NCI-H1299 sejtek: Az NCI-H1299 tüdőráksejtek kutatása és klinikai vonatkozásai

Tenyésztési információk

A sejtvonal tenyésztésének fenntartása nem egyszerű, amíg nem ismeri az azzal kapcsolatos összes fontos információt, többek között: Mennyi az NCI-H1299 sejtvonal duplázódási ideje? Mekkora az NCI-H1299 sejtvonal beültetési sűrűsége? Mi az NCI-H1299 sejtkultúra-táptalaja? Hogyan tenyésztik az NCI-H1299 sejtvonalakat? Ez a szakasz segít megismerni a válaszokat az NCI-H1299 sejtek tenyésztésével kapcsolatos összes kérdésre.

Az NCI-H1299 sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai

Duplázódási idő:

Az NCI-H1299 sejtek duplázódási ideje 22–30 óra között mozog.

Adherens vagy szuszpenziós:

Az NCI-H1299 adhezív sejtvonal.

Átültetési arány:

Az NCI-H1299 sejteket az ajánlott 1:3–1:6 arányban szubkultiválják. A beoltáshoz az adhezív sejteket 1x PBS-sel mossák, majd szobahőmérsékleten 8–10 percig Accutase passzázsoló oldattal inkubálják. A levált sejteket friss tenyésztőközeggel keverjük össze, majd centrifugáljuk. A sejtpelletet ezután újra szuszpendáljuk, és a sejteket növekedési tápközeget tartalmazó új lombikokba öntjük.

Növekedési tápközeg:

Az RPM1 1640 ideális táptalaj az NCI-H1299 sejtek számára. Kiegészítik 10% borjúszérummal, 4500 mg/L glükózzal, 2,0 mM L-glutaminnal, 1 mM nátrium-piruváttal, 1500 mg/L NaHCO3-mal és 10 mM HEPES-szel. A táptalajt hetente 2–3 alkalommal kell cserélni.

Növekedési feltételek:

Az NCI-H1299 tüdőráksejt-tenyészeteket 37 °C-on, 5%-os CO₂-ellátással, párásított inkubátorban tartják.

Tárolás:

Az NCI-H1299 sejtvonal hosszú távon folyékony nitrogén gőzfázisában vagy -150 °C alatti hőmérsékletű ultralow-temperatúra-fagyasztókban tárolható.

Fagyasztási eljárás és táptalaj:

A CM-1 vagy a CM-ACF az NCI-H1299 sejtek fagyasztó táptalaja. A sejteket lassú fagyasztási eljárással fagyasztják le, amely a sejtek életképességének megőrzése érdekében percenként csupán 1 fokos hőmérsékletcsökkenést engedélyez.

Felolvasztási folyamat:

A fagyasztott NCI-H1299 sejteket 37 Celsius-fokos, előmelegített vízfürdőben 40–60 másodpercig gyorsan keverjük, amíg csak egy kis jégdarab marad. A felolvasztott sejtekhez friss táptalajt adunk, és azokat közvetlenül új lombikokban tenyészthetjük, vagy centrifugálhatjuk. Az előbbi esetben a táptalajt 24 órás inkubáció után ki kell cserélni. A centrifugálás segít eltávolítani a fagyasztó táptalaj összetevőit. Ezt követően a learatott sejteket friss táptalajban reszuszpendáljuk, és a tenyésztéshez új lombikba adagoljuk.

Biológiai biztonsági szint:

Az NCI-H1299 sejtkultúra kezeléséhez 1. szintű biológiai biztonsági laboratórium szükséges.

NCI-H1299 sejtvonal megvásárlása: kiváló minőségű kutatási eszközök a tüdőrák biológiájának vizsgálatához

Az NCI-H1299 sejtek előnyei és hátrányai

Más emberi ráksejtvonalakhoz hasonlóan az NCI-H1299 is rendelkezik néhány megkülönböztető jellemzővel, amelyekhez specifikus előnyök és hátrányok társulnak. Az alábbiakban összefoglaltunk néhány jelentősebbet.

Előnyök

Az NCI-H1299 nem kissejtes tüdőráksejtvonal fő előnyei a következők:

• In vitro tüdőrákmodell

  Az NCI-H1299 sejtvonalakat tüdőrák nyirokcsomó-áttéteiből fejlesztették ki, ezért viszonylag hasonló tulajdonságokkal rendelkeznek. Ezért ezek a sejtek in vitro modellként szolgálhatnak a tüdőrák biológiájának, sejt- és molekuláris mechanizmusainak vizsgálatához, valamint a potenciális terápiák szűréséhez és teszteléséhez.

• Könnyen tenyészthető

  Az NCI-H1299 sejtek könnyen tenyészthetők és fenntarthatók egy kutatólaboratóriumban. Nincsenek bonyolult sejttenyésztési követelmények és eljárások.

