Közzététel: 2023. október 17. | Utolsó felülvizsgálat: 2026. május
A431 sejtek: eredet, tenyésztési feltételek és kutatási alkalmazások
Az A431 egy 85 éves női páciens bőréből nyert humán epidermoid karcinóma sejtvonal. Ez az egyik legszélesebb körben használt sejtvonal az orvostudományi kutatásban, különösen a rákbiológiában, az immuno-onkológiában, a dermatológiában és a gyógyszerkutatásban. Az A431 sejtek masszívan túltermelik az epidermális növekedési faktor receptort (EGFR) – sejtenként körülbelül 2–3 millió receptort hordoznak, ami nagyjából 20–50-szer több, mint a normál hámsejtekben –, ami az EGFR-jelátviteli tanulmányok és az EGFR-t célzó terápiák, például a cetuximab és az erlotinib tesztelésének aranystandardjává teszi őket. Az A431 sejtek kizárólag a Cytiontól, az Ön független európai sejtbankjától szerezhetők be.
- Faj / Eredet
Ember (nő, 85 éves) - Szövet
Bőr felhám (epidermoid karcinóma) - Morfológia
Hámsejtes, tapadó - Duplázódási idő
80–100 óra - Növekedési táptalaj
DMEM + 10% FBS - Biológiai biztonsági szint
BSL-1 - Főbb jellemző
EGFR túltermelés (~2–3 millió receptor/sejt) - Főbb biomarkerek
EGFR (amplifikált), TP53 (mutáns), KRAS (vad típusú), PTEN (expresszálódik) - Termékszám
300112 — Rendeljen A431 sejteket a Cytiontól
- A431 sejtek: Általános jellemzők és eredet
- A431 sejtvonal: Tenyésztési információk
- Az A431 sejtvonal előnyei és hátrányai
- Az A431 sejtek kutatási alkalmazásai
- A431 és más bőrrákos sejtvonalak összehasonlítása
- Az A431 sejteket bemutató kutatási publikációk
- Források, protokollok és videók
- Gyakran feltett kérdések
A431 sejtek: Általános jellemzők és eredet
Ez a szakasz az A431 sejtvonal legfontosabb biológiai tulajdonságait tárgyalja – beleértve eredetét, morfológiáját, kariotípusát és az EGFR túltermelését, ami egyedülállóan értékessé teszi a kutatás számára.
Az A431 sejtvonal eredete és története
- Az A431, egy humán bőrrákos sejtvonal, egy 85 éves, epidermoid karcinómában szenvedő nő epidermiszéből származik [1]. A sejtvonalat D.J. Giard és munkatársai hozták létre, akik számos más sejtvonalat is kifejlesztettek szilárd tumorokból.
- A sejtvonalat széles körben terjesztették, és világszerte független sejtbankok, köztük a Cytion is, megbízható és reprodukálható kutatási modellként validálták.
A431 morfológia és kariotípus
- Az A-431 sejtek epiteliális morfológiával rendelkeznek. Normál tenyésztési körülmények között aggregálódnak és sejtcsomókat képeznek.
- Az A431 bőrrákos sejtvonal hipertriploid. A modális kromoszómaszám 74, amely a sejtek körülbelül 36%-ában fordul elő. Magasabb ploiditás is jelen van a sejtpopuláció körülbelül 1%-ában.
