletet újra szuszpendálják, és új lombikokba öntik.

Biológiai biztonsági szint:

Az A375 tenyészeteket biológiai biztonsági szint 1-es laboratóriumi körülmények között kezelik és tartják fenn.

Az A375 sejtvonal kutatási alkalmazásai

Az A375 sejtvonal széles körű kutatási alkalmazásokkal rendelkezik a rákkutatásban. Íme néhány olyan terület, ahol az A375 sejteket gyakran használják.

• Rákkutatás: Az A375 sejtek széles körben alkalmazhatók a melanoma kutatásában. A kutatók ezeket a sejteket használták a bőrrák biológiájának, folyamatainak és az azok mögött meghúzódó sejtjelátviteli mechanizmusoknak a vizsgálatára, beleértve a sejtek szaporodását, vándorlását és invázióját. Ez segíthet a kutatóknak új molekuláris terápiás célpontok azonosításában is. Lin Zhu és munkatársai által 2019-ben végzett tanulmányban rendkívül agresszív A375 melanomasejteket használtak, és megállapították a mikroRNS-3662 szerepét az A375 melanomasejtek növekedésében és inváziójában. A tanulmány eredményei szerint a mikroRNS-3662 a ZEB1 gént célozza meg, és szabályozza a melanomasejtek növekedését in vitro és in vivo az A375 tumor modellben [2]. Hasonlóképpen, egy 2018-ban végzett kutatás megállapította, hogy a PI3K/AKT és a MAPK/ERK útvonalak részt vesznek az A375 sejtvonal proliferációjában és metasztázisában [3].
• Gyógyszerkutatás és -tesztelés: Az A375 sejtvonal hasznos in vitro tumor modell a potenciális rákellenes szerek tesztelésére és szűrésére. A kutatók ezeket az A375 melanomasejteket felhasználva értékelik az új kemoterápiás gyógyszerek, vegyületek és egyéb terápiák toxicitását és hatékonyságát. Például egy tanulmány a grapefruitból nyert mikro- és nanovesikulák rákellenes tulajdonságait vizsgálta az A375 humán melanomasejtekre. Az eredmények kimutatták, hogy a mikro- és nanovesikulák sejtciklus-leállást és apoptózist indukálnak, valamint gátolják a génexpressziót a sejtek proliferációja, migrációja és inváziója során [4].

A375 sejtek: Publikációk

Itt néhány jelentős, az A375 sejteket bemutató kutatási publikációt említünk.

A D-vitamin és alacsony kalciumszintet okozó analógjai modulálják a ciszplatin és a dakarbazin rákellenes tulajdonságait az emberi melanoma A375 sejtvonalban

Ez a tanulmány 2019-ben jelent meg a Journal of Oncology folyóiratban. A tanulmány azt állította, hogy a D-vitamin és analógjaival történő együttes kezelés javítja a ciszplatin és a dacarbazin rákellenes hatását az A375 melanoma sejtekben.

Kiválasztott aloe fajokból nyert gél és egész levél kivonatok melanomaellenes hatásainak in vitro értékelése (A375 sejtvonal)

Ezt a kutatást 2022-ben publikálták a Journal of Herbal Medicine folyóiratban. A tanulmány az aloe vera gél melanomaellenes hatásait vizsgálta az A375 melanoma sejtekben.

A fermitin család 2. tagja elősegíti a melanoma progresszióját azáltal, hogy fokozza a p-α-Pix és a Rac1 közötti kötődést, aktiválva ezzel a MAPK útvonalat

Az Oncogene folyóiratban (2021) megjelent tanulmány szerint a fermitin család 2. tagja (FERMT2 vagy kindlin-2) a p-α-Pix és a Rac1 közötti kötődésen keresztül aktiválja a MAPK-t, ezzel elősegítve a melanoma progresszióját.

A FARP1 elősegíti a sejtek szaporodását a bőrmelanómában a MAPK jelátviteli útvonal modulálásával

Az American Journal of Dermatopathology (2019) folyóiratban megjelent tanulmány szerint a FARP1 elősegítheti a bőrmelanoma kialakulását és progresszióját. Ezért hasznos terápiás célpont lehet.

A Phyllodium elegans kivonatok citotoxikus és apoptotikus hatása emberi rákos sejtvonalakra

Ez a kutatási cikk a Bioengineered (2019) folyóiratban jelent meg. A tanulmány a Phyllodium elegans növényi kivonat citotoxikus és apoptotikus hatását vizsgálta emberi karcinóma sejtvonalakon, beleértve az A375-öt is.

Források az A375 sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyebek

Az alábbiakban néhány online forrás található az A375 sejtekkel kapcsolatban.

• A375 sejtek transzfekciója: Ez a videó bemutató segít lépésről lépésre megtanulni az A375 sejtek transzfekcióját.
• Sejtkultúra: Ez a videó nagyon hasznos információkat tartalmaz a sejtvonalak tenyésztéséről.

Az A375 sejtek sejtkultúra-protokolljai itt találhatók.

• A375 sejtvonal: Ez a link hasznos információkat tartalmaz az A375 sejtvonal tenyésztéséről és fenntartásáról, beleértve az A375 táptalajt, valamint a fagyasztott és szaporodó A375 tenyészetek kezelését.

Hivatkozások

1. Avram, S. és munkatársai, Az A375 humán melanoma modellek standardizálása csirkeembrió korioallantois membránon és Balb/c nude egereken. Oncol Rep, 2017. 38(1): 89–99. o.
2. Zhu, L. és munkatársai, A MicroRNA-3662 a ZEB1-et célozza meg és csökkenti a rendkívül agresszív A375 melanoma sejtvonal invázióját. Cancer Manag Res, 2019. 11: 5845–5856. o.
3. Peng, X. és munkatársai, Az oxyfadichalcone C gátolja az A375 melanoma sejtek szaporodását és metasztázisát a PI3K/Akt és a MAPK/ERK útvonalak szuppresszióján keresztül. Life sciences, 2018. 206: 35–44. o.
4. Stanly, C. és munkatársai: A grapefruitból nyert mikro- és nanovesikulák eltérő metabolom-profilokat és rákellenes hatásokat mutatnak az A375 humán melanoma sejtvonalban. Cells, 2020. 9(12): 2722. o.