• NCI-H1299 p53 és NCI-H1299 KRAS mutáció

  Az NCI-H1299 sejtekben hiányzik a p53 gén expressziója, ami lehetővé teszi a sejtek erőteljes szaporodását. Ezen felül KRAS-mutációval rendelkeznek, amely hozzájárul a sejtek növekedéséhez, szaporodásához, inváziójához és migrációjához. Mindezeket figyelembe véve a kutatók az H1299 sejteket használják a KRAS- és P53-mutációkkal kapcsolatos molekuláris mechanizmusok vizsgálatához.

Hátrányok

Az NCI-H1299 sejtek hátrányai a következők:

• Szöveti specifitás

  Az NCI-H1299 sejtek tüdőszövetből származnak. Ezért alkalmazhatóságuk többnyire a tüdőrák kutatására korlátozódik. Lehet, hogy nem tükrözik teljes mértékben más rákfajták heterogenitását és általános jellemzőit.

Az NCI-H1299 sejtek kutatási alkalmazásai

Az NCI-H1299 sejtvonalat széles körben használják a tüdőrák kutatásában. Az alábbiakban néhány ígéretes alkalmazási területet említünk.

• Rákbiológia: Az NCI-H1299 sejtek kiváló kutatási eszközként szolgálnak a rák kialakulásának, progressziójának, valamint a kapcsolódó sejt- és molekuláris mechanizmusok vizsgálatához. Ezek a sejtek bizonyos mutációkkal rendelkeznek, ami lehetővé teszi a kutatók számára a kapcsolódó ráksejt-viselkedés, jelátviteli útvonalak és génexpressziós profilok feltárását. Számos tanulmányban alkalmazták az NCI-H1299 nem-kissejtes tüdőrákos sejtvonalat a tüdőrák biológiájának vizsgálatára. Például egy 2018-ban végzett tanulmány az NCI-H1299 sejtek felhasználásával vizsgálta a tüdőrákos sejtek apoptózisában részt vevő jelátviteli útvonalat. A kutatók megállapították, hogy a PI3K/AKT jelátviteli út hozzájárul a sejtek szaporodásához, és gátlása a ráksejtek halálát okozhatja [1]. Hasonlóképpen egy másik kutatás az NCI-H1299 epiteliális-mezenchimális átalakulásában (EMT) szerepet játszó mechanizmusokat vizsgálta. Ez a tanulmány azt a hipotézist vetette fel, hogy egy extracelluláris fehérje, a SPARC (savanyú, ciszteinben gazdag szekretált fehérje) hozzájárul az NCI-H1299 EMT-jéhez és migrációjához, ezáltal elősegíti a sejtekben a tumorogenezist – a SPARC fehérje a TGF-β1 jelátvitel közvetítőjeként működik [2]. 

• Gyógyszerkifejlesztés és szűrés: Az NCI-H1299, egy humán tüdőrákos sejtvonal, széles körben alkalmazott modell a potenciális gyógyszerek toxicitásának és hatékonyságának értékeléséhez. Ezen felül a kutatók a daganatellenes gyógyszerek hatásmechanizmusának vizsgálatára is használják. Ezeket a sejteket tanulmányok során lehetséges gyógyszercélpontok és rezisztenciamechanizmusok azonosítására is felhasználták. Például Xiao-Yun Shen és munkatársai által végzett kutatás a brucein D (BD) nevű természetes vegyület rákellenes potenciálját vizsgálta. Az eredmények kimutatták, hogy a BD jelentősen gátolja az NCI-H1299 sejtek szaporodását, invázióját és migrációját. Ezért a BD potenciális kiegészítő terápiának tekinthető a nem kissejtes tüdőrák kezelésében [3]. Hasonlóképpen, egy tanulmány a xanthohumol önmagában, illetve a ciszplatin kemoterápiás szerrel kombinálva gyakorolt citotoxikus hatásait értékelte az NCI-H1299 tüdőráksejtekre [4].

Gyakran ismételt kérdések az NCI-H1299 sejtvonalról

Hivatkozások

1. Gu, J. és munkatársai: Az EGCG által a PI3K/Akt jelátviteli út gátlásával kiváltott apoptózis vizsgálata tüdőrákos sejtekben. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): 4557–4563. o.
2. Sun, W. és munkatársai: A SPARC a TGF-β1 mediátoraként járul hozzá az epiteliális-mesenchimális átalakulás elősegítéséhez az A549 és H1299 tüdőráksejtekben. Biofactors, 2018. 44(5): 453–464. o.
3. Shen, X.-Y. és munkatársai: A brucein D hatásmechanizmusának vizsgálata a nem-kissejtes tüdőrákos H1299 sejtek kezelésében. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): 500. o.
4. Long, B. és munkatársai, A xantohumol és a ciszplatinnal való kombinációjának citotoxikus hatásai az emberi metasztatikus tüdőrákos H1299 sejtekre. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): 1–15. o.