A375 sejtvonal - Útmutató a melanoma kutatásához

Az A375 egy humán melanoma sejtvonal, amelyet széles körben használnak a toxikológiai és immunonkológiai kutatásokban. A kutatók ezt a sejtvonalat a rák biológiájának és jelátviteli útvonalainak tanulmányozására, potenciális rákellenes szerek tesztelésére vagy szűrésére, valamint új és hatékony terápiák kifejlesztésére használják.

Az A375 sejtek eredete és általános jellemzői

Egy sejtvonal eredetének és általános jellemzőinek ismerete segíthet a kutatásban való felhasználás megtervezésében. A cikk ezen szakasza az A375 sejtvonal eredetével és jellemzőivel foglalkozik. Például mi az az A375 sejtvonal? Melyek az A375 sejtvonal jellemzői? Honnan származnak az A375 sejtek? Milyen az A375 melanomasejtek morfológiája? Mekkora az A375 sejtek mérete?

Az A375 bőrrákos sejtvonal egy 54 éves, rosszindulatú melanomában szenvedő nő szolid tumorának explantátumkultúrájából származik [1].
Az A375 sejtek epithelszerű morfológiával rendelkeznek.
Az A375 sejtek mérete más sejtvonalakhoz képest viszonylag kisebb. Átmérőjük nagyjából 12 µm.
Az A375 melanomasejtek hipotriploidok. Ennek a sejtvonalnak a modális kromoszómaszáma 62. Általában minden sejt kilenc marker kromoszómával és a normál N2, N6 és N22 kromoszómák egy-egy példányával rendelkezik.

Az orvos megvizsgálja a felnőttek bőrén lévő kinövéseket bőrrák szempontjából.

A375 sejtek: Sejtkultúrával kapcsolatos információk

Az A375 sejtkultúrákat könnyű fenntartani. Nincsenek kényes sejttenyésztési követelmények. Ez a szakasz segít megismerni a szükséges sejttenyésztési információkat. Ilyen például, hogy mennyi az A375 sejtek megduplázódási ideje. Milyen az A375 sejtvonal médiuma? Mekkora az A375 vetési sűrűsége? Az A375 melanomasejtek tapadnak-e?

Az A375 sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai

A populáció megduplázódási ideje:	Az A375 megduplázódási ideje 20 óra.
Adherens vagy szuszpenzióban:	Az A375 egy adherens humán melanoma sejtvonal.
Ültetési sűrűség:	a375 sejttenyészetekhez ideális az 1 x¹⁰⁴ sejt/cm2 -es^{sejtsűrűség}. Az adherens sejteket 1 x foszfát puffer sóoldattal (PBS) öblítjük, és passzázsoldattal (Accutase) inkubáljuk. Ezt követően a sejteket tenyésztőközeggel adtuk hozzá és centrifugáltuk. A kinyert sejteket tenyésztőközegben reszuszpendáltuk, és új lombikokba adagoltuk a növekedéshez.
Növesztőközeg:	A DMEM ajánlott ideális A375 táptalajként, ha 10% magzati szarvasmarha szérummal (FBS), 4,5 g/L glükózzal, 1,5 g/L NaHCO3-mal, 4 mM L-Glutaminnal és 1,0 mM nátrium-piruváttal egészítik ki. Az A375 táptalajt hetente 2-3 naponként meg kell újítani.
Növekedési feltételek:	Az A375 melanómasejteket párásított inkubátorban (37 °C), 5%-os CO2-ellátás mellett kell tenyészteni.
Tárolás:	A fagyasztott A375 sejteket -150°C alatt kell tartani folyékony nitrogén gőzfázisában vagy elektromos fagyasztóban.
Fagyasztási folyamat és közeg:	Az A375 sejtvonal lefagyasztásához CM-1 vagy CM-ACF táptalajt használunk. A sejtek életképességének védelme érdekében lassú, a hőmérséklet fokozatos, 1°C-os csökkenését lehetővé tevő fagyasztási folyamatot választottunk.
Felolvasztási folyamat:	A fagyasztott A375 melanómasejtek üvegét vízfürdőben 40-60 másodpercig gyorsan kevergetjük, amíg csak egy kis jégcsomó marad. A sejtekhez friss tápfolyadékot adunk, és centrifugálással eltávolítjuk a fagyasztási tápfolyadék elemeit. A kapott sejtpelletet ismét reszuszpendáljuk és új lombikokba öntjük.
Biológiai biztonsági szint:	Az A375 kultúrákat 1. biológiai biztonsági szintű laboratóriumi körülmények között kezelik és tartják fenn.

