COS-7-Zellen




















COS-7-Zellen: Fortschritte bei der Expression rekombinanter Proteine und bei viralen Studien
Beschreibung | COS-7-Zellen sind eine fibroblastenähnliche Zelllinie, die aus dem Gewebe der Niere des Afrikanischen Grünen Affen gewonnen wird. Sie sind eine wichtige Ressource in der Forschung, insbesondere wegen ihrer hohen Transfektionseffizienz, die sie zu einer beliebten Wahl für die Expression rekombinanter Proteine macht. COS-7-Zellen werden von der CV-1-Zelllinie abgeleitet und mit einer mutierten Form des Simian-Virus 40 (SV40) transformiert, die einen Replikationsursprung enthält, der die episomale Replikation transfizierter Plasmide, die den SV40-Replikationsursprung enthalten, ermöglicht. Die Transfektion von COS-7-Zellen wird durch Transfektionsreagenzien wie Lipofectamine erleichtert, und zwar mit einer Effizienz, die derjenigen von HeLa-Zellen entspricht. Mit herkömmlichen Methoden kann bei COS-7-Zellen eine Transfektionseffizienz von bis zu 80 % erreicht werden, was zeigt, wie leicht sie sich genetisch manipulieren lassen. Die Fähigkeit der COS-7-Zellen, große Plasmide aufzunehmen und zu replizieren, was zu einer hohen Ausbeute der gewünschten rekombinanten Proteine führt, macht sie zu einer unschätzbaren Ressource für verschiedene Anwendungen, darunter Studien zur Genexpression, Untersuchungen von Signaltransduktionswegen und die Produktion von Proteinen für biochemische Analysen. COS-7-Zellen weisen eine hohe Empfindlichkeit gegenüber verschiedenen Viren auf, was sie zu einem ausgezeichneten Modell für virologische Studien macht, einschließlich Untersuchungen zur Virus-Wirt-Interaktion, zur Aufklärung des viralen Lebenszyklus und zur Prüfung antiviraler Medikamente. Ihre Offenheit gegenüber dem Eindringen und der Vermehrung von Viren wird genutzt, um die Mechanismen der Virusinfektion, der Pathogenese und der durch virale Eindringlinge ausgelösten zellulären Reaktionen zu untersuchen. Folglich dienen COS-7-Zellen als wertvolles Werkzeug bei der Entwicklung von viralen Vektoren für die Gentherapie und die Impfstoffforschung. COS-7-Zellen sind aufgrund ihrer hohen Transfektionseffizienz und ihrer Nützlichkeit für die rekombinante Proteinexpression ein Eckpfeiler der Forschung. Ihre leichte genetische Manipulierbarkeit in Verbindung mit ihrer Anfälligkeit für Viren macht sie unentbehrlich für Studien in den Bereichen Genexpression, Signaltransduktion, Virologie und die Entwicklung viraler Vektoren und festigt ihre Rolle als vielseitiges Werkzeug in den biologischen Grundlagen- und Anwendungswissenschaften. |
---|---|
Organismus | Cercopithecus aethiops (Grüner Affe) |
Gewebe | Niere |
Anwendungen | Transfektionswirt. Geeignet für die Transfektion mit Vektoren, die die Expression von SV40 T-Antigen erfordern. |
Synonyme | Cos-7, COS7, Cos7, CV-1 im Ursprung Simian-7 |
Spezifikationen
Alter | Erwachsener |
---|---|
Geschlecht | Männlich |
Morphologie | Fibroblastenähnlich |
Zelltyp | Fibroblasten |
Wachstumseigenschaften | Monolayer, anhaftend |
Dokumentation über COS-7-Nierenzellen
Zitat | COS-7 (Cytion-Katalognummer 605470) |
---|---|
Biosicherheitsstufe | 1 |
Genetischer Aufbau
Virusanfälligkeit | SV40 (lytisches Wachstum), SV40 tsA209 bei 40 Grad Celsius, SV40-Mutanten mit Deletionen in der frühen Region |
---|---|
Produkte | T-Antigen |
Wartungstechniken
Nährboden | DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820400a) |
---|---|
Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Splitverhältnis | Empfohlen wird ein Verhältnis von 1:4 bis 1:8 |
Aussaatdichte | 1 x 10^4 Zellen/cm^2 ergeben in etwa 4 Tagen eine konfluente Schicht |
Medienwechsel | 2 bis 3 Mal pro Woche |
Wiederherstellung durch Einfrieren | Nach dem Auftauen die Zellen mit 5 x 10^4 Zellen/cm^2 plattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und anhaften lassen. |
Einfriermedium | Verwenden Sie als Kryokonservierungsmedium ein komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion-Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren. |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
|
Reinheits- und Nämlichkeitskontrollen
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
---|
Erforderliche Produkte
Diese einzigartige Formulierung kombiniert Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) und Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) in einem präzisen 1:1-Verhältnis. Durch den Zusatz von L-Glutamin wird die Zusammensetzung weiter verbessert.