EGFR-expresszió az A431 sejtekben
Az EGFR túlzott expressziója az A431 sejtek meghatározó jellemzője és széles körű használatuk elsődleges oka. Az A431 sejtek az EGFR génlókusz genomikus amplifikációját hordozzák, ami sejtenként körülbelül 2–3 millió EGFR-receptort eredményez – ez 20-50-szerese a normál epiteliális sejteknek. Ez teszi az A431-et a következő területeken az aranystandard pozitív kontrollnak:
- EGFR-ellenanyagok validálása Western blot, áramlási citometria és immunfluoreszcencia segítségével
- EGFR-célzott monoklonális antitestek, például a cetuximab és a panitumumab tesztelése
- EGFR-tirozin-kináz-gátlók (TKI-k), például erlotinib, gefitinib és afatinib értékelése
- A downstream jelátviteli útvonalak, beleértve a PI3K/AKT/mTOR és a RAS/MAPK/ERK útvonalakat
A431 sejtvonal: Tenyésztési információk
A sejtvonal tenyésztési követelményeinek ismerete megkönnyíti a kezelést. Ez a szakasz az A431 sejtvonal szaporodási idejét, tenyészközegét, átültetését, kriokonzerválását és biológiai biztonsági követelményeit tárgyalja.
Az A431 sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai
Duplázódási idő:
Az A431 sejtek populációjának duplázódási ideje 80 és 100 óra között mozog.
Adherens vagy szuszpenziós:
Az A431 egy adhezív sejtvonal.
Beültetési sűrűség:
Az A431 sejtvonal esetében az ideális sűrűség 1 x 104 sejt/cm2. Ezen a sűrűségen a sejtek körülbelül 4 nap alatt érik el a konfluenciát. Az adhezív sejteket PBS-sel (1×) mossuk, Accutase passzázsoló oldattal inkubáljuk, majd tenyészközegben reszuszpendáljuk, centrifugáljuk és új lombikokba adagoljuk.
Növekedési tápközeg:
DMEM tápközeg, kiegészítve 10% borjú szérummal (FBS), 4,5 g/l glükózzal, 1,0 mM nátrium-piruváttal, 1,5 g/l NaHCO3-mal és 4 mM L-glutaminnal. A tápközeget 2–3 naponta cserélni kell.
Növekedési feltételek:
Az A431 ráksejteket 37 °C-on, 5% CO2-tartalmú, párásított inkubátorban tenyésztik.
Tárolás:
A sejtek életképességének megőrzése érdekében elektromos fagyasztóban vagy folyékony nitrogén gőzfázisában, −150 °C alatt tárolandó.
Fagyasztási eljárás és táptalaj:
Az A431 sejtekhez ajánlott fagyasztó tápközeg a CM-1 vagy a CM-ACF. Használjon szabályozott sebességű, lassú fagyasztási módszert (−1 °C/perc).
Felolvasztási folyamat:
A fagyasztott A431 sejteket gyorsan olvassza fel 37 °C-os vízfürdőben (40–60 másodperc). Ha kis jégdarabok maradnak, adjon hozzá tenyészközegeket, és centrifugálja le. A learatott sejteket reszuszpendálja, és helyezze át tenyésztőedényekbe.
Biológiai biztonsági szint:
Az A431 tenyészetek kezeléséhez a 1. biológiai biztonsági szint (BSL-1) ajánlott.
Az A431 sejtvonal előnyei és hátrányai
Az A431 sejtvonal megkülönböztethető jellemzőkkel rendelkezik, amelyek egyrészt rendkívül hasznossá, másrészt kontextusfüggően korlátozottá teszik. Íme egy kiegyensúlyozott összefoglaló.
Előnyök
Az A431 rákos sejtvonal fő előnyei a következők:
EGFR-túltermelés
Az A431 sejtek sejtenként 2–3 millió receptorral túltermelik az EGFR-t, így az EGFR-jelátviteli vizsgálatok és az anti-EGFR gyógyszerek (cetuximab, erlotinib, gefitinib) validálásának aranystandard pozitív kontrolljaként szolgálnak.
Tumorképző képesség
Az A431 sejtek tumorigenikusak és könnyen képesek tumorokat képezni immunhiányos egerekben, ami megbízható eszközzé teszi őket a xenotranszplantációs rákmodellekben a tumor növekedési dinamikájának tanulmányozására és az új rákkezelések in vivo értékelésére.