Adherens A375 sejtek konfluens rétege 20x-os nagyításban.

Az A375 sejtvonal előnyei és korlátai

Más sejtvonalakhoz hasonlóan az A375 melanoma sejtvonal is az előnyök és korlátok egyedi kombinációjával rendelkezik, ami a melanoma rákkutatás értékes eszközévé teszi. Ez a szakasz csak az A375 sejtvonal néhány jelentős előnyét és hátrányát sorolta fel.

Előnyök

Az A375 sejtek jelentős előnyeit az alábbiakban említjük:

Melanoma tumormodell: Az A375 sejtvonal rosszindulatú melanoma tumorból származik, így felbecsülhetetlen értékű tumormodellként szolgál a melanoma biológiájának és a terápiás beavatkozásoknak a vizsgálatához. Ezek a sejtek melanomaszerű tulajdonságokkal rendelkeznek, például magas proliferációs rátával és invazivitással.
Tumorigenitás: Az A375 sejtek erősen tumorigenikusak, azaz képesek daganatot képezni. Az A375 sejtek a jelentések szerint agresszív amelanotikus melanomákat hoznak létre NIH Swiss egerekben, amelyeket antitimocita szérummal (immunszuppresszív szerrel) kezelnek.
Jól jellemzett: Az A375 genetikailag jól jellemzett sejtvonal. A melanomához hasonlóan specifikus genetikai mutációkkal rendelkezik. Az A375 mutációi közé tartozik az A375 BRAF génváltozása, ami érzékennyé teszi a BRAF-specifikus inhibitorokra. Ez a genetikai profil tehát az A375 sejteket kiváló rákkutatási eszközzé teszi a mögöttes molekuláris útvonalak és a célzott terápiák tanulmányozására.

Korlátozások

Az A375 sejtekkel kapcsolatos korlátozások a következők:

In vitro korlátok: Az A375 egy in vitro tumormodell. Bár utánozza a melanoma jellemzőit, nem tudja teljes mértékben reprezentálni a melanoma tumorok komplexitását. Ezért óvatosnak kell lenni, amikor az in vitro eredményeket klinikai vizsgálatokra általánosítják.

Vásárolja meg A375 celláit most

430,00 EUR*

Tartalom: 1.5 milliliter

Árak adók és szállítási költségek nélkül

cryovial

Termékszám: 300110

Az A375 sejtvonal kutatási alkalmazásai

Az A375 sejtvonal széleskörű kutatási alkalmazásokkal rendelkezik a rákkutatásban. Az alábbiakban néhány olyan gyakori területet mutatunk be, ahol az A375 sejteket felhasználják.

Rákkutatás: Az A375 sejtek széles körben alkalmazhatók a melanoma kutatásában. A kutatók ezeket a sejteket a bőrrák biológiájának, folyamatainak és a mögöttes sejtszignál-mechanizmusok, köztük a sejtproliferáció, a migráció és az invázió vizsgálatára használták. Ez segíthet a kutatóknak új molekuláris terápiás célpontok azonosításában is. A Lin Zhu és munkatársai által 2019-ben végzett tanulmányban az A375-ös, rendkívül agresszív melanomasejteket használták, és megállapították a mikroRNS-3662 szerepét az A375-ös melanomasejtek növekedésére és inváziójára. A tanulmány eredményei szerint a mikroRNS-3662 a ZEB1 gént célozza, és szabályozza a melanomasejtek növekedését in vitro és in vivo az A375 tumormodellben [2]. Hasonlóképpen egy 2018-ban végzett kutatás megállapította, hogy a PI3K/AKT és a MAPK/ERK útvonalak részt vesznek az A375 sejtvonal proliferációjában és metasztázisában [3].
Gyógyszerkutatás és -tesztelés: Az A375 sejtvonal hasznos in vitro tumormodell a potenciális rákellenes szerek tesztelésére és szűrésére. A kutatók az új kemoterápiás gyógyszerek, vegyületek és egyéb terápiák toxicitását és hatékonyságát értékelik ezen A375 melanomasejtek segítségével. Egy tanulmány például a grapefruitból származó mikro- és nanorészecskék rákellenes tulajdonságait vizsgálta az A375 humán melanoma rákos sejteken. Az eredmények azt mutatták, hogy a mikro- és nanorészecskék sejtciklus-megállást és apoptózist indukálnak, valamint gátolják a sejtproliferációban, migrációban és invázióban szerepet játszó gének kifejeződését [4].

