HROC60-Zellen
Allgemeine Informationen
Beschreibung | Dies ist eine Zelllinie aus einer Reihe von Tumorzelllinien, die seit 2006 von PD Dr. Michael Linnebacher aus primären Darmkrebsresektionspräparaten etabliert wurden. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Colon ascendens, UICC I |
Krankheit | Primäres Adenokarzinom, TNM-Stadium T2N0M0R0L0V0, Grading G2, Lk(n) + 0, ∑ Lk(n) 47 |
Merkmale
Alter | 71 Jahre |
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Geschlecht | Männlich |
Ethnizität | Kaukasisch |
Morphologie | Epithelähnlich |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | HROC60 (Cytion Katalognummer 300827) |
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Biosicherheitsstufe | 1 |
Hinterleger | M. Linnebacher |
Expression / Mutation
Proteinexpression | PTEN |
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Antigenexpression | Her2/neu +, EGFR +, CD326+, CD44+, CD54+, CD47+, CD71+, CD15-, CD73+, CD95+, CD274+, CD133low , CD276+, IDOschwach, MHC-I+, CD133schwach, CD66acdeweak, EpCAM+, MHCII+ nach IFN-y-Behandlung, cFLIPschwach |
Tumorigene | Ja, in immunsupprimierten Nacktmäusen |
Viren | Frei von humanpathogenen Viren SV40, JC/BK, HBV, HCV, HIV. |
Ploidie-Status | Aneuploid |
Handhabung
Nährboden | DMEM:Ham's F12, w: 3,1 g/L Glucose, w: 1,6 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 1,0 mM Natriumpyruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820400a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Verdopplungszeit | 29 Stunden |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Splitverhältnis | Empfohlen wird ein Verhältnis von 1:3 bis 1:5 |
Aussaatdichte | 2 x 10^4 Zellen/cm^2 |
Medienwechsel | Alle 3 bis 5 Tage |
Wiederherstellung durch Einfrieren | 1 bis 2 Wochen |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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STR profile |
Amelogenin: x,y
CSF1PO: 11
D13S317: 8,11
D16S539: 9,11
D5S818: 12
D7S820: 10,12
TH01: 8
TPOX: 11
vWA: 17
D21S11: 28
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Erforderliche Produkte
Zu den wichtigsten Eigenschaften von Freeze Medium CM-1 gehören:
Breite Kompatibilität: Wirksam für eine breite Palette von Zelltypen, einschließlich Primärzellen, Stammzellen und etablierte Zelllinien.
Hohe Lebensfähigkeit: Optimiert, um die Wiederherstellung und Lebensfähigkeit von Zellen nach dem Auftauen zu maximieren und zuverlässige Versuchsergebnisse zu gewährleisten.
Fertig zum Gebrauch: Praktisch vorbereitet und sterilisiert für die sofortige Anwendung, wodurch die Vorbereitungszeit und das Kontaminationsrisiko reduziert werden.
Erhöhte Stabilität: Bewahrt eine gleichbleibende Leistung unter Standard-Kryokonservierungsbedingungen und gewährleistet reproduzierbare Ergebnisse.
Lange Haltbarkeitsdauer: CM-1 ist ein serumhaltiges, gebrauchsfertiges Kryokonservierungsmedium, das bis zu einem Jahr im Kühlschrank aufbewahrt werden kann.
Verwendung von CM-1 zum Einfrieren von Zellen
Gehen Sie wie folgt vor, um CM-1 für das Einfrieren von adhärenten und Suspensionszellen zu verwenden
Bei adhärenten Zellen waschen Sie diese und lösen sie vom Kultursubstrat. Bei Suspensionszellen fahren Sie direkt mit dem nächsten Schritt fort.
Zählen Sie die Zellen, um sicherzustellen, dass sie die richtige Konzentration haben.
Zentrifugieren Sie die Zellen, um sie zu pelletieren, und resuspendieren Sie sie dann in CM-1-Gefriermedium.
Überführen Sie die resuspendierten Zellen in Kryogefäße.
