HaCaT-Zellen
Wesentliche Fakten über Hacat-Zellen
Beschreibung | HaCaT-Zellen sind ein zentrales Modell in der dermatologischen Forschung und bieten Einblicke in die komplexen Mechanismen der Hautbiologie und -pathologie. Die spontan immortalisierte HaCaT-Zelllinie wird von adulten menschlichen Epidermiszellen abgeleitet und behält die Fähigkeit, sich zu vermehren und zu differenzieren, ähnlich wie basale Keratinozyten in vivo. HaCaT-Zellen dienen als robuste Plattform für die Untersuchung des epidermalen Differenzierungsprozesses und die Untersuchung der epidermalen Differenzierungsmarker, die für die Aufrechterhaltung der Hautintegrität wesentlich sind. Die Anfälligkeit von HaCaT-Zellen für Apoptose und ihre Empfindlichkeit gegenüber Apoptose-auslösenden Substanzen werden eingehend untersucht, insbesondere im Zusammenhang mit zytotoxischen Substanzen wie RIPL. Forscher bewerten die Zytotoxizität dieser Wirkstoffe und das Ausmaß der Zytotoxizität anhand von HaCaT-Zellen und nutzen Techniken wie die Fluoreszenzmikroskopie, um zelluläre Veränderungen sichtbar zu machen. Forscher haben HaCaT-Zellen genutzt, um die Auswirkungen verschiedener Wirkstoffe, einschließlich antimikrobieller Substrate, und deren Einfluss auf die Lebensfähigkeit der Zellen zu untersuchen. Diese Zellen sind ein hervorragendes Substrat für die Prüfung antimikrobieller Biomaterialien und antimikrobieller Atelokollagensubstrate, die für die Hautreparatur und medizinische Anwendungen von entscheidender Bedeutung sind. Die HaCaT-Epidermallinie spielt auch eine entscheidende Rolle bei der Untersuchung von zellulärer Seneszenz, Zytokinen und Genexpressionsprofilen im Zusammenhang mit Alterung und chronischen Krankheiten. Die Transkriptionsprofile von HaCaT-Zellen, einschließlich der Rolle von κB und microRNAs, geben Aufschluss über die Regulationsmechanismen auf molekularer Ebene. Die HaCaT-Keratinozyten-Linie bietet mit ihren Eigenschaften als epidermale Keratinozyten ein praktikables System für die Untersuchung des komplizierten Zusammenspiels zwischen epidermalen Zellen und dem Immunsystem, insbesondere der Rolle von Keratinozyten bei Krankheiten. Sie ermöglichen die Erforschung epigenetischer Veränderungen und ihres Einflusses auf die Differenzierung von Keratinozyten, einschließlich der Bildung der verhornten Hülle, einem Schlüsselmerkmal für die Barrierefunktion der Haut. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass HaCaT-Zellen ein unverzichtbares Modell in der dermatologischen Forschung sind, da sie aufgrund ihrer Ähnlichkeit mit basalen Keratinozyten und ihrer Fähigkeit, Zellwachstum und -differenzierung zu erfahren, ein tieferes Verständnis der Hautbiologie und -pathologie ermöglichen. Ihre Anwendung reicht von der Untersuchung der epidermalen Differenzierung und der antimikrobiellen Wirkung bis hin zur Erforschung zellulärer Reaktionen wie der Apoptose, was sie zu einem Eckpfeiler in der Zellbiologie und biomedizinischen Forschung macht. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Haut |
Einzelheiten
Alter | 62 Jahre |
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Geschlecht | Männlich |
Ethnizität | Kaukasisch |
Zelltyp | Keratinozyten mit einem Durchmesser von 20-25 Mikrometern. |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Dokumentation
Zitat | HaCaT (Cytion Katalognummer 300493) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Hinterleger | DKFZ, Heidelberg |
Genetik der HaCaT-Keratinozyten-Zelllinie
Tumorigene | Nein |
