K7M2-celler med vildtype-Luc

Cytions Freeze Medium CM-1 er et topmoderne kryopræserveringsmedium, der er designet til at sikre det højeste niveau af cellelevedygtighed og funktionalitet efter optøning. Dette alsidige medium er velegnet til et bredt spektrum af celletyper, herunder både humane og animalske celler, hvilket gør det til et vigtigt værktøj til forskellige forskningsapplikationer. Freeze Medium CM-1 er formuleret med en omhyggeligt afbalanceret kombination af kryobeskyttelsesmidler og essentielle næringsstoffer og minimerer dannelsen af iskrystaller og cellulær stress under fryseprocessen, så den cellulære integritet bevares.
De vigtigste funktioner i Freeze Medium CM-1 omfatter:

Bred kompatibilitet: Effektivt til en lang række celletyper, herunder primære celler, stamceller og etablerede cellelinjer.
Høj levedygtighed: Optimeret til at maksimere gendannelse og levedygtighed af celler efter optøning, hvilket sikrer pålidelige eksperimentelle resultater.
Klar til brug: Praktisk forberedt og steriliseret til øjeblikkelig anvendelse, hvilket reducerer forberedelsestiden og risikoen for kontaminering.
Forbedret stabilitet: Opretholder en ensartet ydeevne under standard kryopræserveringsforhold, hvilket sikrer reproducerbare resultater.
Lang holdbarhed: CM-1 er et serumholdigt kryopræserveringsmedium, der er klar til brug, og som kan opbevares i køleskabet i op til et år.


Brug af CM-1 til nedfrysning af celler

Følg disse trin for at bruge CM-1 til nedfrysning af både adhærente og suspenderede celler

For adhærente celler skal de vaskes og adskilles fra kultursubstratet. For suspensionsceller skal du fortsætte direkte til næste trin.
Tæl cellerne for at sikre, at de har den rette koncentration.
Centrifuger cellerne for at pelleter dem, og resuspender dem derefter i CM-1-frysemedium.
Overfør de resuspenderede celler til cryovials.
Brug en langsom nedfrysningsmetode, før du overfører cellerne til langtidsopbevaring





Metode
Beskrivelse
Skridt





❄️
Manuel nedfrysning

En trinvis metode, der involverer gradvis temperatursænkning for at sikre cellernes levedygtighed

1️⃣ Anbring cellerne i frysemediet i en fryser på 4 °C i 40 minutter.
2️⃣ Overfør til en fryser på -80 °C i 24 timer.
3️⃣ Opbevar cellerne i flydende nitrogen til langtidsopbevaring



❄️
Brug af Mr. Frosty

En praktisk anordning, der giver mulighed for kontrollerede frysehastigheder uden elektrisk strøm

1️⃣ Forbered celler i kryovialer med frysemedium.
2️⃣ Placer kryovials i Mr. Frosty-beholderen.
3️⃣ Opbevar ved -80 °C i 24 timer, før de overføres til flydende nitrogen



❄️
Fryser med kontrolleret hastighed

En højpræcisionsfryser fra Thermo Fisher eller andre producenter, der er designet til kontrolleret temperatursænkning

1️⃣ Programmer enheden til gradvist at sænke temperaturen.
2️⃣ Placer de forberedte celler i fryseren.
3️⃣ Efter frysecyklussen overføres cellerne til flydende nitrogen









Opbevar kryovialerne ved temperaturer under -130 °C eller i flydende kvælstof til langtidsopbevaring.


Ingredienser

Indeholder FBS, DMSO, glukose, salte
Bufferkapacitet: pH = 7,2 til 7,6


Cytions Freeze Medium CM-1 er en pålidelig løsning til kryopræservering, der sikrer høj cellelevedygtighed og funktionalitet efter optøning til en lang række forskningsformål.

