NIH-3T3 sejtek: a fibroblasztok kutatásának előmozdítása és a NIH-3T3 sejtvonal alkalmazásai
A NIH-3T3 sejtvonalat, amelyet 1962-ben Howard Green és George Todaro hoztak létre a New York-i Egyetem Orvostudományi Karán egy 17 napos svájci albínó egér embrió szövetéből, az orvostudományi kutatások alapvető forrásává vált. A leukémia- és szarkóma-vírusok fókuszainak kialakulására való nagyfokú fogékonyságáról ismert NIH-3T3 sejtek számos tudományos kutatásban fontos eszközként szolgálnak, ideértve a vírusos onkológiai vizsgálatokat, a génexpresszió-elemzéseket és a sejtnövekedés dinamikájának feltárását. A „3T3” elnevezés a sejtkultúra-módszert tükrözi: a „3 napos átültetés” (3-day transfer) időközre utal, 3 × 10^5 sejt kezdeti beültetési sűrűséggel, kiemelve azokat a szabványosított feltételeket, amelyek mellett ezeket a sejteket először tenyésztették és szaporították.
- Növekedési tápközeg
- Lásd a termékoldalt
- Duplázódási idő
- Lásd a termékoldalt
- Növekedési típus
- Adherens
- Biológiai biztonsági szint
- BSL-1
- Kapható
- Cytion — NIH-3T3 megrendelése
A NIH-3T3 sejtek változatos morfológiája és alkalmazási területei
A NIH-3T3 sejtek egyik jellegzetes tulajdonsága a morfológiai alkalmazkodóképességük, amely a tenyészet konfluenciájától függően jelentősen változik. Alacsonyabb sűrűség mellett ezek a fibroblasztok orsó alakú, magányos sejtszerkezetet mutatnak, amely sűrű, örvénylő mintázattá alakul, ahogy a populáció eléri a konfluenciát. Körülbelül 18 μm-es átlagos átmérőjükkel a NIH-3T3 sejtek sokoldalú modellt kínálnak a mélyreható sejtbiológiai kutatásokhoz, a szöveti helyreállítási mechanizmusoktól kezdve a sejtciklus-szabályozás bonyolult útvonalaiig.
Tenyésztési információk
A tenyésztés legfontosabb adatai:
A populáció megduplázódási ideje: Körülbelül 20 óra.
Növekedési típus: tapadó tenyészetek.
Beültetési sűrűség: Ajánlott: 3–4 × 10⁴ sejt/cm².
Növekedési tápközeg: DMEM vagy Ham’s F12, 5% FBS-szel és 2,5 mM L-glutaminnal kiegészítve.
Növekedési feltételek: 37 °C-on, 5% CO₂-tartalmú, párásított inkubátorban tartsuk.
Tárolás: -195 °C alatti hőmérsékleten, folyékony nitrogén gőzfázisában tárolandó.
Fagyasztási módszer: CM-1 vagy CM-ACF táptalajt használjon; lassú fagyasztási módszert alkalmazzon (1 °C-os hőmérsékletcsökkenés).
Felolvasztási protokoll: gyors felmelegítés 37 °C-os vízfürdőben, majd centrifugálás a fagyasztó tápközeg eltávolítására, végül reszuszpenzió a tenyésztő tápközegben.
Biológiai biztonsági szint: A tenyésztéshez 1. biológiai biztonsági szintű környezet szükséges.
Svájci albínó egér egy laboratóriumban.
A NIH 3T3 sejtek használatának előnyei és hátrányai
Előnyök
Transzfekciós hatékonyság: A magas transzfekciós arányukról ismert NIH-3T3 sejtek kiválóan alkalmasak mind átmeneti, mind stabil génkifejeződési vizsgálatokhoz, és számos transzfekciós technikával használhatók.
Táptalajként való felhasználás: Ezek a sejtek gyakran szolgálnak táptalajként olyan sejtekkel való együtttenyésztéshez, mint a keratinociták és az őssejtek, mivel olyan növekedési faktorokat bocsátanak ki, amelyek elősegítik az együtttenyésztett sejtek növekedését.
