NCH690-Zellen
















Allgemeine Informationen
Beschreibung | Die NCH640-Zelllinie ist ein stammähnliches Glioblastom-Zellmodell, das in der Forschung eingesetzt wird, um die Mechanismen der Tumorresistenz, des zellulären Überlebens unter Stress und der therapeutischen Reaktionen zu untersuchen. Das Glioblastom, eine der aggressivsten Formen von Hirntumoren, ist aufgrund seiner Therapieresistenz und seiner Anpassung an eine feindliche Mikroumgebung schwer zu behandeln. NCH640 wird in speziellen Medien wie Neurobasal A mit Zusätzen wie B27 kultiviert, und sein Wachstum wird durch wichtige Wachstumsfaktoren wie EGF und FGF-2 unterstützt. Sie wird häufig zusammen mit anderen Gliom-Stammzellmodellen wie NCH690 und NCH644 verwendet, um diese biologischen Phänomene zu untersuchen. Die Forschung zu NCH640 konzentriert sich stark auf seine Resistenzmechanismen, insbesondere unter hypoxischen Bedingungen. Gliomzellen wie NCH640 sind in hohem Maße auf metabolische Anpassungen angewiesen, einschließlich einer veränderten Regulierung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS). Studien haben gezeigt, dass eine gezielte Beeinflussung von Stoffwechselwegen wie der integrierten Stressreaktion (ISR) in NCH640 und verwandten Zelllinien deren Empfindlichkeit gegenüber Therapien wie Temozolomid, das bei der Behandlung von Glioblastomen häufig eingesetzt wird, verbessern kann. Diese Erkenntnisse sind wichtig für die Entwicklung neuer Strategien zur Überwindung der inhärenten Resistenz von stammähnlichen Gliomzellen gegen Standardtherapien. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Gehirn |
Krankheit | Glioblastom |
Merkmale
Alter | 78 Jahre |
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Geschlecht | Weiblich |
Ethnizität | Kaukasisch |
Wachstumseigenschaften | Sphäroidkultur, teilweise haftend |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | NCH690 (Cytion-Katalognummer 300120) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Hinterleger | C. Herold-Mende |
Expression / Mutation
Tumorigene | Ja |
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Handhabung
Nährboden | DMEM:Ham's F12, w: 3,1 g/L Glucose, w: 1,6 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 1,0 mM Natriumpyruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820400a) |
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Mittlere Supplemente | Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS, 5 mg/L Heparin, 20 ng/mL bFGF, 20 Mikrogramm/L EGF, 5 mg/L Insulin, 100 mg/L Transferrin, 5,2 Mikrogramm/L Na-Selenit, 6,3 Mikrogramm/L Progesteron, 161,1 Mikrogramm/L Putrescin, 50 mg/L Hydrocortinson |
Subkultivierung | Für die Subkultivierung von Sphäroidkulturen werden die Sphäroide zunächst mechanisch durch 5- bis 10-maliges Auf- und Abpipettieren mit einer Eppendorf-Pipette mit 1000-µl-Filterspitzen dissoziiert. Danach zentrifugieren Sie die Mischung bei 300 g für 5 Minuten bei Raumtemperatur, um die Zellen zu pelletieren. Verwerfen Sie den Überstand und resuspendieren Sie das Zellpellet in frischem Kulturmedium. Schließlich überführen Sie die resuspendierten Zellen in neue Kulturgefäße, um die weitere Sphäroidbildung zu fördern. Diese Vorgehensweise gewährleistet einen effizienten Abbau der Sphäroide und bereitet sie auf ein weiteres Wachstum in einer neuen Umgebung vor |
Splitverhältnis | Je nach Wachstumsrate wird ein Verhältnis von 1:2 bis 1:5 empfohlen |
Aussaatdichte | 1 x 10^5 Zellen/ml |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Wiederherstellung durch Einfrieren | Lassen Sie die Zellen nach dem Auftauen mindestens 24 bis 48 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen. |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
CSF1PO: 10,11
D13S317: 10,13
D16S539: 9,12
D5S818: 11,12
D7S820: 8,9
TH01: 9,9.3
TPOX: 8,11
vWA: 18
D3S1358: 14,17
D21S11: 29,32
D18S51: 17
Penta E: 12,2
Penta D: 10,12
D8S1179: 11,14
FGA: 22,24
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HLA-Allele |
A*: '03:01:01, '68:01:02
B*: '35:01:01, '47:01:01
C*: '04:01:01, '06:02:01
DRB1*: '07:01:01, '16:02:01
DQA1*: '01:02:02, '02:01:01
DQB1*: '02:02:01, '05:02:01
DPB1*: '04:01:01G, '04:02:01G
E: '01:01:01
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Erforderliche Produkte
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.
Diese einzigartige Formulierung kombiniert Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) und Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in einem präzisen 1:1-Verhältnis. Durch den Zusatz von L-Glutamin wird die Zusammensetzung weiter verbessert.
DMEM, das von Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM) abgeleitet ist, bietet im Vergleich zu seinem Vorgänger eine erhöhte Konzentration an Aminosäuren und Vitaminen. Im Gegensatz dazu basiert Ham's F-12 auf dem Medium Ham's F-10 und bietet eine ergänzende Reihe von essentiellen Komponenten.
