U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-solut

800,00 €*

Tuotteet toimitetaan jäädytettyinä kuivajäässä kryoputkissa. Jokainen kryoputki sisältää tyypillisesti 3 × 10 ⁶ solua adheesiivisille soluille tai 5 × 10⁶ solua suspensiosoluille (katso lisätietoja erän CoA-todistuksesta).

Hinnat ilman veroja ja toimituskuluja

cryovial

Tuotenumero: 300664

Käyttöturvallisuustiedote

Tuoteseloste

Kolmannen osapuolen sopimus

Kuvaus	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 on genomin muokattu ihmisen osteosarkoomasolulinja, joka on peräisin U2OS-soluista, joissa endogeeninen SEH1L (SEH1) -geeni on muokattu CRISPR/Cas9-tekniikalla koodaamaan in-frame SNAPf-tunniste. SEH1 on osa Y-kompleksia (tunnetaan myös nimellä NUP107-160-kompleksi), joka on ydinporokompleksin (NPC) ydinrakenteellinen moduuli, joka edistää porojen tukirakenteen kokoamista ja vakautta. Lisäämällä SNAPf-koodaussekvenssin endogeeniseen lokukseen, merkitty SEH1-proteiini ilmaistaan natiivin säätelyn alaisena, säilyttäen fysiologiset ilmentymistasot ja minimoiden häiriöt ydinporojen koostumuksessa. SNAPf-tag on muokattu, nopeasti reagoiva SNAP-tagin variantti, joka sitoutuu kovalenttisesti bentsyyliguaninikonjugoitujen substraattien kanssa, mikä mahdollistaa selektiivisen ja stabiilin fluoresoivan leimauksen elävissä tai kiinnitetyissä soluissa. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-soluissa fuusioproteiini lokalisoituu ydinvaipaan NPC:n jakautumiselle tyypillisessä pistekuvioisessa rakenteessa. Koska merkintä tapahtuu endogeenisten proteiinitasojen tasolla, tämä järjestelmä sopii hyvin kvantitatiiviseen fluoresenssimikroskopiaan, superresoluutioiseen kuvantamiseen ja yksittäisten hiukkasten seuranta-analyyseihin, joiden tarkoituksena on analysoida NPC:n organisaatio ja stoikiometria. U2OS-solujen tasainen morfologia ja suuret tumat helpottavat entisestään ytimen kuoren rakenteiden korkean resoluution visualisointia. SEH1 osallistuu NPC:n biogeneesiin ja on myös ollut mukana mitoosissa tapahtuvissa kinetokoorin prosesseissa. Näin ollen tämä solulinja tarjoaa vankan alustan solusyklistä riippuvaisen NPC:n kokoamisen ja purkamisen, Y-kompleksin spatiaalisen organisaation huokosrakenteessa sekä SEH1:n mahdollisten kaksoisroolien tutkimiseen ydinkotelossa ja mitoosikinetokoorissa. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 mahdollistaa ydinporojen arkkitehtuurin ja dynamiikan mekanistisen tutkimuksen fysiologisesti merkityksellisissä ilmentymisolosuhteissa.
Organismi	Ihminen
Kudos	Luu
Tauti	Osteosarkooma

Ikä	15 vuotta
Sukupuoli	Nainen
Etnisyys	Kaukasialainen
Morfologia	Epiteelin kaltainen
Kasvuominaisuudet	Tarttuva

Viittaus	U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (Cytionin luettelonumero 300664)
Bioturvallisuustaso	1
NCBI_TaxID	9606
Tallettaja	Ellenbergin laboratorio (EMBL)
GMO:n asema	GMO-S1: Tämä ihmisen osteosarkoomasolulinja (U2OS-CRISPR-CRISPR-SNAPf-SEH1) sisältää CRISPR-välitteisen SNAPf-SEH1-fuusion, joka mahdollistaa SEH1-nukleoporinin selektiivisen merkitsemisen. Modifikaatio on stabiilisti läsnä. Tämä luokitus koskee vain Saksaa, ja se voi poiketa muualla.

Proteiinin ilmentyminen	SEH1, SNAPf-tag

Viljelyalusta	McCoys 5a, w: 3,0 g/l glukoosia, w: vakaa glutamiini, w: 2,0 mM natriumpyruvaattia, w: 2,2 g/l NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820200a)
Lisäravinteet	Täydennetään elatusainetta 10 % FBS:llä, 3,0 g/l glukoosilla, stabiililla glutamiinilla, 2,0 mM natriumpyruvaatilla, 2,2 g/l NaHCO3:lla, 1 % NEAA:lla
Dissosiaatioreagenssi	Accutase
Alakulttuuri	Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreessa väliaineessa ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Jäädytä väliaine	Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Solujen sulattaminen ja viljely	Varmista, että injektiopullo pysyy syväjäädytettynä toimitettaessa, sillä solut kuljetetaan kuivajäässä, jotta optimaalinen lämpötila säilyy kuljetuksen aikana. Vastaanotettaessa kryopullo joko säilytetään välittömästi alle -150 °C:n lämpötilassa solujen eheyden säilyttämiseksi tai edetään vaiheeseen 3, jos tarvitaan välitöntä viljelyä. Välitöntä viljelyä varten sulata injektiopullo nopeasti upottamalla se 37 °C:n vesihauteeseen, jossa on puhdasta vettä ja antimikrobista ainetta, ja sekoittamalla sitä varovasti 40-60 sekunnin ajan, kunnes jäästä on jäljellä pieni jäämöhkäle. Suorita kaikki seuraavat vaiheet steriileissä olosuhteissa virtaushupussa ja desinfioi kryopullo 70-prosenttisella etanolilla ennen avaamista. Avaa desinfioitu injektiopullo varovasti ja siirrä solususpensio 15 ml:n sentrifugiputkeen, joka sisältää 8 ml huoneenlämpöistä elatusainetta, varovasti sekoittaen. Sentrifugoi seosta 300 x g:n voimakkuudella 3 minuutin ajan solujen erottamiseksi ja hävitä varovasti supernatantti, joka sisältää jäännöspakastusmediumia. Suspendoidaan solupelletti varovasti uudelleen 10 ml:aan tuoretta elatusainetta. Jos solut ovat tarttuvia, jaa suspensio kahden T25-kolvin kesken; jos kyseessä ovat suspensioviljelmät, siirrä kaikki väliaine yhteen T25-kolviin solujen tehokkaan vuorovaikutuksen ja kasvun edistämiseksi. Noudata vakiintuneita aliviljelyprotokollia solulinjan jatkuvan kasvun ja ylläpidon varmistamiseksi ja luotettavien kokeellisten tulosten varmistamiseksi.
Inkubaatioilmapiiri	37 °C, 5 %_CO2, kostutettu ilmakehä.
Pullon pinnoite	Optimaalisen kiinnittymisen ja elinkelpoisuuden saavuttamiseksi sulatuksen jälkeen suosittelemme kollageenipinnoitettujen pullojen tai levyjen käyttöä.
Jäädytysmenettely	Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.
Toimitusehdot	Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.
Varastointiolosuhteet	Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Steriliteetti	Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä. Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Huomaa, että tämä solulinja ei ole saatavana tavanomaisen Cytion MTA:n kautta, koska se edellyttää kolmannen osapuolen sopimusta ja/tai siitä on neuvoteltava alkuperäisen lisenssinantajan kanssa.

U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1-solut

Yleisiä tietoja

Ominaisuudet

Sääntelytiedot

Biomolekyylitiedot

Käsittely

Laadunvalvonta / Geneettinen profiili / HLA

Kolmannen osapuolen sopimus