Közzététel: 2023 | Utolsó felülvizsgálat: 2026. május

A „passzázsszám” megértése

A „passzázsszám” fogalma központi jelentőségű a sejtkultúrában, és arra utal, hogy egy sejtvonalat hányszor szubkultiváltak, vagy friss tenyészközegbe helyezték át a kriokonzerválásból való kezdeti újraélesztés vagy a referencia sejtbankból való átvétel után. Ez a mutató kulcsfontosságú a sejtkultúra származásának és történetének nyomon követésében.

A folyamat áttekintése

• A rutin sejtkultúra-gyakorlatban, amikor a sejtek elérnek egy bizonyos sűrűséget, azokat új táptalajra helyezik át a növekedés fenntartása és a túlzott sűrűség elkerülése érdekében. Minden ilyen átvitelt passzázsként rögzítenek.
• Hagyományosan, amikor például egy 60. passzálású sejtvonalat kaptunk a letétbe helyezőtől, ettől a passzálási számtól folytattuk, és minden szubkultúrával növeltük azt. Ez a gyakorlat, bár megőrizte a történeti folytonosságot, gyakran már a kezdetektől magas passzálási számokhoz vezetett. Tekintettel bizonyos sejtvonalak, például az 1951-ben létrehozott HeLa-vonal kiterjedt és gyakran évtizedekig tartó használatára, nem lehetséges meghatározni a sejtvonal létrehozása óta eltelt passzázsok teljes számát.
• A sejtkultúra-folyamataink átláthatóságának és minőségének javítása érdekében 2023 elején felülvizsgáltuk ezt a megközelítést. Most, amikor egy új fiolából indítunk kultúrát, függetlenül a letétbe helyezőtől származó passzálási számtól, minden gyártott tétel esetében visszaállítjuk a számlálást, és az első passzálástól kezdjük újra.

Indoklás

A passzálás elengedhetetlen eljárás a kutatási célú sejtkultúrák egészségének és használhatóságának biztosításához. Amikor a sejtek túlnőnek, kontaktgátlás lép fel, ami csökkenti a szaporodási sebességüket, ami kedvezőtlenül befolyásolhatja a kísérleti eredményeket. Ezeknek a problémáknak a mérséklése érdekében a Cytion szigorú ellenőrzéseket vezet be a szubkultiválás során alkalmazott sejtsűrűségekre vonatkozóan, ezáltal alacsony passzálási számokat tartva fenn a sejtvonalak gyártása során. Ez az óvintézkedés segít megelőzni a túlzott passzálás káros hatásait, mint például a morfológiai rendellenességeket, a növekedési sebesség változásait és a genetikai sodródást, amelyek miatt a sejtek jelentősen eltérhetnek eredeti állapotuktól. A hosszabb ideig tartó szubkultiválás emellett növelheti a mikrobiális kontamináció kockázatát is.

Ígéretünk

Gondoskodunk arról, hogy a kutatóknak szállított sejtek a lehető legközelebb álljanak az eredeti genetikai összetételhez és fenotípusos jellemzőkhöz, növelve ezzel a kísérleti adatok megbízhatóságát. Ezen túlmenően az egyes passzálások aprólékos dokumentálásával a Cytion hozzájárul a kutatások nyomon követhetőségéhez és reprodukálhatóságához, ami a sejtkultúra gyakorlatának magas színvonalát tükrözi. A kutatókat arra ösztönözzük, hogy a sejtkultúrák állapotáról és előzményeiről szóló referenciaanyagként pontos nyilvántartást vezessenek a passzálási számokról, mind a tenyésztőedényeken, mind a laboratóriumi jegyzetfüzetekben.

Tippek és gyakori hibák

A helyes protokoll betartása elengedhetetlen, de a gyakori buktatók megértése ugyanolyan fontos lehet. A sejtkultúra-eljárások érzékenyek a technikában, az időzítésben és a reagensek minőségében bekövetkező apró eltérésekre. Az alábbi tippek a Cytion tudományos csapata által ajánlott bevált gyakorlatokat tükrözik, amelyek kiterjedt sejtkultúra-tapasztalatokon alapulnak.

• A sejtek hőhatásának minimalizálása érdekében a reagenseket használat előtt mindig melegítsük elő 37 °C-ra.
• Dolgozzon gyorsan, de óvatosan – minimalizálja az inkubátoron kívül töltött időt.
• Használjon tanúsított, mikoplazma-tesztelt reagenseket, hogy elkerülje a kísérleti eredményeket veszélyeztető szennyeződéseket.
• Dokumentáljon minden lépést, beleértve a passzálási számot, a dátumot és a sejtek morfológiájára vonatkozó megfigyeléseket.
• A drága reagensek pazarlásának elkerülése érdekében a protokollt egy kis kísérleti kísérlettel validálja, mielőtt nagy léptékben alkalmazná.

Ajánlott Cytion reagensek

A Cytion számos, kifejezetten ennek a protokollnak a támogatására tervezett, validált sejtkultúra-reagenst kínál. Minden reagens teljesítményét általánosan használt sejtvonalakon tesztelték, és teljes dokumentációval rendelkeznek. Látogasson el a cytion.com/Media-Reagents oldalra a teljes portfólió megtekintéséhez.