Jól jellemzett
Az évtizedek óta publikált kutatások eredményeként az A431 sejtek genomikus, proteomikus és fenotípusos szinten is részletesen jellemzettek, ami szilárd tudományos alapot biztosít a kísérleti tervekhez.
3D szferoidképződés
Az A431 sejtek ultra-alacsony adhéziós körülmények között könnyen kompakt 3D szferoidokat képeznek, ami kompatibilissé teszi őket a modern organoid és szferoid szűrőplatformokkal a gyógyszerpenetráció és a hatékonysági vizsgálatokhoz.
Hátrányok
Az A431 sejtek hátrányai a következők:
Genetikai rendellenességek
Az A431 egy olyan rákos sejtvonal, amelyben genetikai mutációk és kromoszómális eltérések halmozódtak fel (hipertriploid, modális szám 74), amelyek miatt nem feltétlenül tükrözik teljes mértékben az eredeti tumor jellemzőit.
Mikrobiális szennyeződés kockázata
Az A431 hajlamos a bakteriális kontaminációra. A megbízható eredmények érdekében elengedhetetlen a szigorú aszeptikus technika betartása és a rutin mikoplazma-vizsgálat.
Nem reprezentatív az összes EGFR-tumorra nézve
Mivel az A431-ben az EGFR-expressziót génamplifikáció, és nem mutáció (mint a tüdőrák esetében) vezérli, az eredmények nem feltétlenül alkalmazhatók közvetlenül az EGFR-mutáns tumorokra, például a nem kissejtes tüdőrákra (NSCLC).
Az A431 sejtek kutatási alkalmazásai
Az A431 sejtvonalat széles körben használják számos kutatási területen. Egyedülálló EGFR-biológiája, tumorigenitása és jól jellemzett genomja miatt ez az egyik legsokoldalúbb emberi ráksejtvonal.
- Rákbiológia: Az A431 hatékony eszköz a rák növekedését, metasztázisát és invázióját előidéző sejtes és molekuláris mechanizmusok vizsgálatához. Tanulmányok feltérképezték a PI3K/AKT/mTOR és a RAS/MAPK/ERK jelátvitelt ebben a sejtvonalban, és kimutatták, hogy gátlásuk apoptózist indukál az A431 bőrdaganatos sejtekben [2, 3].
- EGFR-célzott terápiák tesztelése: Az A431 sejtek a referencia-standardok az anti-EGFR terápiák – monoklonális antitestek (cetuximab, panitumumab) és kis molekulájú TKI-k (erlotinib, gefitinib, afatinib, osimertinib) – értékeléséhez.
- Gyógyszervizsgálat és értékelés: Az A431 sejteket új rákellenes gyógyszerjelöltek értékelésére használják. Rahim és munkatársai 2022-es tanulmánya kimutatta az Alstonia angustiloba-ból biogén módon szintetizált ezüst nanorészecskék erős antiproliferatív hatását az A431 sejteken [4].
- Tumor-xenotranszplantációs modellek: Az A431 sejtek tumorigenikusak immunhiányos egerekben, ami lehetővé teszi szubkután és ortotópos xenotranszplantációs modellek alkalmazását in vivo hatékonysági vizsgálatokhoz. Lim és munkatársai A431-ből származó xenotranszplantátumokat használtak az exogén EGF sugárérzékenyítő hatásainak in vivo értékeléséhez [5].
- Bőrtoxicitás és dermatológiai kutatás: Az A431 sejteket gyógyszeripari és kozmetikai cégek széles körben használják a helyileg alkalmazott vegyületek bőrtoxicitásának, bőrbehatolásának és biztonsági profiljának értékelésére.
- 3D szferoid és organoid modellek: Az A431 sejtek ultra-alacsony tapadású vagy függő csepp körülmények között kompakt 3D szferoidokat képeznek, lehetővé téve a gyógyszerpenetráció és rezisztencia fiziológiailag relevánsabb vizsgálatát.