Verwenden Sie eine langsame Gefriermethode, bevor Sie die Zellen in die Langzeitlagerung überführen
🥶 Methode
🔍 Beschreibung
💡 Schritte
❄️
Manuelles Einfrieren
Ein schrittweises Verfahren, bei dem die Temperatur schrittweise gesenkt wird, um die Lebensfähigkeit der Zellen zu gewährleisten
1️⃣ Zellen in Gefriermedium für 40 Minuten bei 4°C einfrieren.
2️⃣ Für 24 Stunden in einen Gefrierschrank mit -80°C transferieren.
3️⃣ Zellen zur Langzeitkonservierung in flüssigem Stickstoff lagern
🧊
Verwendung von Mr. Frosty
Ein praktisches Gerät, das kontrollierte Einfrierraten ohne elektrische Energie ermöglicht
1️⃣ Bereiten Sie die Zellen in Kryoröhrchen mit Gefriermedium vor.
2️⃣ Kryovials in den Mr. Frosty-Behälter stellen.
3️⃣ Vor dem Umfüllen in flüssigen Stickstoff 24 Stunden lang bei -80 °C lagern
🧬
Controlled-Rate Freezer
Ein hochpräziser Gefrierschrank von Thermo Fisher oder anderen Herstellern, der für eine kontrollierte Temperaturabsenkung ausgelegt ist
1️⃣ Programmieren Sie das Gerät so, dass die Temperatur schrittweise gesenkt wird.
2️⃣ Legen Sie die vorbereiteten Zellen in den Gefrierschrank.
3️⃣ Nach dem Einfrierzyklus die Zellen in flüssigen Stickstoff überführen
Lagern Sie die Kryoflaschen bei Temperaturen unter -130°C oder in flüssigem Stickstoff zur langfristigen Aufbewahrung.
Inhaltsstoffe
Enthält FBS, DMSO, Glucose, Salze
Pufferkapazität: pH = 7,2 bis 7,6
Cytion's Freeze Medium CM-1 bietet eine zuverlässige Lösung für die Kryokonservierung, die eine hohe Lebensfähigkeit und Funktionalität der Zellen nach dem Auftauen für eine Vielzahl von Forschungsanwendungen gewährleistet.
Diese einzigartige Formulierung kombiniert Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) und Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in einem präzisen 1:1-Verhältnis. Durch den Zusatz von L-Glutamin wird die Zusammensetzung weiter verbessert.
DMEM, das von Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM) abgeleitet ist, bietet im Vergleich zu seinem Vorgänger eine erhöhte Konzentration an Aminosäuren und Vitaminen. Im Gegensatz dazu basiert Ham's F-12 auf dem Medium Ham's F-10 und bietet eine ergänzende Reihe von essentiellen Komponenten.
Um ein optimales Zellwachstum zu unterstützen, ist es üblich, DMEM:Ham's F12 mit FBS in einer typischen Konzentration von 5-10 % zu ergänzen. Dieser Zusatz ist notwendig, da dem Medium Wachstumshormone, Lipide und Proteine fehlen, die für die zelluläre Entwicklung entscheidend sind.
DMEM:Ham's F12 enthält ein pH-Puffersystem und wird häufig mit Phenolrot, einem pH-Indikator, ergänzt. In DMEM:Ham's F12 kultivierte Zellen oder andere Medien, die das Bicarbonat-Puffersystem verwenden, benötigen eine kontrollierte CO2-Umgebung von 5-10 %, um einen angemessenen pH-Wert aufrechtzuerhalten. Phenolrot ermöglicht die Überwachung von pH-Änderungen von 6,2 (gelb) bis 8,2 (rot).
Qualitätskontrolle
pH = 7,2 +/
- 0,02 bei 20-25°C.
Jede Charge wurde auf Sterilität und Abwesenheit von Mykoplasmen und Bakterien getestet.
Wartung
Kühl aufbewahren bei +2°C bis +8°C im Dunkeln. Sowohl das Einfrieren als auch das Erwärmen auf bis zu +37°C mindern die Qualität des Produkts.
Erwärmen Sie das Medium nicht auf mehr als 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierbaren Wärmequellen (z.B. Mikrowellengeräte).
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, nehmen Sie diese Menge aus der Flasche und erwärmen Sie sie bei Raumtemperatur.
