U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 rakud

800,00 €*

Tooted saadetakse külmutatuna kuivjääs krüotubides. Iga krüotub sisaldab tavaliselt 3 × 10 ⁶ rakku adhesiivsetele liinidele või 5 × 10⁶ rakku suspensiooniliinidele (üksikasjad on esitatud partii CoA-s).

Hinnad ilma maksudeta pluss saatmiskulud

cryovial

Toote number: 300663

Ohutuskaart

Toote leht

Kolmanda osapoole leping

Kirjeldus	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 on genoomi redigeeritud inimese osteosarkoomi rakuliin, mis on saadud U2OS rakkudest, milles endogeenne RANBP2 (tuntud ka kui NUP358) lokus on modifitseeritud CRISPR/Cas9 abil, et kodeerida SNAPf-märgistust raami sees koos loodusliku valgu. Nup358/RanBP2 on suur nukleoporiin, mis asub tuumapoorikompleksi (NPC) tsütoplasmaatilistes filamentides ja mängib olulist rolli nukleotsütoplasmaatilises transportis, SUMOülatsioonis ja mitootilistes protsessides. Endogeenne märgistamine tagab, et SNAPf-Nup358 ekspresseerub füsioloogilise promootori kontrolli all, säilitades loomuliku ekspressioonitaseme ja minimeerides üleespressioonisüsteemidega seotud artefakte. SNAPf-märgis on SNAP-märgise kiire märgistamise variant, mis seondub kovalentselt bentsüülguaniiniga konjugeeritud substraatidega, võimaldades Nup358 selektiivset ja stabiilset fluorestsentsmärgistamist elusates või fikseeritud rakkudes. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 rakkudes lokaliseerub fusioonvalk tuumaümbrise punktilise jaotumisega, mis on iseloomulik tsütoplasmaatilistele NPC filamentidele. See konfiguratsioon toetab kõrge resolutsiooniga fluorestsentskujutist, superresolutsioonilist mikroskoopiat, impulss-jälgimise märgistamist ja ühe molekuli jälgimise meetodeid NPC arhitektuuri ja dünaamika uurimiseks. U2OS rakkude lame morfoloogia ja suured tuumad hõlbustavad veelgi tuumaümbrise struktuuride kvantitatiivset kujutamist. See mudel võimaldab uurida Nup358-spetsiifilisi rolle CRM1/eksportiinist sõltuvas tuuma ekspordis, Ran GTPase tsükli regulatsioonis ja tsütoplasmaatiliste transpordialuste ruumilises korralduses. Arvestades Nup358 osalemist mitootilise varda kokkupanekus ja kinetokooride funktsioonis, sobib rakuliin ka mitootilise tsükli sõltuva nukleoporiinide ümberjaotumise ja NPC lahtimonteerimise/taasmonteerimise uurimiseks mitootilise tsükli ajal. U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 pakub füsioloogiliselt asjakohast platvormi inimrakkude tuumapoorikompleksi tsütoplasmaatilise pinna struktuuriliste ja funktsionaalsete aspektide analüüsimiseks.
Organism	Inimene
Kude	Bone
Haigus	Osteosarkoom

Vanus	15 aastat
Sugu	Naised
Etniline kuuluvus	Kaukaasia
Morfoloogia	Epiteelilaadsed
Kasvuomadused	Kinnipeetav

Tsitaat	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 (Cytioni katalooginumber 300663)
Bioturvalisuse tase	1
NCBI_TaxID	9606
Hoiustaja	Ellenbergi labor (EMBL)
GMOde staatus	GMO-S1: See inimese osteosarkoomi rakuliin (U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2) sisaldab CRISPR-i abil loodud SNAPf-Nup358/RanBP2 fusiooni, mis võimaldab tuumapooride tsütoplasmafibrillide täpset märgistamist. Modifikatsioon on stabiilselt integreeritud. See klassifikatsioon kehtib ainult Saksamaal ja võib mujal erineda.

Valgu ekspressioon	Nup358/RanBP2, SNAPf-tag

Kultuurikeskkond	McCoys 5a, w: 3,0 g/L glükoos, w: stabiilne glutamiin, w: 2,0 mM naatriumpüruvaat, w: 2,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820200a)
Täiendused	Täiendada söötme 10% FBS, 3,0 g/L glükoosi, stabiilse glutamiini, 2,0 mM naatriumpüruvaadi, 2,2 g/L NaHCO3, 1% NEAAga
Dissotsiatsioonireaktiiv	Accutase
Subkultuuride kasvatamine	Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külmutage keskkond	Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Rakkude sulatamine ja kultiveerimine	Veenduge, et viaal jääb tarnimisel sügavkülmutatud, sest rakud transporditakse kuiva jääga, et säilitada optimaalne temperatuur transpordi ajal. Pärast kättesaamist säilitage krüoviaal kas kohe temperatuuril alla -150 °C, et tagada rakkude terviklikkuse säilimine, või jätkake sammuga 3, kui on vaja koheselt kultiveerida. Kohese kultiveerimise korral sulatage viaali kiiresti, kastes selle 37 °C veevanni puhta vee ja antimikroobse ainega, segades seda õrnalt 40-60 sekundit, kuni alles jääb väike jääklomp. Tehke kõik järgmised toimingud steriilsetes tingimustes vooluhoodis, desinfitseerides krüoviaal enne avamist 70% etanooliga. Avage desinfitseeritud viaali ettevaatlikult ja viige rakususpensioon ettevaatlikult segades 15 ml tsentrifuugitorusse, mis sisaldab 8 ml toatemperatuuril olevat kasvukeskkonda. Rakkude eraldamiseks tsentrifuugige segu 300 x g juures 3 minutit ja visake ülejäänud külmutusvedelikku sisaldav supernatant ettevaatlikult ära. Resuspendeerige rakupellet ettevaatlikult 10 ml värskes kasvukeskkonnas. Adhereeruvate rakkude puhul jagage suspensioon kahe T25 kultuurkolvi vahel; suspensioonikultuuride puhul kandke kogu söötmekeskkond ühte T25 kolbi, et soodustada rakkude tõhusat koostoimet ja kasvu. Järgige kehtestatud subkultuuriprotokolle rakuliini jätkuvaks kasvuks ja säilitamiseks, tagades usaldusväärsed katsetulemused.
Inkubatsiooni atmosfäär	37°C, 5%_CO2, niisutatud atmosfäär.
Kolvi katmine	Optimaalse kinnitumise ja elujõulisuse tagamiseks pärast sulatamist soovitame kasutada kollageeniga kaetud koldeid või plaate.
Külmutamise protseduur	Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.
Veotingimused	Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.
Ladustamistingimused	Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Steriilsus	Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil. Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Pange tähele, et see rakuliin ei ole saadaval Cytioni standardse MTA raames, kuna selleks on vaja kolmanda osapoole lepingut ja/või selle üle tuleb pidada läbirääkimisi algse litsentsiandjaga.

U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup358/RanBP2 rakud

Üldine teave

Omadused

Regulatiivsed andmed

Biomolekulaarsed andmed

Töötlemine

Kvaliteedikontroll / Geneetiline profiil / HLA

Kolmanda osapoole leping