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Karyotyp | Aneuploid (hypotetraploid) |
Umgang mit der Hacat-Zelllinie
Nährboden | DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Die 1:1-Mischung aus EDTA (Bestand: 0,05 %) und Trypsin (Bestand: 0,1 %) muss jedes Mal vor dem Ablösen der Zellen mit PBS ohne Ca2+ und Mg2+ hergestellt werden, um eine physiologische Osmolarität zu erreichen. Gebrauchsfertige Mischungen von Trypsin/EDTA werden nicht empfohlen, da dies zu Zellklumpen führen kann. Als Alternative kann TrypLE Express (Life Technologies) anstelle von Trypsin/EDTA verwendet werden. Das Protokoll des Herstellers sollte befolgt werden. |
Verdopplungszeit | Die Verdopplungszeit von HaCaT-Zellen beträgt 28 Stunden. |
Subkultivierung |
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Splitverhältnis | Empfohlen wird ein Verhältnis von 1:5 bis 1:10 |
Aussaatdichte | 1 x 10^4 Zellen/cm^2 |
Medienwechsel | 2 Mal pro Woche |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) oder CM-ACF (Cytion Katalognummer 806100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Sicherung der Qualität
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
Amelogenin: x,x
CSF1PO: 09. Nov
D13S317: 10. Dez
D16S539: 09. Dez
D5S818: 12
D7S820: 09. Nov
TH01: 09. Mrz
TPOX: 11. Dez
vWA: 16.17
D3S1358: 16
D21S11: 28,30.2
D18S51: 12
Penta E: 7,12
Penta D: 11,13
D8S1179: 14
FGA: 24
D1S1656: 11,12
D2S1338: 17,25
D12S391: 18,23
D19S433: 13,14
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HLA-Allele |
A*: 01.01.1900 07:01
B*: 01.01.1900 16:01, 02.01.1900 03:01
C*: 03:04:01, 15:02:01
DRB1*: 04:01:01, 15:01:01
DQA1*: 01:02:01, 03:03:01
DQB1*: 03:01:01, 06:02:01
DPB1*: 03:01:01, 04:01:01
E: 01:03:01, 01:03:02
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Erforderliche Produkte
Was DMEM von anderen Medien unterscheidet, ist seine einzigartige Zusammensetzung. Es enthält eine beeindruckende Vervierfachung der Aminosäure
- und Vitaminkonzentration im Vergleich zum ursprünglichen Eagle's Minimal Essential Medium. Ursprünglich mit niedrigem Glukosegehalt (1 g/L) und Natriumpyruvat entwickelt, wird DMEM häufig mit höherem Glukosegehalt verwendet, entweder mit oder ohne Natriumpyruvat. DMEM enthält keine Proteine, Lipide oder Wachstumsfaktoren, so dass eine Ergänzung erforderlich ist. Um ein optimales Wachstum zu erreichen, wird DMEM häufig mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS) ergänzt. Außerdem enthält DMEM ein Natriumbicarbonat-Puffersystem (3,7 g/L), das zur Aufrechterhaltung eines physiologischen pH-Werts eine 5-10%ige CO2-Umgebung erfordert.
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) ist ein hoch angesehenes Medium für die Zell
- und Gewebekultur, das den Wachstumsanforderungen verschiedener adhärenter Zellphänotypen gerecht wird. Es übertrifft das ursprüngliche Eagle's Medium, das in den 1950er Jahren für die Kultivierung von Hühnerzellen entwickelt wurde, durch eine verbesserte ergänzende Formulierung, die als Dulbecco's Modifikation bekannt ist. Diese Modifikation erhöht den Gehalt an ausgewählten Aminosäuren und Vitaminen im Vergleich zum Originalmedium um das bis zu Vierfache.
Im Bereich der Zellkultur spielt DMEM eine wichtige Rolle als Wachstumsmedium für verschiedene Zelltypen, darunter Primärzellen, Stammzellen und transformierte Zellen. Forscher setzen die modifizierte Version von DMEM auch für eine Vielzahl von Forschungsanwendungen ein, z. B. in der Arzneimittelforschung, im Tissue Engineering und bei der Untersuchung von Zellsignalwegen.
