2427T-Zellen




















Allgemeine Informationen
Beschreibung | 2427T stammt aus dem Primärtumor einer 64-jährigen kaukasischen Patientin, bei der ein Plattenepithelkarzinom der Lunge diagnostiziert wurde, und stellt ein wertvolles In-vitro-Modell dar, das die morphologischen Merkmale des ursprünglichen Tumorgewebes rekapituliert. Die 2427T-Zellen zeichnen sich durch ihre charakteristische kleine, runde Form und ihre Neigung zur Aggregation in Clustern aus und weisen die für Plattenepithelkarzinome (SCC) typischen morphologischen Merkmale auf. Ein charakteristisches Merkmal der 2427T-Zelllinie ist die Expression von Cytokeratin 5/6 (CK5/6), einem Marker, der auf den Ursprung des SCC hinweist. Die heterogene Expression von CK5/6 deutet auf das Vorhandensein verschiedener Zellsubpopulationen innerhalb der 2427T-Kultur hin und bietet die Möglichkeit, die intratumorale Heterogenität weiter zu untersuchen. Die Immunphänotypisierung von 2427T hat ihr einzigartiges Profil offenbart, einschließlich des Fehlens des Adenokarzinom-assoziierten Markers CK7, des hämato-endothelialen Vorläufer-Markers CD34 und des Leukozyten-Markers CD45, was ihre Einordnung in die Plattenepithel-Linie untermauert. Interessanterweise ist die Zelllinie zwar generell negativ für neuroendokrine Marker wie CD56, Synaptophysin (SYP), neuronenspezifische Enolase (NSE) und Chromogranin A (CHGA), doch die Expression von SYP in einer Untergruppe von Zellen lässt auf eine gewisse Heterogenität der neuroendokrinen Marker schließen. Entscheidend ist, dass die 2427T-Zelllinie keine EGF-R- oder k-ras-Mutationen aufweist, was sie von anderen Modellen unterscheidet und ihr Potenzial als neue Ressource für die Erforschung der Biologie und der therapeutischen Schwachstellen des nicht-kleinzelligen Plattenepithelkarzinoms (NSCLC) unterstreicht. Das Fehlen üblicher onkogener Mutationen macht 2427T zu einem unschätzbaren Werkzeug für die Forschung, die darauf abzielt, die zugrunde liegenden Mechanismen der Pathogenese und des Fortschreitens von Plattenepithelkarzinomen aufzudecken. |
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Organismus | Menschen |
Gewebe | Lunge |
Krankheit | Plattenepithelkarzinom der Lunge |
Merkmale
Alter | 64 Jahre |
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Geschlecht | Weiblich |
Ethnizität | Kaukasisch |
Wachstumseigenschaften | Adhärent |
Identifikatoren / Biologische Schutzstufe / Zitation
Zitat | 2427T (Cytion Katalognummer 300167) |
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Expression / Mutation
Proteinexpression | Synaptophysin (SYP) |
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Antigenexpression | partielle Expression von CK5/6 |
Tumorigene | Hochgradig tumorerzeugend in Nacktmäusen. |
Handhabung
Nährboden | DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a) |
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Mittlere Supplemente | Supplemente des Mediums mit 10% FBS |
Passage-Lösung | Accutase |
Subkultivierung | Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten. |
Einfriermedium | CM-1 (Cytion Katalognummer 800100) |
Handhabung von kryokonservierten Kulturen |
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Qualitätskontrolle / Genetisches Profil / HLA
Sterilität | Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen. Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft. |
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HLA-Allele |
A*: 01:01:01, '68:01:02
B*: '07:02:01, '51:01:01
C*: '07:02:01, '15:02:01
DRB1*: '04:04:01, '11:01:01
DQA1*: '03:01:01, '05:05:01
DQB1*: '03:01:01, '03:02:01
DPB1*: '03:01:01, '04:01:01
E: '01:01:01
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Erforderliche Produkte
- eine schonende Alternative zu Trypsin
Accutase ist eine Zellablösungslösung, die die Zellkulturindustrie revolutioniert. Es ist eine Mischung aus proteolytischen und kollagenolytischen Enzymen, die die Wirkung von Trypsin und Kollagenase nachahmt. Im Gegensatz zu Trypsin enthält Accutase keine Säugetier
- oder Bakterienbestandteile und ist sehr viel schonender für die Zellen, was es zu einer idealen Lösung für die routinemäßige Ablösung von Zellen von Standardplastikgefäßen für die Gewebekultur und adhäsionsbeschichteten Plastikgefäßen macht. In diesem Blogbeitrag gehen wir auf die Vorteile und Einsatzmöglichkeiten von Accutase ein und zeigen, wie es die Zellkultur verändert.
