Buňky SH-SY5Y - Výzkum neuroblastomu a neurovědecký význam buněk SH-SY5Y

Buněčná linie SH-SY5Y, odvozená z lidského neuroblastomu, je hojně využívána v lékařském výzkumu při zkoumání neurodegenerativních onemocnění a vývoji léčiv. Výzkumníci využívají tyto buňky v jejich původní nediferencované podobě nebo je diferencují na buňky připomínající neurony.

Obecné informace a původ buněčné linie SH-SY5Y

V této části budou uvedeny základní informace o buněčné linii SH-SY5Y, včetně jejího původu, definice a buněčné struktury. Budeme se zabývat otázkami, jako je její morfologie a původ buněk.

  • SH-SY5Y je lidská buněčná linie, která vznikla subklonováním buněčné linie neuroblastomu SK-N-SH v roce 1970.
  • Mateřská buněčná linie SK-N-SH byla vyvinuta z biopsie kostní dřeně čtyřleté pacientky s neuroblastomem.
  • Buňky SH-SY5Y jsou fenotypově adrenergní a exprimují dopaminergní markery, což z nich činí užitečný in vitro model pro studium neurodegenerativních onemocnění, neurogeneze a vlastností mozkových buněk [1].
  • Buňky SH-SY5Y rostou jako shluky životaschopných neuroblastických buněk s neurity a jsou volně adherentní.
  • Velikost buněk SH-SY5Y je 12 μm.
  • Modální počet chromozomů pro buňky SH-SY5Y je 47 a mají vzácný marker chromozomu číslo 1, trizomii 1q, způsobenou vložením extra kopie segmentu 1q do dlouhého raménka chromozomu 1. V případě, že buňky SH-SY5Y mají chromozom 1q, je jejich počet chromozomů 47.

Kultivace buněk SH-SY5Y

V neurobiologických výzkumných laboratořích jsou buňky SH-SY5Y nejčastěji kultivovanými neuroblastomovými buňkami. Pro práci s těmito buňkami je nezbytné pochopit, jaký typ růstového média je vhodný pro jejich kultivaci, jaké jsou jejich růstové vlastnosti, optimální hustota výsevu a správná metoda jejich zmrazení. Tento oddíl vám poskytne základní informace o kultivaci buněk SH-SY5Y, které vám s těmito aspekty pomohou.

Klíčové body pro kultivaci buněk SH-SY5Y

Doba zdvojení populace: Průměrná doba zdvojení populace buněk SH-SY5Y je přibližně 3 až 4 dny.

Adherentní nebo v suspenzi: SH-SY5Y jsou volně adherentní buňky. Při vysoké hustotě osazení rostou jako shluky.

Hustota výsevu: Optimální hustota výsevu pro SH-SY5Y je 1 x 104 buněk/cm2. Kultury SH-SY5Y se skládají z adherentních i plovoucích buněk.

Růstové médium: Pro pěstování buněčné linie SH-SY5Y je ideální médium DMEM:Ham's F12 doplněné 3,1 g/l glukózy, 10 % FBS a 1,6 mM L-glutaminu.

Růstové podmínky (teplota, CO2): Buňky SH-SY5Y se pěstují při teplotě 37 °C ve zvlhčeném inkubátoru s přívodem 5 % CO2.

Skladování: Pro zachování životaschopnosti buněk SH-SY5Y se skladují v plynné fázi kapalného dusíku při teplotě nižší než -150 °C.

Postup zmrazování a médium: Ke zmrazení buněk SH-SY5Y se používají zmrazovací média CM-1 nebo CM-ACF. Pro zmrazení této neuroblastomové buněčné linie se volí metoda pomalého zmrazování, při níž se teplota postupně snižuje o 1 °C.

Postup rozmrazování: Zmrazené lahvičky obsahující buňky SH-SY5Y se umístí do vodní lázně nastavené na teplotu 37 °C. Lahvička se rychle míchá, dokud buňky nerozmrznou a nezůstane jen malý ledový chuchvalec.

Úroveň biologické bezpečnosti: SH-SY5Y buňky lze kultivovat v laboratoři s úrovní biologické bezpečnosti 1.

SH-SY5Y při střední a vysoké konfluenci.

SH-SY5Y: Výhody a omezení

Výhody

  • Diferenciace na neurony: SH-SY5Y buňky lze pomocí specifických sloučenin diferencovat na funkční neurony, což představuje vhodnější alternativu k primárním neuronům a umožňuje vyhnout se etickým problémům spojeným s jejich použitím [2].
  • In vitro model neurodegenerativních onemocnění: Díky expresi molekulárních markerů, včetně dopaminergních neuronálních markerů, jsou buňky SH-SY5Y vhodné pro studium neurodegenerativních onemocnění, jako je Parkinsonova choroba.