Qualitätskontrolle
pH = 7,2 +/
- 0,02 bei 20-25°C.
Jede Charge wurde auf Sterilität und Abwesenheit von Mykoplasmen und Bakterien getestet.
Wartung
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Einfrieren und Erwärmen bis zu +37° C mindern die Qualität des Produkts.
Erwärmen Sie das Medium nicht auf mehr als 37° C und verwenden Sie keine unkontrollierbaren Wärmequellen (z.B. Mikrowellengeräte).
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, nehmen Sie diese Menge aus der Flasche und erwärmen Sie sie bei Raumtemperatur.
Die Haltbarkeit eines jeden Mediums mit Ausnahme des Basismediums beträgt 8 Wochen ab dem Herstellungsdatum.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Calciumchlorid, wasserfrei
200,00
Eisen(III)-nitrat x 9H2O
0,10
Magnesiumsulfat, wasserfrei
97,66
Kaliumchlorid
400,00
Natriumchlorid
6.400,00
Natriumdihydrogenphosphatwasserfrei
108,69
Sonstige Bestandteile
D(+)-Glucose wasserfrei
4.500,00
Natriumpyruvat
110,00
Rotes Phenol
15,00
NaHCO3
1.500,00
Aminosäuren
L-Arginin x HCl
84,00
L-Cystin x 2HCl
62,58
L-Glutamin
584,00
Glycin
30,00
L-Histidin x HCl xH2O
42,00
L-Isoleucin
104,80
L-Leucin
104,80
L-Lysin x HCl
146,20
L-Methionin
30,00
L-Phenylalanin
66,00
L-Serin
42,00
L-Threonin
95,20
L-Tryptophan
16,00
L-Tyrosin x Na
103,79
L-Valin
93,60
Vitamine
D-Calciumpantothenat
4,00
Cholinchlorid
4,00
Folsäure
4,00
myo-Inositol
7,00
Nicotinamid
4,00
Pyridoxin x HCl
4,00
Riboflavin
0,40
Thiamin x HCl
4,00
Zu den wichtigsten Eigenschaften von Freeze Medium CM-1 gehören:
Breite Kompatibilität: Wirksam für eine breite Palette von Zelltypen, einschließlich Primärzellen, Stammzellen und etablierte Zelllinien.
Hohe Lebensfähigkeit: Optimiert, um die Wiederherstellung und Lebensfähigkeit von Zellen nach dem Auftauen zu maximieren und zuverlässige Versuchsergebnisse zu gewährleisten.
Fertig zum Gebrauch: Praktisch vorbereitet und sterilisiert für die sofortige Anwendung, wodurch die Vorbereitungszeit und das Kontaminationsrisiko reduziert werden.
Erhöhte Stabilität: Bewahrt eine gleichbleibende Leistung unter Standard-Kryokonservierungsbedingungen und gewährleistet reproduzierbare Ergebnisse.
Lange Haltbarkeitsdauer: CM-1 ist ein serumhaltiges, gebrauchsfertiges Kryokonservierungsmedium, das bis zu einem Jahr im Kühlschrank aufbewahrt werden kann.
Verwendung von CM-1 zum Einfrieren von Zellen
Gehen Sie wie folgt vor, um CM-1 für das Einfrieren von adhärenten und Suspensionszellen zu verwenden
Bei adhärenten Zellen waschen Sie diese und lösen sie vom Kultursubstrat. Bei Suspensionszellen fahren Sie direkt mit dem nächsten Schritt fort.
Zählen Sie die Zellen, um sicherzustellen, dass sie die richtige Konzentration haben.
Zentrifugieren Sie die Zellen, um sie zu pelletieren, und resuspendieren Sie sie dann in CM-1-Gefriermedium.
Überführen Sie die resuspendierten Zellen in Kryogefäße.