Őssejtkutatás: A NIH-3T3 sejtek az őssejtkutatásban előnyben részesített választás a genetikai módosítás nélküli pluripotencia indukálásához, valamint az őssejtek differenciálódásához szükséges kedvező környezet biztosításához.
Tenyészetstabilitás: A NIH-3T3 sejtek stabilitásukról és a spontán transzformáció alacsony gyakoriságáról ismertek. Bizonyos körülmények között, illetve specifikus onkogénekkel vagy mutagénekkel való expozíciót követően azonban a NIH-3T3 sejtek spontán transzformáción mehetnek keresztül. Ez a transzformáció rákos tulajdonságok kialakulásához vezethet, mint például az ellenőrizhetetlen növekedés, a kontaktgátlás elvesztése, valamint a daganatok kialakulására való képesség, ha fogékony gazdaszervezetbe injekciózzák őket.
Hátrányok
A sejtek méretének egyenetlensége: A NIH-3T3 sejtek hosszúkás, orsószerű morfológiája változó lehet, ami bonyolítja a vizsgálatok során végzett képelemzéseket.
Fertőzésre való hajlam: Ezek a sejtek hajlamosak a bakteriális és mikoplazma-fertőzésekre, ha nem szigorú aszeptikus körülmények között tartják őket, ami potenciálisan befolyásolhatja a kísérletek integritását.
A NIH-3T3 sejtek kutatási alkalmazásai
DNS-transzfekciós vizsgálatok: A NIH-3T3 sejtek robusztussága ideálissá teszi őket különböző gének bejuttatására és funkciójuk tanulmányozására, amit olyan fehérjéket vizsgáló kutatások is alátámasztanak, mint a NAB2-STAT6, valamint azok szerepe a sejtes folyamatokban.
Sejtalapú vizsgálatok: Megbízhatóságuk kiterjed különböző vizsgálatokra, beleértve az életképességi, az apoptózis és a fókusz-képződési vizsgálatokat, amelyek betekintést nyújtanak a sejtek különböző kísérleti körülmények közötti reakcióiba.
Sejtciklus-kutatás: A sejtvonal szérumszintjén keresztül történő egyszerű sejtciklus-manipulálhatósága hatékony modellé teszi a sejtciklus szabályozásának és a betegségekkel összefüggő rendellenességeinek tanulmányozásához.
Fejlessze kutatását az NIH-3T3 sejtek segítségével
A NIH 3T3 fibroblaszt sejtvonalat érintő legfontosabb tanulmányok bemutatása
Az NIH-3T3 sejtvonal számos kutatási projektben játszott kulcsfontosságú szerepet, amelyek a sejtbiológia különböző területeit ölelték fel. Az alábbiakban bemutatunk néhány, ezeket a sejteket felhasználó jelentős tanulmányt:
- A NAB2-STAT6 fúziós fehérje vizsgálata: A Biochemical and Biophysical Research Communications folyóiratban megjelent tanulmány azt vizsgálja, hogy a NAB2-STAT6 fúziós fehérje hogyan hat a NIH-3T3 sejtekre, különös tekintettel annak szerepére a sejtnövekedés és a migráció fokozásában az EGR-1 szabályozásán keresztül.
- Az APOBEC3 és az egér leukémia vírus vizsgálata: A Virology folyóiratban megjelent kutatás az AKV egér leukémia vírus hipermutációját vizsgálja az egér APOBEC3 gént expresszáló NIH-3T3 sejtekben.
- Epigenetikus gyógyszerek antimetasztatikus potenciáljának értékelése: Az Oncotargets and Therapy folyóiratban megjelent tanulmány a hidralazin és a valproinsav antimetasztatikus hatásait értékeli RAS-transzformált NIH-3T3 sejteken.
- A baicalein hatása az NIH-3T3-sejtek proliferációjára és a kollagénszintézisre: Ez a kutatás NIH-3T3-sejteket használ annak feltárására, hogy a baicalein hogyan befolyásolja a sejtek proliferációját és a kollagéntermelést a miR-9/inzulin-szerű növekedési faktor-1 tengely modulációján keresztül.