Accutase-cellefrigørelsesvæske med EDTA og fenolrød – 100 ml

Accutase er en brugsklar, sterilt filtreret celleafløsningsopløsning, der er udviklet som et skånsomt alternativ til trypsin/EDTA til at adskille vedhæftede pattedyrceller fra standard plastudstyr til vævskultur og overflader med vedhæftningsbelægning. Den kombinerer proteolytisk og kollagenolytisk enzymaktivitet i en afbalanceret saltopløsning for at sikre en effektiv, men kontrolleret adskillelse, der bevarer proteinerne på celleoverfladen og understøtter høj levedygtighed efter passage samt hurtig genvedhæftning.

Accutase-formuleringen er baseret på Dulbeccos phosphatbufferede saltvand (DPBS) med EDTA og fenolrødt som visuel pH-indikator. Enzymerne er af ikke-pattedyr
- og ikke-bakteriel oprindelse, hvilket gør Accutase særligt velegnet til stamcelleforskning, vaccinearbejdsgange og enhver anvendelse, hvor forurening fra dyr eller mikroorganismer skal minimeres. Opløsningen hæmmer sig selv ved 37 °C, så der kræves ingen neutraliserende reagens eller serumholdigt medium efter løsningen – cellerne kan overføres direkte til frisk medium.

Nøglefunktioner

Klar til brug 1x sterilt filtreret væske – ingen fortynding eller rekonstituering kræves
Kombineret proteolytisk og kollagenolytisk enzymaktivitet for skånsom dissociation
Hvert parti er standardiseret til en defineret dissociationsaktivitet for konsistens fra parti til parti
Enzymer af ikke-pattedyr og ikke-bakteriel oprindelse
Selvhæmmer ved 37 °C – ingen neutraliserende opløsning nødvendig
Formuleret i Dulbeccos PBS med EDTA
Fenolrødt inkluderet som visuel pH-indikator
pH 6,8 – 7,8


Typiske anvendelser
Accutase adskiller skånsomt en lang række adhærente og følsomme celletyper, herunder humane embryonale stamceller (hESCs), humane inducerede pluripotente stamceller (iPSCs), neurale stamceller, primære neuroner og rutinemæssigt dyrkede adhærente cellelinjer såsom HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 og A549. Typiske anvendelsestilfælde omfatter:

Rutinemæssig subkultur og passering af adhærente pattedyrceller
Skånsom enkeltcelle-dissociation af hESC'er, iPSC'er og andre følsomme linjer
Prøveforberedelse til flowcytometri og FACS-analyse
Analyse af celleoverflademarkører, hvor epitopintegritet er afgørende
Assays af cellemigration, proliferation og apoptose
Hviletilstandsassays ved serumudtømning og onkogen-transfektionsstudier
Assays af tumorcelle
- og neuralkamcellemigration
Opskalering af produktionen i bioreaktor-arbejdsgange

Til rutinearbejde påføres ca. 10 ml Accutase pr. 75 cm2 kulturoverflade og inkuberes i 5–10 minutter ved stuetemperatur. Den optimale inkuberingstid bør bestemmes for hver cellelinje og bør ikke overstige en time. Før tilsætning skylles cellelaget med en Ca2+/Mg2+-fri saltopløsning, såsom DPBS uden calcium og magnesium, for at fjerne resterende serum og toværdige kationer.

Håndtering og opbevaring
Opbevar den uåbnede flaske frosset ved -15 °C eller derunder. Optø enten ved stuetemperatur eller natten over ved +2 °C til +8 °C. Optø ikke Accutase i et 37 °C vandbad, da forhøjede temperaturer reducerer enzymaktiviteten. Efter optøning kan opløsningen opbevares i op til 2 måneder ved +2 °C til +8 °C; opbevar ikke ved stuetemperatur. Reagenset må ikke forvarmes til 37 °C før anvendelse – tilsæt det direkte til vaskede celler ved stuetemperatur. For at opnå lang holdbarhed anbefales det at opdele reagenset i engangsportioner for at undgå gentagne optøningscyklusser. Arbejd altid under aseptiske forhold.