Verwenden Sie eine langsame Gefriermethode, bevor Sie die Zellen in die Langzeitlagerung überführen
🥶 Methode
🔍 Beschreibung
💡 Schritte
❄️
Manuelles Einfrieren
Ein schrittweises Verfahren, bei dem die Temperatur schrittweise gesenkt wird, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu gewährleisten
1️⃣ Zellen in Gefriermedium für 40 Minuten bei 4°C einfrieren.
2️⃣ Für 24 Stunden in einen Gefrierschrank mit -80°C transferieren.
3️⃣ Zellen zur Langzeitkonservierung in flüssigem Stickstoff lagern
🧊
Verwendung von Mr. Frosty
Ein praktisches Gerät, das kontrollierte Einfrierraten ohne elektrische Energie ermöglicht
1️⃣ Bereiten Sie die Zellen in Kryoröhrchen mit Gefriermedium vor.
2️⃣ Kryovials in den Mr. Frosty-Behälter stellen.
3️⃣ Vor dem Umfüllen in flüssigen Stickstoff 24 Stunden lang bei -80 °C lagern
🧬
Controlled-Rate Freezer
Ein hochpräziser Gefrierschrank von Thermo Fisher oder anderen Herstellern, der für eine kontrollierte Temperaturabsenkung ausgelegt ist
1️⃣ Programmieren Sie das Gerät so, dass die Temperatur schrittweise gesenkt wird.
2️⃣ Legen Sie die vorbereiteten Zellen in den Gefrierschrank.
3️⃣ Nach dem Einfrierzyklus die Zellen in flüssigen Stickstoff überführen
Lagern Sie die Kryoflaschen bei Temperaturen unter -130°C oder in flüssigem Stickstoff zur langfristigen Aufbewahrung.
Inhaltsstoffe
Enthält FBS, DMSO, Glucose, Salze
Pufferkapazität: pH = 7,2 bis 7,6
Cytion's Freeze Medium CM-1 bietet eine zuverlässige Lösung für die Kryokonservierung, die eine hohe Lebensfähigkeit und Funktionalität der Zellen nach dem Auftauen für eine Vielzahl von Forschungsanwendungen gewährleistet.
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine vielseitige Pufferlösung, die in vielen biologischen und chemischen Anwendungen sowie bei der Gewebeverarbeitung eingesetzt wird. Unsere PBS-Lösung ist mit hochwertigen Inhaltsstoffen formuliert, um einen konstanten pH-Wert während der Experimente zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind auf die des menschlichen Körpers abgestimmt, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen nicht toxisch ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 und 2 mM KH2PO4. Wir haben diese Zusammensetzung auf der Grundlage von CSHL-Protokollen und der Molekularen Klonierung nach Sambrook gewählt, die in der Forschungsgemeinschaft etablierte Standards sind.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich perfekt für die Verdünnung von Substanzen und das Spülen von Zellbehältern. Unsere PBS-Lösung mit EDTA kann auch zum Lösen von angehefteten und verklumpten Zellen verwendet werden. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass zweiwertige Metalle wie Zink nicht zu PBS hinzugefügt werden dürfen, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Darüber hinaus hat sich unsere PBS-Lösung als akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, wie z. B. SARS-CoV-2, erwiesen.
Lagerung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden und ist somit leicht zu verwenden und zugänglich.
Zusammenfassend
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass unsere PBS-Lösung bei vielen biologischen und chemischen Experimenten ein wesentlicher Bestandteil ist. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für zahlreiche Anwendungen, von der Zellkultur bis zum Virustransportmedium. Durch die Wahl unserer hochwertigen PBS-Lösung können Forscher ihre Experimente optimieren und genaue und zuverlässige Ergebnisse erzielen.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Kaliumchlorid
200,00
Kaliumdihydrogenphosphat
200,00
Natriumchlorid
8,000.00
di-Natriumhydrogenphosphat wasserfrei
1,150.00