- A riboflavin-hiány és a tumorogenezis vizsgálata: Ez a tanulmány bemutatja azokat az eredményeket, amelyek szerint a NIH-3T3 sejtekben fellépő riboflavin-hiány hogyan járul hozzá a tumorogenezishez a sejtproliferáció elősegítése és a sejtciklus-gének szabályozásának zavara révén.
Alapvető források az NIH-3T3 sejtekkel kapcsolatos kutatásokhoz
Azok számára, akik az NIH-3T3 sejtekkel való munkában érdekeltek, számos forrás áll rendelkezésre a tenyésztési és kísérleti protokollokhoz:
- Szferoidképződés NIH-3T3 sejtekben: Ez a videó részletes útmutatást nyújt a szferoidok kialakításához, egy olyan 3D-s sejtkultúra-technikához, amely az NIH-3T3 sejteket klaszterekbe aggregálja, így a kutatások számára fiziológiailag relevánsabb modellt kínál.
- Az NIH-3T3 sejtek növekedésének nyomon követése: A JuLI Br élősejt-képalkotó rendszer segítségével ez a videó 65 órán keresztül rögzíti az NIH-3T3 sejtek növekedési dinamikáját, bemutatva a sejtek valós idejű szaporodását.
Ezek az erőforrások célja, hogy támogassák az NIH-3T3 sejtekkel végzett kutatási tevékenységét, alapot biztosítva a sikeres kísérletekhez és felfedezésekhez.
Gyakran ismételt kérdések az NIH-3T3 sejtekről
Hivatkozások
- Rahimi, A.M., M. Cai és S. Hoyer-Fender, A NIH3T3 fibroblaszt sejtvonal heterogenitása. Cells, 2022. 11(17): 2677. o.
- Leibiger, C. és munkatársai, A NIH 3T3 sejtvonal első molekuláris citogenetikai, nagy felbontású jellemzése egér multicolor banding segítségével. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): 306–312. o.
- Wang, H.-X. és munkatársai: Különböző táptalajrétegek összehasonlító elemzése 3T3 fibroblasztokkal nyulak limbuszi őssejtjeinek tenyésztése céljából. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): 1021. o.
- Wang, Z. és munkatársai: Neuronális sejtek differenciálódása NIH/3T3 fibroblasztokból meghatározott körülmények között. Development, growth & differentiation, 2011. 53(3): 357–365. o.
- Park, Y.-S. és munkatársai: A NAB2-STAT6 fúziós fehérje az EGR-1 szabályozásán keresztül közvetíti a sejtproliferációt és az onkogén progressziót. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2020. 526(2): 287–292. o.
- Mattsson, M., A Sloppymerase™ expressziója NIH/3T3 sejtekben: egy hibára hajlamos fúziós polimeráz sokoldalúságának feltárása. 2021.
- Sahinturk, V. és munkatársai, Az akrilamid az NIH/3T3 fibroblasztsejtekben apoptózis útján fejti ki citotoxikus hatását. Toxicology and Industrial Health, 2018. 34(7): 481–489. o.
- Lusi, E.A. és F. Caicci, Az első emberi retro-óriásvírus felfedezése: morfológiájának, retrovirális kinázának és egerekben tumorokat kiváltó képességének leírása. bioRxiv, 2019: 851063. o.
- Endo, M. és munkatársai, Az E2F1–Ror2 jelátvitel koordinált transzkripciós szabályozást közvetít a bFGF-vel stimulált NIH/3T3 fibroblasztokban a G1/S fázisátmenet elősegítése érdekében. The FASEB Journal, 2020. 34(2): 3413–3428. o.
- Long, L. és munkatársai: A riboflavin-hiány elősegíti a tumorogenezist HEK293T- és NIH3T3-sejtekben a sejtproliferáció fenntartása és a sejtciklushoz kapcsolódó génexpresszió szabályozása révén. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): 834–843. o.