U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP rakud

800,00 €*

Tooted saadetakse külmutatuna kuivjääs krüotubides. Iga krüotub sisaldab tavaliselt 3 × 10 ⁶ rakku adhesiivsetele liinidele või 5 × 10⁶ rakku suspensiooniliinidele (üksikasjad on esitatud partii CoA-s).

Hinnad ilma maksudeta pluss saatmiskulud

cryovial

Toote number: 300444

Ohutuskaart

Toote leht

Analüüsisertifikaat (CoA)

Kolmanda osapoole leping

Kirjeldus	U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP on geneetiliselt muundatud osteosarkoomi rakuliin, mis on saadud inimese U-2 OS vanemrakuliinist. See rakuliin on muudetud CRISPR/Cas9-vahendatud genoomi redigeerimise abil, et lisada SNAP-märgis NUP96 geenile, mis võimaldab tuumapoorikompleksi dünaamika visualiseerimist ja uurimist. Tuumapoorikompleksid (NPC) on tuumasütoplasma transpordi reguleerimisel üliolulised ja NUP96 on NPC oluline komponent, millel on keskne roll selle struktuurilises terviklikkuses ja funktsioonis. U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP kloonis nr 33 võimaldab SNAP-tähe integreerimine NUP96 lokaali spetsiifilist ja kovalentset kinnitamist fluorestseeruvate substraatide või muude keemiliste proovide jaoks, mida saab kasutada elusraku kujutamiseks ja muude biokeemiliste analüüside tegemiseks. See omadus muudab selle hindamatuks vahendiks nukleotsütoplasma transpordi molekulaarse dünaamika uurimiseks, NPCga seotud patoloogiate mõistmiseks ja NPC funktsiooni mõjutavate terapeutiliste ühendite skriininguks. Rakuliin säilitab ka vanemliini U-2 OS omadused, mille hulka kuuluvad kõrge geneetiline stabiilsus ja lihtne kasvatamine, mistõttu sobib see rakuliin kõrge läbilaskevõimega skriininguks ja ulatuslikeks uuringuteks rakubioloogias. Tänu modifikatsiooni spetsiifilisusele NUP96 geenis pakub U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP kloon nr 33 ainulaadset mudelit NPC komponentide üksikasjalikuks uurimiseks raku toimimise ja talitlushäirete kontekstis. Teadlased saavad kasutada SNAP-märgise süsteemi NUP96 selektiivseks ja kiireks märgistamiseks, hõlbustades NPC dünaamika visualiseerimist reaalajas füsioloogilistes ja patoloogilistes tingimustes. See konkreetne kloon võib olla tugev platvorm nii alusuuringute kui ka rakenduslike biomeditsiiniliste uuringute jaoks, aidates oluliselt kaasa rakubioloogia, geneetika ja onkoloogia valdkondadele.
Organism	Inimene
Kude	Bone
Haigus	Osteosarkoom

Vanus	15 aastat
Sugu	Naised
Etniline kuuluvus	Kaukaasia
Kasvuomadused	Kinnipeetav

Tsitaat	U-2 OS-CRISPR-NUP96-SNAP (Cytioni katalooginumber 300444)
Bioturvalisuse tase	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_B7FL
Hoiustaja	Ellenbergi labor (EMBL)
GMOde staatus	GMO-S1: See inimese osteosarkoomi rakuliin (U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP, kloon 33) sisaldab CRISPR-töödeldud NUP96-SNAP-fusiooni, mis hõlbustab tuumapooride SNAP-tag'i keemilist märgistamist. Modifikatsioon on stabiilselt integreeritud. See klassifikatsioon kehtib ainult Saksamaal ja võib mujal erineda.

Valgu ekspressioon	NUP96-SNAP (tuumapoorikompleksi valk 96, SNAP-tag)

Kultuurikeskkond	McCoys 5a, w: 3,0 g/L glükoos, w: stabiilne glutamiin, w: 2,0 mM naatriumpüruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820200a)
Täiendused	Täiendada söötme 10% FBS, 3,0 g/L glükoosi, stabiilse glutamiini, 2,0 mM naatriumpüruvaadi, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAAga
Dissotsiatsioonireaktiiv	Accutase
Subkultuuride kasvatamine	Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvi tihedus	1 x 10⁴ rakku/cm²
Vedeliku uuendamine	2 kuni 3 korda nädalas
Külmutage keskkond	Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Rakkude sulatamine ja kultiveerimine	Veenduge, et viaal jääb tarnimisel sügavkülmutatud, sest rakud transporditakse kuiva jääga, et säilitada optimaalne temperatuur transpordi ajal. Pärast kättesaamist säilitage krüoviaal kas kohe temperatuuril alla -150 °C, et tagada rakkude terviklikkuse säilimine, või jätkake sammuga 3, kui on vaja koheselt kultiveerida. Kohese kultiveerimise korral sulatage viaali kiiresti, kastes selle 37 °C veevanni puhta vee ja antimikroobse ainega, segades seda õrnalt 40-60 sekundit, kuni alles jääb väike jääklomp. Tehke kõik järgmised toimingud steriilsetes tingimustes vooluhoodis, desinfitseerides krüoviaal enne avamist 70% etanooliga. Avage desinfitseeritud viaali ettevaatlikult ja viige rakususpensioon ettevaatlikult segades 15 ml tsentrifuugitorusse, mis sisaldab 8 ml toatemperatuuril olevat kasvukeskkonda. Rakkude eraldamiseks tsentrifuugige segu 300 x g juures 3 minutit ja visake ülejäänud külmutusvedelikku sisaldav supernatant ettevaatlikult ära. Resuspendeerige rakupellet ettevaatlikult 10 ml värskes kasvukeskkonnas. Adhereeruvate rakkude puhul jagage suspensioon kahe T25 kultuurkolvi vahel; suspensioonikultuuride puhul kandke kogu söötmekeskkond ühte T25 kolbi, et soodustada rakkude tõhusat koostoimet ja kasvu. Järgige kehtestatud subkultuuriprotokolle rakuliini jätkuvaks kasvuks ja säilitamiseks, tagades usaldusväärsed katsetulemused.
Inkubatsiooni atmosfäär	37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.
Kolvi katmine	Optimaalse kinnitumise ja elujõulisuse tagamiseks pärast sulatamist soovitame kasutada kollageeniga kaetud koldeid või plaate.
Külmutamise protseduur	Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.
Veotingimused	Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.
Ladustamistingimused	Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Steriilsus	Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil. Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Partii number	Sertifikaadi tüüp	Kuupäev	Kataloogi number
300444-040724	Analüüsitunnistus	23. May. 2025	300444

Pange tähele, et see rakuliin ei ole saadaval Cytioni standardse MTA raames, kuna selleks on vaja kolmanda osapoole lepingut ja/või selle üle tuleb pidada läbirääkimisi algse litsentsiandjaga.

U2OS-CRISPR-NUP96-SNAP rakud

Üldine teave

Omadused

Regulatiivsed andmed

Biomolekulaarsed andmed

Töötlemine

Kvaliteedikontroll / Geneetiline profiil / HLA

Analüüsisertifikaat (CoA)

Kolmanda osapoole leping