A375 sejtek: Publikációk

Az A375 sejteket bemutató néhány jelentős kutatási publikációt említünk itt.

A D-vitamin és alacsony kalcémtartalmú analógjai modulálják a ciszplatin és a dakarbazin rákellenes tulajdonságait az A375 humán melanoma sejtvonalban

Ez a tanulmány a Journal of Oncology 2019-es számában jelent meg. A tanulmány azt javasolta, hogy a D-vitaminnal és analógjaival történő együttes kezelés javítja a ciszplatin és a dakarbazin rákellenes hatását az A375 melanómasejtekben.

Válogatott aloe fajokból származó gél és teljes levélkivonatok melanomaellenes hatásának in vitro értékelése (A375 sejtvonal)

Ez a kutatás a Journal of Herbal Medicine 2022-es számában jelent meg. Ez a tanulmány az aloe vera gél melanomaellenes hatásait vizsgálta A375 melanomasejtekben.

A fermitin család 2 tagja elősegíti a melanoma progresszióját azáltal, hogy fokozza a p-α-Pix Rac1-hez való kötődését a MAPK útvonal aktiválása érdekében

Az Oncogene-ben (2021) megjelent tanulmány azt javasolta, hogy a fermitin család 2. tagja (FERMT2 vagy kindlin-2) a MAPK aktiválásán keresztül a p-α-Pix-hez és a Rac1-hez való kötődés révén elősegíti a melanoma progresszióját.

A FARP1 elősegíti a sejtproliferációt a MAPK jelátviteli útvonal modulálásán keresztül a cutan melanomában

A The American Journal of Dermatopathology (2019) című folyóiratban megjelent tanulmány azt javasolta, hogy a FARP1 elősegítheti a cutan melanoma kialakulását és progresszióját. Így hasznos terápiás célpont lehet.

A Phyllodium elegans kivonatok citotoxikus és apoptotikus potenciálja emberi rákos sejtvonalakon

Ez a kutatási cikk a Bioengineered (2019) című folyóiratban jelent meg. Ez a tanulmány egy növényi Phyllodium elegans kivonat citotoxikus és apoptotikus hatását vizsgálta humán karcinóma sejtvonalakon, köztük az A375-ön.

Források az A375 sejtvonalhoz: Jegyzőkönyvek, videók és még sok más: protokollok, videók és egyéb

Az alábbiakban néhány online forrást mutatunk be, amelyekben az A375 sejtek szerepelnek.

A375 sejtek transzfekciója: Ez a videó bemutató segít az A375 sejtek transzfekciójának lépésről lépésre történő elsajátításában.
Sejttenyésztés: Ez a videó nagyon hasznos információkat tartalmaz a sejtvonalak tenyésztésével kapcsolatban.

Az A375 sejtek sejttenyésztési protokolljai itt találhatók.

A375 sejtvonal: Ez a link hasznos információkat tartalmaz az A375 sejtvonal tenyésztésével és fenntartásával kapcsolatban, beleértve az A375 médiumokat és a fagyasztott és proliferáló A375 kultúrák kezelését.

Gyakran ismételt kérdések (GYIK) az A375 sejtekhez

Hivatkozások

Avram, S., et al., A375 humán melanoma modellek standardizálása csirkeembrió chorioallantoic membránon és Balb/c meztelen egereken. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
Zhu, L., et al., MicroRNS-3662 targetálja a ZEB1-et és csillapítja a rendkívül agresszív A375 melanoma sejtvonal invázióját. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C gátolja a melanoma A375 sejtek proliferációját és metasztázisát a PI3K/Akt és MAPK/ERK útvonalak elnyomása révén. Élettudományok, 2018. 206: p. 35-44.
Stanly, C., et al., Grapefruitból származó mikro- és nanorészecskék eltérő metabolizmus-profilokat és rákellenes aktivitást mutatnak az A375 humán melanoma sejtvonalon. Cells, 2020. 9(12): p. 2722.