iPSC-hDPSC

要改进细胞分离和再接种过程，请遵循以下步骤：

1. 去除用过的培养基，用 PBS（不含钙和镁）冲洗细胞。
2. 按照生产商的说明加入分离液并使其发挥作用。
3. 小心地向细胞中加入新鲜培养基。
4. 轻轻解离细胞，确保将损伤降至最低。
5. 在一个新的 6 孔培养板上涂上玻璃粘合素，将解离的细胞播种到两个孔中进行进一步培养。

为确保细胞的最佳生长和实验的一致性，建议在细胞适应培养条件后使用 5,000 至 10,000 cells/cm² 的播种密度。

1. 确认小瓶在运送时仍处于深度冷冻状态，因为细胞是用干冰运送的，以便在运输过程中保持最佳温度。

2. 收到后，立即将冻存瓶保存在低于 -150°C 的温度下，以确保细胞的完整性；如果需要立即培养，则进行步骤 3。

3. 如需立即进行培养，可将冻存瓶浸入 37°C 的水浴中，加入清水和抗菌剂，轻轻搅拌 40-60 秒，直至残留一小块冰，迅速解冻冻存瓶。

4. 在流动罩内无菌条件下进行所有后续步骤，打开前用 70% 乙醇消毒冷冻瓶。

5. 小心打开消毒瓶，将细胞悬浮液转移到装有 8 毫升室温培养基的 15 毫升离心管中，轻轻搅拌。

6. 将混合物以 300 x g 离心 3 分钟，分离细胞，小心弃去含有残留冷冻培养基的上清液。

7. 用 10 毫升新鲜培养基轻轻重悬细胞团。对于粘附细胞，将悬浮液分装在两个 T25 培养瓶中；对于悬浮培养，将所有培养基转移到一个 T25 培养瓶中，以促进细胞的有效相互作用和生长。

8. 坚持既定的亚培养方案，以继续生长和维持细胞系，确保可靠的实验结果。

37°C, 5%_CO2, 加湿环境。

冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装，以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。

冷冻保存的细胞系用干冰装运，并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后，应立即检查容器，并立即将小瓶转移到适当的储藏室。

如需长期保存，可将样品瓶放入气相液氮中，温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。

使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。

为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染，每天都要对细胞培养物进行目视检查。