Um ein optimales Zellwachstum zu unterstützen, ist es üblich, DMEM:Ham's F12 mit FBS in einer typischen Konzentration von 5-10 % zu ergänzen. Dieser Zusatz ist notwendig, da dem Medium Wachstumshormone, Lipide und Proteine fehlen, die für die zelluläre Entwicklung entscheidend sind.
DMEM:Ham's F12 enthält ein pH-Puffersystem und wird häufig mit Phenolrot, einem pH-Indikator, ergänzt. In DMEM:Ham's F12 kultivierte Zellen oder andere Medien, die das Bicarbonat-Puffersystem verwenden, benötigen eine kontrollierte CO2-Umgebung von 5-10 %, um einen angemessenen pH-Wert aufrechtzuerhalten. Phenolrot ermöglicht die Überwachung von pH-Änderungen von 6,2 (gelb) bis 8,2 (rot).
Qualitätskontrolle
pH = 7,2 +/
- 0,02 bei 20-25°C.
Jede Charge wurde auf Sterilität und Abwesenheit von Mykoplasmen und Bakterien getestet.
Wartung
Kühl aufbewahren bei +2°C bis +8°C im Dunkeln. Sowohl das Einfrieren als auch das Erwärmen auf bis zu +37°C mindern die Qualität des Produkts.
Erwärmen Sie das Medium nicht auf mehr als 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierbaren Wärmequellen (z.B. Mikrowellengeräte).
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, nehmen Sie diese Menge aus der Flasche und erwärmen Sie sie bei Raumtemperatur.
Die Haltbarkeit eines jeden Mediums mit Ausnahme des Basismediums beträgt 8 Wochen ab dem Herstellungsdatum.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Calciumchlorid x 2H2O
154,45
Eisen(III)-nitrat x 9H2O
0,05
Eisen(II)-sulfat x 7H2O
0,42
Kaliumchlorid
311,83
Kupfer(II)-sulfat x 5H2O
0.001
Magnesiumchlorid, wasserfrei
28,57
Magnesiumsulfat
48,85
Natriumchlorid
6,999.50
Natriumdihydrogenphosphat, wasserfrei
54,35
di-Natriumhydrogenphosphat
70,98
Zinksulfat x 7H2O
0,43
Sonstige Bestandteile
D(+)-Glucose wasserfrei
3,151.00
HEPES
3,574.50
Hypoxanthin
2,04
Linolsäure
0,04
DL-68-Liponsäure
0.103
Natriumpyruvat
110,00
Phenolrot
8,10
Putrescin x 2HCl
0.081
Thymidin
0,36
Aminosäuren
L-Alanin
4,45
L-Arginin x HCl
147,35
L-Asparagin x H2O
7,50
L-Asparaginsäure
6,65
L-Cystin x 2HCl
31,29
L-Cystein x HCl x H2O
17,56
L-Glutamin
365,00
L-Glutaminsäure
7,35
Glycin
18,75
L-Histidin x HCl x H2O
31,48
L-Isoleucin
54,37
L-Leucin
58,96
L-Lysin x HCl
91,37
L-Methionin
17,24
L-Phenylalanin
35,48
L-Prolin
17,27
L-Serin
26,25
L-Threonin
53,55
L-Tryptophan
9,02
L-Tyrosin x 2Na x 2H2O
55,81
L-Valin
52,66
Vitamine
D-(+)-Biotin
0,004
D-Calciumpantothenat
2,12
Cholinchlorid
8,98
Folsäure
2,66
myo-Inositol
12,51
Nicotinamid
2,02
Pyridoxin x HCl
2,03
Riboflavin
0,22
Thiamin x HCl
2,17
Vitamin B12
0,68
NaHCO3
1,200.00
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine vielseitige Pufferlösung, die in vielen biologischen und chemischen Anwendungen sowie bei der Gewebeverarbeitung eingesetzt wird. Unsere PBS-Lösung ist mit hochwertigen Inhaltsstoffen formuliert, um einen konstanten pH-Wert während der Experimente zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind auf die des menschlichen Körpers abgestimmt, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen nicht toxisch ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 und 2 mM KH2PO4. Wir haben diese Zusammensetzung auf der Grundlage von CSHL-Protokollen und der Molekularen Klonierung nach Sambrook gewählt, die in der Forschungsgemeinschaft etablierte Standards sind.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich perfekt für die Verdünnung von Substanzen und das Spülen von Zellbehältern. Unsere PBS-Lösung mit EDTA kann auch zum Lösen von angehefteten und verklumpten Zellen verwendet werden. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass zweiwertige Metalle wie Zink nicht zu PBS hinzugefügt werden dürfen, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Darüber hinaus hat sich unsere PBS-Lösung als akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, wie z. B. SARS-CoV-2, erwiesen.
Lagerung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden und ist somit leicht zu verwenden und zugänglich.
Zusammenfassend
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass unsere PBS-Lösung bei vielen biologischen und chemischen Experimenten ein wesentlicher Bestandteil ist. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für zahlreiche Anwendungen, von der Zellkultur bis zum Virustransportmedium. Durch die Wahl unserer hochwertigen PBS-Lösung können Forscher ihre Experimente optimieren und genaue und zuverlässige Ergebnisse erzielen.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Kaliumchlorid
200,00
Kaliumdihydrogenphosphat
200,00
Natriumchlorid
8,000.00
di-Natriumhydrogenphosphat wasserfrei
1,150.00