Omezení

  • Nesynchronizovaný buněčný cyklus: SH-SY5Y buněčné kultury vykazují nesynchronizované buněčné cykly v nediferencovaném stavu [3].
  • Nedefinovaný stav diferenciace: SH-SY5Y buňky mají nedefinovaný stav diferenciace, který se pohybuje od nádorového stavu neuroblastomu až po postmitotické neurony nebo nervové progenitorové buňky. Nevykazují molekulární markery, které mají zralé neuronové buňky [4].

Buňky SH-SY5Y pro in vitro neurofarmakologii a objevování léčiv

Použití buněk SH-SY5Y

Výzkum neurodegenerativních onemocnění: SH-SY5Y buňky se používají ke studiu neurodegenerativních onemocnění, jako je Alzheimerova a Parkinsonova choroba. V jedné studii byly například buňky SH-SY5Y ošetřeny amyloidním peptidem β 1-42, aby byl vytvořen in vitro model Alzheimerovy choroby. Vytvořená buněčná linie byla poté transfekována s pcDNA-17A a shRNA 17A, aby se zkoumal účinek dlouhé nekódující RNA 17A na buňky podobné Alzheimerově chorobě. Studie ukázala, že LncRNA-17A reguluje apoptózu a autofagii buněk SH-SY5Y napodobujících Alzheimerovu chorobu [5].

Vývoj léků: Buňky SH-SY5Y se používají ke screeningu a ověřování léčivých látek z hlediska jejich terapeutického účinku proti neurodegenerativním onemocněním. Například studie provedená v roce 2021 vyvolala v buňkách SH-SY5Y parkinsonismus pomocí herbicidu (paraquat) a poté tyto buňky použila ke zkoumání terapeutického potenciálu flavonoidu naringeninu. Tato sloučenina prokázala ochranný účinek proti neurodegeneraci a neurotoxicitě zprostředkované Parkinsonovou chorobou na buněčných modelech, což naznačuje její potenciál pro vývoj léčby PD [6].

Výzkumné publikace s buňkami SH-SY5Y

Existuje mnoho výzkumných studií týkajících se buněk SH-SY5Y. V této části se budeme věnovat několika významným příkladům.

Zdroje pro buňky SH-SY5Y: Zdroje: protokoly, videa a další materiály

O této známé neuroblastomové buněčné linii je k dispozici několik online zdrojů. Tyto zdroje vás mohou poučit o zacházení s kulturami SH-SY5Y a jejich údržbě.

Protokoly buněčných kultur

Následující webové články vám pomohou seznámit se s metodami kultivace, zmrazování a rozmrazování buněk SH-SY5Y.

Očekáváme, že tento článek poskytne přínosné informace týkající se manipulace s buňkami SH-SY5Y, jejich kultivace a použití ve výzkumných studiích; pokud chcete pracovat s touto neuroblastomovou buněčnou linií, zvažte objednání u nás.

Buněčná linie SH-SY5Y: Často kladené otázky

Odkazy

  1. Carvajal-Oliveros, A., et al., Buněčná linie BE (2)-M17 má lepší dopaminergní fenotyp než linie SH-SY5Y tradičně používaná pro výzkum Parkinsonovy choroby, která je převážně serotonergní. IBRO Neuroscience Reports, 2022. 13: p. 543-551.
  2. Kovalevich, J. a D. Langford, Considerations for the use of SH-SY5Y neuroblastoma cells in neurobiology (Úvahy o využití neuroblastomových buněk SH-SY5Y v neurobiologii). Neuronal cell culture: methods and protocols, 2013: s. 9-21.
  3. Martin, E.-R., J. Gandawijaya a A. Oguro-Ando, A novel method for generating glutamatergic SH-SY5Y neuron-like cells utilizing B-27 supplement. Frontiers in Pharmacology, 2022: s. 4042.
  4. Feles, S., a další, Zjednodušení kultivačních podmínek pro neuroblastomovou buněčnou linii SH-SY5Y: předpoklad pro funkční studie. Methods and Protocols, 2022. 5(4): p. 58.
  5. Wang, X., M. Zhang a H. Liu, LncRNA17A reguluje autofagii a apoptózu buněčné linie SH-SY5Y jako in vitro modelu Alzheimerovy choroby. Bioscience, biotechnology, and biochemistry, 2019. 83(4): p. 609-621.
  6. Ahmad, M.H., et al., Naringenin zmírňuje paraquatem indukovanou ztrátu dopaminergních neuronů v buňkách SH-SY5Y a v krysím modelu Parkinsonovy choroby. Neuropharmacology, 2021. 201: p. 108831.

Zjistili jsme, že se nacházíte v jiné zemi nebo používáte jiný jazyk prohlížeče, než je aktuálně zvolený. Chcete přijmout navrhované nastavení?

Zavřít