U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 rakud

800,00 €*

Tooted saadetakse külmutatuna kuivjääs krüotubides. Iga krüotub sisaldab tavaliselt 3 × 10 ⁶ rakku adhesiivsetele liinidele või 5 × 10⁶ rakku suspensiooniliinidele (üksikasjad on esitatud partii CoA-s).

Hinnad ilma maksudeta pluss saatmiskulud

cryovial

Toote number: 300666

Ohutuskaart

Toote leht

Analüüsisertifikaat (CoA)

Kolmanda osapoole leping

Kirjeldus	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 on geneetiliselt muundatud inimese osteosarkoomi rakuliin, mis on saadud vanemlikust U2OS-taustast, kus endogeenne NUP133-lokus on muundatud CRISPR/Cas9-vahendatud genoomi redigeerimise abil, et kodeerida C-terminaalne SNAPf-märgis. NUP133 on Y-kompleksi (NUP107-160 kompleks) keskne komponent, struktuuriline alakompleks, mis on oluline tuumapooride kompleksi (NPC) kokkupanekuks ja säilitamiseks. SNAPf kodeeriva järjestuse sisseviimisega endogeensesse lokusesse ekspresseeritakse fusioonvalku loomuliku regulatsiooni kontrolli all, säilitades füsioloogilised ekspressioonitasemed ja subtsellulaarse lokaliseerumise. SNAPf-märgis on SNAP-märgise kiire märgistamise variant, mis on insenereeritud O6-alküülguanin-DNA alküültransferaas, mis reageerib kovalentselt bentsüülguaniniga konjugeeritud substraatidega. See võimaldab Nup133 väga spetsiifilist ja mitmekülgset fluorestsentsmärgistamist elusates või fikseeritud rakkudes, kasutades rakkudele läbilaskvaid või läbilaskmatuid SNAP-substraate. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 rakkudes lokaliseerub fusioonvalk tuumaümbrise punktide mustrina, mis on iseloomulik tuumapooride kompleksidele. Kuna märgistamine toimub endogeenses lokuses, on NPC stoikiomeetria ja arhitektuur minimaalselt häiritud, mistõttu see mudel sobib kvantitatiivseks superresolutsioonilise mikroskoopia, ühe molekuli jälgimise ja NPC kokkupaneku ja käibe kineetilise analüüsi jaoks. See rakuliin pakub tugevat platvormi tuuma transpordi, tuuma-tsütoplasma liikumise dünaamika, NPC biogeneesi interfase ja postmitotilise tuuma taaskoostumise ning Y-kompleksi struktuurilise korralduse uurimiseks pooride raamistikus. U2OS taust pakub siledat morfoloogiat ja suuri tuumi, mis hõlbustab kõrge resolutsiooniga pildistamist. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 rakud sobivad eriti hästi impulss-jälgimise märgistamise eksperimentideks, korrelatiivseks valgus- ja elektronmikroskoopiasseks ning mitmevärviliseks pildistamiseks kombinatsioonis täiendavate endogeenselt märgistatud nukleoporiinide või transportfaktoritega.
Organism	Inimene
Kude	Bone
Haigus	Osteosarkoom

Vanus	15 aastat
Sugu	Naised
Etniline kuuluvus	Kaukaasia
Morfoloogia	Epiteelilaadsed
Kasvuomadused	Kinnipeetav

Tsitaat	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 (Cytioni katalooginumber 300666)
Bioturvalisuse tase	1
NCBI_TaxID	9606
Hoiustaja	Ellenbergi labor (EMBL)
GMOde staatus	GMO-S1: See inimese osteosarkoomi rakuliin (U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133) sisaldab CRISPR-ga sissetoodud SNAPf-Nup133-fusiooni, mis võimaldab Nup133-nukleoporiini fluorestseerivat märgistamist. Insert on stabiilselt olemas. See klassifikatsioon kehtib ainult Saksamaal ja võib mujal erineda.

Valgu ekspressioon	Nup133, SNAPf-tag

Kultuurikeskkond	McCoys 5a, w: 3,0 g/L glükoos, w: stabiilne glutamiin, w: 2,0 mM naatriumpüruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820200a)
Täiendused	Täiendada söötme 10% FBS, 3,0 g/L glükoosi, stabiilse glutamiini, 2,0 mM naatriumpüruvaadi, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAAga
Dissotsiatsioonireaktiiv	Accutase
Subkultuuride kasvatamine	Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külmutage keskkond	Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Rakkude sulatamine ja kultiveerimine	Veenduge, et viaal jääb tarnimisel sügavkülmutatud, sest rakud transporditakse kuiva jääga, et säilitada optimaalne temperatuur transpordi ajal. Pärast kättesaamist säilitage krüoviaal kas kohe temperatuuril alla -150 °C, et tagada rakkude terviklikkuse säilimine, või jätkake sammuga 3, kui on vaja koheselt kultiveerida. Kohese kultiveerimise korral sulatage viaali kiiresti, kastes selle 37 °C veevanni puhta vee ja antimikroobse ainega, segades seda õrnalt 40-60 sekundit, kuni alles jääb väike jääklomp. Tehke kõik järgmised toimingud steriilsetes tingimustes vooluhoodis, desinfitseerides krüoviaal enne avamist 70% etanooliga. Avage desinfitseeritud viaali ettevaatlikult ja viige rakususpensioon ettevaatlikult segades 15 ml tsentrifuugitorusse, mis sisaldab 8 ml toatemperatuuril olevat kasvukeskkonda. Rakkude eraldamiseks tsentrifuugige segu 300 x g juures 3 minutit ja visake ülejäänud külmutusvedelikku sisaldav supernatant ettevaatlikult ära. Resuspendeerige rakupellet ettevaatlikult 10 ml värskes kasvukeskkonnas. Adhereeruvate rakkude puhul jagage suspensioon kahe T25 kultuurkolvi vahel; suspensioonikultuuride puhul kandke kogu söötmekeskkond ühte T25 kolbi, et soodustada rakkude tõhusat koostoimet ja kasvu. Järgige kehtestatud subkultuuriprotokolle rakuliini jätkuvaks kasvuks ja säilitamiseks, tagades usaldusväärsed katsetulemused.
Inkubatsiooni atmosfäär	37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.
Kolvi katmine	Optimaalse kinnitumise ja elujõulisuse tagamiseks pärast sulatamist soovitame kasutada kollageeniga kaetud koldeid või plaate.
Külmutamise protseduur	Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.
Veotingimused	Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.
Ladustamistingimused	Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Steriilsus	Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil. Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Partii number	Sertifikaadi tüüp	Kuupäev	Kataloogi number
300666-101225	Analüüsitunnistus	22. Jan. 2026	300666

Pange tähele, et see rakuliin ei ole saadaval Cytioni standardse MTA raames, kuna selleks on vaja kolmanda osapoole lepingut ja/või selle üle tuleb pidada läbirääkimisi algse litsentsiandjaga.

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 rakud

Üldine teave

Omadused

Regulatiivsed andmed

Biomolekulaarsed andmed

Töötlemine

Kvaliteedikontroll / Geneetiline profiil / HLA

Analüüsisertifikaat (CoA)

Kolmanda osapoole leping