Die Haltbarkeit eines jeden Mediums mit Ausnahme des Basismediums beträgt 8 Wochen ab dem Herstellungsdatum.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Calciumchlorid x 2H2O
154,45
Eisen(III)-nitrat x 9H2O
0,05
Eisen(II)-sulfat x 7H2O
0,42
Kaliumchlorid
311,83
Kupfer(II)-sulfat x 5H2O
0.001
Magnesiumchlorid, wasserfrei
28,57
Magnesiumsulfat
48,85
Natriumchlorid
6,999.50
Natriumdihydrogenphosphat, wasserfrei
54,35
di-Natriumhydrogenphosphat
70,98
Zinksulfat x 7H2O
0,43
Sonstige Bestandteile
D(+)-Glucose wasserfrei
3,151.00
HEPES
3,574.50
Hypoxanthin
2,04
Linolsäure
0,04
DL-68-Liponsäure
0.103
Natriumpyruvat
110,00
Phenolrot
8,10
Putrescin x 2HCl
0.081
Thymidin
0,36
Aminosäuren
L-Alanin
4,45
L-Arginin x HCl
147,35
L-Asparagin x H2O
7,50
L-Asparaginsäure
6,65
L-Cystin x 2HCl
31,29
L-Cystein x HCl x H2O
17,56
L-Glutamin
365,00
L-Glutaminsäure
7,35
Glycin
18,75
L-Histidin x HCl x H2O
31,48
L-Isoleucin
54,37
L-Leucin
58,96
L-Lysin x HCl
91,37
L-Methionin
17,24
L-Phenylalanin
35,48
L-Prolin
17,27
L-Serin
26,25
L-Threonin
53,55
L-Tryptophan
9,02
L-Tyrosin x 2Na x 2H2O
55,81
L-Valin
52,66
Vitamine
D-(+)-Biotin
0,004
D-Calciumpantothenat
2,12
Cholinchlorid
8,98
Folsäure
2,66
myo-Inositol
12,51
Nicotinamid
2,02
Pyridoxin x HCl
2,03
Riboflavin
0,22
Thiamin x HCl
2,17
Vitamin B12
0,68
NaHCO3
1,200.00
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine vielseitige Pufferlösung, die in vielen biologischen und chemischen Anwendungen sowie bei der Gewebeverarbeitung eingesetzt wird. Unsere PBS-Lösung ist mit hochwertigen Inhaltsstoffen formuliert, um einen konstanten pH-Wert während der Experimente zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind auf die des menschlichen Körpers abgestimmt, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen nicht toxisch ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2HPO4 und 2 mM KH2PO4. Wir haben diese Zusammensetzung auf der Grundlage von CSHL-Protokollen und der Molekularen Klonierung nach Sambrook gewählt, die in der Forschungsgemeinschaft etablierte Standards sind.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für eine Vielzahl von Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich perfekt für die Verdünnung von Substanzen und das Spülen von Zellbehältern. Unsere PBS-Lösung mit EDTA kann auch zum Lösen von angehefteten und verklumpten Zellen verwendet werden. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass zweiwertige Metalle wie Zink nicht zu PBS hinzugefügt werden dürfen, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Darüber hinaus hat sich unsere PBS-Lösung als akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, wie z. B. SARS-CoV-2, erwiesen.
Lagerung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung kann bei Raumtemperatur gelagert werden und ist somit leicht zu verwenden und zugänglich.
Zusammenfassend
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass unsere PBS-Lösung bei vielen biologischen und chemischen Experimenten ein wesentlicher Bestandteil ist. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für zahlreiche Anwendungen, von der Zellkultur bis zum Virustransportmedium. Durch die Wahl unserer hochwertigen PBS-Lösung können Forscher ihre Experimente optimieren und genaue und zuverlässige Ergebnisse erzielen.
Zusammensetzung
Bestandteile
mg/L
Anorganische Salze
Kaliumchlorid
200,00
Kaliumdihydrogenphosphat
200,00
Natriumchlorid
8,000.00
di-Natriumhydrogenphosphat wasserfrei
1,150.00