Vorteile von Accutase
Accutase hat mehrere Vorteile gegenüber herkömmlichen Trypsinlösungen. Erstens kann es immer dann eingesetzt werden, wenn eine sanfte und effiziente Ablösung von adhärenten Zelllinien erforderlich ist, und ist somit ein direkter Ersatz für Trypsin. Zweitens funktioniert Accutase sehr gut bei embryonalen und neuronalen Stammzellen, und es hat sich gezeigt, dass die Lebensfähigkeit dieser Zellen nach der Passage erhalten bleibt. Drittens bewahrt Accutase die meisten Epitope für die anschließende durchflusszytometrische Analyse, was es ideal für die Analyse von Zelloberflächenmarkern macht.
Außerdem muss Accutase bei der Passage von adhärenten Zellen nicht neutralisiert werden. Durch die Zugabe weiterer Medien nach der Zellteilung wird die Accutase verdünnt, so dass sie nicht mehr in der Lage ist, Zellen abzulösen. Dadurch entfällt der Schritt der Inaktivierung, und die Zellkulturtechniker sparen Zeit. Schließlich muss Accutase nicht aliquotiert werden, und eine Flasche ist im Kühlschrank 2 Monate lang haltbar.
Anwendungen von Accutase
Accutase ist ein direkter Ersatz für Trypsinlösung und kann für die Passage von Zelllinien verwendet werden. Darüber hinaus eignet sich Accutase gut zum Ablösen von Zellen für die Analyse vieler Zelloberflächenmarker mittels Durchflusszytometrie und für die Zellsortierung. Andere nachgeschaltete Anwendungen der Accutase-Behandlung umfassen die Analyse von Zelloberflächenmarkern, Viruswachstumstests, Zellproliferation, Tumorzellmigrationsassays, routinemäßige Zellpassage, Produktionsskalierung (Bioreaktor) und Durchflusszytometrie.
Zusammensetzung von Accutase
Accutase enthält keine Bestandteile von Säugetieren oder Bakterien und ist eine natürliche Enzymmischung mit proteolytischer und kollagenolytischer Enzymaktivität. Es ist in einer viel niedrigeren Konzentration als Trypsin und Kollagenase formuliert, wodurch es weniger toxisch und sanfter, aber genauso wirksam ist.
Wirksamkeit von Accutase
Accutase ist nachweislich effizient bei der Ablösung von Primär
- und Stammzellen und erhält die hohe Lebensfähigkeit der Zellen im Vergleich zu Enzymen tierischen Ursprungs wie Trypsin. 100 % der Zellen werden nach 10 Minuten zurückgewonnen, und dank der Selbstverdauung von Accutase ist es unbedenklich, Zellen bis zu 45 Minuten in Accutase zu belassen.
Zusammenfassung
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Accutase eine leistungsstarke Lösung ist, die das Spiel in der Zellkultur verändert. Mit seiner sanften Natur, Effizienz und Vielseitigkeit ist Accutase die ideale Alternative zu Trypsin. Wenn Sie nach einer zuverlässigen und effizienten Lösung für die Zellablösung suchen, ist Accutase die richtige Lösung für Sie.