DMEM, das von Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM) abgeleitet ist, bietet im Vergleich zu seinem Vorgänger eine höhere Konzentration an Aminosäuren und Vitaminen. Im Gegensatz dazu basiert Ham's F-12 auf dem Medium Ham's F-10 und bietet eine ergänzende Reihe von essentiellen Komponenten.
Um ein optimales Zellwachstum zu unterstützen, ist es üblich, DMEM:Ham's F12 mit FBS in einer typischen Konzentration von 5-10 % zu ergänzen. Dieser Zusatz ist notwendig, da dem Medium Wachstumshormone, Lipide und Proteine fehlen, die für die zelluläre Entwicklung entscheidend sind.
DMEM:Ham's F12 enthält ein pH-Puffersystem und wird häufig mit Phenolrot, einem pH-Indikator, ergänzt. Zellen, die in DMEM:Ham's F12 oder einem anderen Medium mit Bikarbonatpuffer kultiviert werden, benötigen eine kontrollierte CO2-Umgebung von 5-10%, um einen angemessenen pH-Wert zu erhalten.
Qualitätskontrolle
Steril gefiltert
Lagerung und Haltbarkeit
Vor Licht geschützt bei +2°C bis +8°C lagern.
Nach dem Öffnen bei 4°C lagern und innerhalb von 6-8 Wochen aufbrauchen.
Versandbedingungen
Umgebungstemperatur
Pflege
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Vermeiden Sie Einfrieren und häufiges Erwärmen auf +37°C, da dies die Produktqualität beeinträchtigt.
Erwärmen Sie das Medium nicht über 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierten Wärmequellen wie Mikrowellengeräte.
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, entnehmen Sie die erforderliche Menge und erwärmen Sie sie vor der Verwendung auf Raumtemperatur.
Zusammensetzung
Kategorie
Bestandteile
Konzentration (mg/L)
Aminosäuren
Glycin
18.75
L-Alanin
4.45
L-Arginin HCl
147.50
L-Asparagin H₂O
7.50
L-Asparaginsäure
6.65
L-Cystein HCl H₂O
17.56
L-Cystin 2 HCl
31.29
L-Glutaminsäure
7.35
L-Glutamin
365.00
L-Histidin HCl H₂O
31.48
L-Isoleucin
54.47
L-Leucin
59.05
L-Lysin HCl
91.25
L-Methionin
17.24
L-Phenylalanin
35.48
L-Prolin
17.25
L-Serin
26.25
L-Threonin
53.45
L-Tryptophan
9.02
L-Tyrosin-Natriumsalz
48.10
L-Valin
52.85
Vitamine
D-Biotin
0.0035
Cholinchlorid
8.98
D-Calciumpantothenat
2.24
Folsäure
2.66
myo-Inositol
12.60
Nicotinamid
2.02
Pyridoxin HCl
0.031
Pyridoxal HCl
2.00
Riboflavin
0.219
Thiamin-HCl
2.17
Vitamin B12
0.68
Anorganische Salze
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Andere Bestandteile
D-Glucose
3151.00
Hypoxanthin
2.40
HEPES
3574.50
Linolsäure
0.042
Liponsäure
0.105
Phenolrot Natriumsalz
8.63
Putrescin 2 HCl
0.081
Natriumpyruvat
55.00
Thymidin
0.365
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.
Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) ist eine weit verbreitete Pufferlösung in der biologischen und chemischen Forschung. Sie spielt eine entscheidende Rolle bei der Aufrechterhaltung des pH-Gleichgewichts und der Osmolarität während verschiedener experimenteller Verfahren, einschließlich Gewebeverarbeitung und Zellkultur. Unsere PBS-Lösung wird sorgfältig mit hochreinen Inhaltsstoffen formuliert, um Stabilität und Zuverlässigkeit bei jedem Experiment zu gewährleisten. Die Osmolarität und die Ionenkonzentration unserer PBS-Lösung sind denen des menschlichen Körpers sehr ähnlich, so dass sie isotonisch und für die meisten Zellen ungiftig ist.
Zusammensetzung unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist eine pH-angepasste Mischung aus hochreinen Phosphatpuffern und Kochsalzlösungen. Bei einer 1fachen Arbeitskonzentration enthält sie:
8000 mg/L Natriumchlorid (NaCl)
200 mg/L Kaliumchlorid (KCl)
1150 mg/L Natriumphosphat dibasisch wasserfrei (Na2HPO4)
200 mg/L Kaliumphosphat einbasig wasserfrei (KH2PO4)
Diese Zusammensetzung gewährleistet ein optimales pH
- und Ionengleichgewicht und eignet sich für eine breite Palette biologischer Anwendungen.
Anwendungen unserer PBS-Lösung
Unsere PBS-Lösung ist ideal für verschiedene Anwendungen in der biologischen Forschung. Aufgrund ihrer isotonischen und ungiftigen Eigenschaften eignet sie sich für die Verdünnung von Substanzen und die Spülung von Zellbehältern. PBS-Lösungen, die EDTA enthalten, sind wirksam, um anhaftende und verklumpte Zellen abzulösen. Zweiwertige Metalle wie Zink sollten jedoch nicht zu PBS hinzugefügt werden, da dies zu Ausfällungen führen kann. In solchen Fällen werden Good's Puffer empfohlen. Außerdem ist unsere PBS-Lösung eine akzeptable Alternative zu viralen Transportmedien für den Transport und die Lagerung von RNA-Viren, einschließlich SARS-CoV-2.
Qualitätskontrolle
Steril gefiltert
Lagerung und Haltbarkeit
Vor Licht geschützt bei +2°C bis +25°C lagern.
Nach dem Öffnen bei 2°C bis 25°C lagern und innerhalb von 24 Monaten verbrauchen.
Versandbedingungen
Umgebungstemperatur
Pflege
Gekühlt bei +2°C bis +8°C im Dunkeln aufbewahren. Vermeiden Sie Einfrieren und häufiges Erwärmen auf +37°C, da dies die Produktqualität beeinträchtigt.
Erwärmen Sie das Medium nicht über 37°C und verwenden Sie keine unkontrollierten Wärmequellen wie Mikrowellengeräte.
Wenn nur ein Teil des Mediums verwendet werden soll, entnehmen Sie die erforderliche Menge und erwärmen Sie sie vor der Verwendung auf Raumtemperatur.
Zusammensetzung
Kategorie
Bestandteile
Konzentration (mg/L)
Salze
Kaliumchlorid
200
Kaliumphosphat monobasisch wasserfrei
200
Natriumchlorid
8000
Natriumphosphat zweibasisch wasserfrei
1150