U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 rakud
800,00 €*
Tooted saadetakse külmutatuna kuivjääs krüotubides. Iga krüotub sisaldab tavaliselt 3 × 10 6 rakku adhesiivsetele liinidele või 5 × 106 rakku suspensiooniliinidele (üksikasjad on esitatud partii CoA-s).
Üldine teave
| Kirjeldus | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 on genoomi redigeeritud inimese osteosarkoomi rakuliin, mis on saadud U2OS rakkudest, milles endogeenne SEH1L (SEH1) geen on modifitseeritud CRISPR/Cas9 tehnoloogia abil, et kodeerida in-frame SNAPf märgistust. SEH1 on Y-kompleksi (tuntud ka kui NUP107-160 kompleks) komponent, tuumapooride kompleksi (NPC) keskne struktuurimoodul, mis aitab kaasa pooride raamistiku kokkupanekule ja stabiilsusele. SNAPf kodeeriva järjestuse sisestamisega endogeensesse lokusesse ekspresseeritakse märgistatud SEH1 valku loomuliku regulatiivse kontrolli all, säilitades füsioloogilised ekspressioonitasemed ja minimeerides tuumapooride koostise häireid. SNAPf-märgis on SNAP-märgise insenereeritud, kiiresti reageeriv variant, mis seondub kovalentselt bentsüülguaniiniga konjugeeritud substraatidega, võimaldades selektiivset ja stabiilset fluorestsentsmärgistamist elusates või fikseeritud rakkudes. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 rakkudes lokaliseerub fusioonvalk tuumaümbrise punktide mustrina, mis on iseloomulik NPC jaotusele. Kuna märgistamine toimub endogeensete valkude tasemel, sobib see süsteem hästi kvantitatiivseks fluorestsentsmikroskoopiasse, ülikõrge resolutsiooniga pildistamisse ja ühe osakese jälgimise analüüsidesse, mille eesmärk on NPC organisatsiooni ja stoikiomeetria analüüsimine. U2OS rakkude lame morfoloogia ja suured tuumad hõlbustavad veelgi tuumaümbrise struktuuride kõrge resolutsiooniga visualiseerimist. SEH1 osaleb NPC biogeneesis ja on seotud ka mitootiliste protsessidega, mis on seotud kinetokooridega. Seega pakub see rakuliin tugevat platvormi raku tsüklist sõltuva NPC kokkupaneku ja lahtivõtmise, Y-kompleksi ruumilise organiseerumise uurimiseks pooride raamistikus ning SEH1 potentsiaalse kahepoolse rolli uurimiseks tuumaümbrise ja mitootiliste kinetokooride puhul. U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 võimaldab uurida tuumapooride arhitektuuri ja dünaamikat füsioloogiliselt asjakohastes ekspressioonitingimustes. |
|---|---|
| Organism | Inimene |
| Kude | Bone |
| Haigus | Osteosarkoom |
Omadused
| Vanus | 15 aastat |
|---|---|
| Sugu | Naised |
| Etniline kuuluvus | Kaukaasia |
| Morfoloogia | Epiteelilaadsed |
| Kasvuomadused | Kinnipeetav |
Regulatiivsed andmed
| Tsitaat | U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1 (Cytioni katalooginumber 300664) |
|---|---|
| Bioturvalisuse tase | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| Hoiustaja | Ellenbergi labor (EMBL) |
| GMOde staatus | GMO-S1: See inimese osteosarkoomi rakuliin (U2OS-CRISPR-SNAPf-SEH1) sisaldab CRISPR-vahendatud SNAPf-SEH1-fusiooni, mis võimaldab SEH1-nukleoporiini selektiivset märgistamist. Modifikatsioon on stabiilselt olemas. See klassifikatsioon kehtib ainult Saksamaal ja võib mujal erineda. |
Biomolekulaarsed andmed
| Valgu ekspressioon | SEH1, SNAPf-tag |
|---|
Töötlemine
| Kultuurikeskkond | McCoys 5a, w: 3,0 g/L glükoos, w: stabiilne glutamiin, w: 2,0 mM naatriumpüruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820200a) |
|---|---|
| Täiendused | Täiendada söötme 10% FBS, 3,0 g/L glükoosi, stabiilse glutamiini, 2,0 mM naatriumpüruvaadi, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAAga |
| Dissotsiatsioonireaktiiv | Accutase |
| Subkultuuride kasvatamine | Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda. |
| Külmutage keskkond | Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi. |
| Rakkude sulatamine ja kultiveerimine |
|
| Inkubatsiooni atmosfäär | 37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär. |
| Kolvi katmine | Optimaalse kinnitumise ja elujõulisuse tagamiseks pärast sulatamist soovitame kasutada kollageeniga kaetud koldeid või plaate. |
| Külmutamise protseduur | Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi. |
| Veotingimused | Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi. |
| Ladustamistingimused | Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist. |
Kvaliteedikontroll / Geneetiline profiil / HLA
| Steriilsus | Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil. Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt. |
|---|