- EGFR-ellenanyagok validálása: Rendkívül magas EGFR-sűrűségük miatt az A431 sejtek a standard pozitív kontrollok az anti-EGFR ellenanyagok validálásához Western blot, immunfluoreszcencia, IHC és áramlási citometria alkalmazásával.
A431 vs. egyéb bőrrákos sejtvonalak
A megfelelő sejtvonal kiválasztása kritikus fontosságú a kísérletek érvényessége szempontjából. Az A431 összehasonlítása más, gyakran használt bőr- és laphámrákos sejtvonalakkal:
| Jellemző | A431 | A375 (melanoma) | SCC-25 (szájüregi SCC) | HaCaT (keratinocita) |
|---|---|---|---|---|
| Rák típus | Epidermoid karcinóma | Malignus melanoma | Szájüregi pikkelyes sejtes karcinóma | Immortalizált keratinocita |
| EGFR-expresszió | +++ (~2–3M/sejt) | + (alacsony) | ++ (közepes) | ++ (közepes) |
| Tumorképző képesség | Igen | Igen | Igen | Nem |
| Morfológia | Hámsejtes, tapadó | Orsó alakú, adhezív | Hámsejtes, tapadó | Hámsejtes, tapadó |
| BSL | 1 | 1 | 1 | 1 |
| Elsődleges felhasználás | EGFR-kutatás, rákellenes gyógyszerek tesztelése | Melanoma biológia, BRAF-gátlók | Fej- és nyaki rák, sugárzáskutatás | Bőrbiológia, barrier funkció |
Az A431 sejtekkel kapcsolatos kutatási publikációk
Íme néhány jelentős, szakértők által lektorált publikáció, amely az A431 bőrrákos sejtvonalat mutatja be.
Megjelent a Materials Today Communications (2020) folyóiratban. Értékelték a poli-ε-kaprolakton kurkuminnal töltött nanoszálak és a polivinil-alkohol-AuNP-k rákellenes potenciálját az A431 ráksejtek ellen.
A miRNA-221 elősegíti a bőr pikkelyes sejtes karcinómájának progresszióját a PTEN célzásával
Megjelent a Cellular & Molecular Biology Letters (2019) folyóiratban. Felvetették, hogy a mikroRNS-221 onkogén szerepet játszik a bőr laphámsejtes karcinómájában a PTEN tumor szuppresszor gén célzásával.
Megjelent a BMC Complementary Medicine and Therapies (2016) folyóiratban. Kimutatták, hogy az Eutypella spp–CrP14 gombából származó vinkrisztin apoptózist indukál az A431 sejtekben.
Megjelent a Cells folyóiratban (2019). A CDC42SE1-et a bőrrák progressziójának potenciális biomarkereként azonosították, mivel annak lecsökkent szintje elősegíti a tumorogenezist az A431 sejtekben.
A metformin gátolja az A431 sejtek proliferációját a PI3K/Akt jelátviteli útvonal modulálásával
Megjelent az Experimental and Therapeutic Medicine (2015) folyóiratban. Kimutatták, hogy a metformin a PI3K/Akt jelátviteli út szabályozásával gátolja az A431 sejtek szaporodását.
Források az A431 sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyebek
Az alábbi források gyakorlati útmutatást nyújtanak az A431 sejtekkel való laboratóriumi munkához.
- A-431 sejtek transzfekciója — Lépésről lépésre bemutató videó az A431 ráksejtek transzfekciójáról.
- A431 ráksejtvonal — Cytion termékoldal — Teljes sejtkultúra-információ: tenyészközeg, beültetési sűrűség, átültetés, kriokonzerválás és minőségi tanúsítványok.
- A431 sejtkultúra-protokoll — Rövid, külső protokoll az A431 sejtvonal tenyésztéséhez a Bio-Protocoltól.
- A Cytion összes bőrrákos sejtvonalának böngészése — Fedezze fel a Cytion által kínált bőrrákos sejtvonalak teljes választékát.