Kvalitet
Fremstillet under strenge kvalitetsstandarder. Hvert parti Accutase er sterilt filtreret og testet for sterilitet, pH, udseende og dissociationsaktivitet for at sikre ensartet, reproducerbar ydeevne fra parti til parti.

Produktspecifikationer



Specifikation
Detaljer



ProdukttypeReagens til celleafløsning/dissociation
FormatSterilfiltreret væske, klar til brug
Volumen100 ml
Arbejdskoncentration1x (klar til brug)
EnzymaktivitetKombineret proteolytisk og kollagenolytisk
Enzymets oprindelseIkke-pattedyr og ikke-bakterielt
BuffersystemDulbeccos PBS med EDTA
pH-indikatorFenolrød
pH-interval6,8 – 7,8
UdseendeKlar, lyserød til orange opløsning
Opbevaringstemperatur-15 °C eller derunder
Stabilitet efter optøningOp til 2 måneder ved +2 °C til +8 °C
Anbefalet anvendelsesvolumen~10 ml pr. 75 cm2 dyrkningsflade
Typisk inkubationstid5 – 10 minutter ved stuetemperatur
ForsendelsesbetingelserFrosset på tøris
Tilsigtet anvendelseUdelukkende til forskningsbrug og videreforarbejdning



Formulering (sammensætning pr. liter)



Komponent
Koncentration (mg/L)




Uorganiske salte

Natriumchlorid (NaCl)8000,00
Dinatriumhydrogenphosphat (Na2HPO4)1150,00
Kaliumchlorid (KCl)200,00
Kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4)200,00

Andre komponenter

EDTA · 4Na (tetranatrium-EDTA)220,00
Phenolrød3,00
Proprietær enzymblanding (proteolytisk og kollagenolytisk aktivitet)1x



Accutase er et registreret varemærke tilhørende Innovative Cell Technologies, Inc.

Produktoversigt
Volumen: 100 ml Opbevaring: ≤-15°C Sterilitet: Sterilt filtreret
Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) er et sterilt, brugsklart koncentrat, der er designet til at reducere risikoen for mikrobiel kontaminering i cellekulturer og relaterede laboratorieapplikationer. Denne 100x opløsning indeholder en veletableret kombination af penicillin, streptomycin og amfotericin B, der giver bredspektret antimikrobiel aktivitet mod grampositive og gramnegative bakterier, gær og filamentøse svampe. Formuleringen er velegnet til brug i eukaryote cellekulturer, bakteriemedier og andre forureningsfølsomme systemer, hvilket understøtter rene og ensartede laboratorieoperationer.
Anvendelse og fordele Denne løsning er optimeret til rutinemæssige forskningsprotokoller og bruges i vid udstrækning til at opretholde aseptiske forhold i arbejdsgange med cellekulturer. Den giver pålidelig ydeevne i kontamineringsfølsomme miljøer og hjælper forskere med at reducere risikoen for mikrobiel overvækst uden at gå på kompromis med cellernes sundhed eller forsøgets reproducerbarhed. Den sterilt filtrerede formulering eliminerer behovet for yderligere solubiliseringstrin, hvilket understøtter strømlinet medieforberedelse og reducerer variabiliteten i de daglige laboratorieprocedurer.
Anvendelse og kompatibilitet For at opnå standard arbejdskoncentrationer skal opløsningen fortyndes 1:100 i dit komplette kulturmedie. Produktet er kompatibelt med en bred vifte af pattedyrcellelinjer og basalmedier. Med konsekvent lagertilgængelighed drager forskere fordel af pålidelig forsyningskontinuitet og forenklet logistikplanlægning. Opløsningen skal opbevares ved ≤ -15 °C og beskyttes mod gentagne fryse-tø-cyklusser for at bevare stabiliteten. Kun til forskningsbrug. Ikke til brug i diagnostiske eller terapeutiske procedurer. Må ikke anvendes til mennesker eller dyr.