RAG 细胞
一般信息
| 说明 | RAG 细胞系是一种抗 8-氮杂鸟嘌呤的非逆转突变体,来源于 BALB/c 小鼠的肾腺癌。该细胞系是通过动物到组织培养的交替传代来富集致瘤群体,同时剔除正常的基质成纤维细胞。RAG 细胞的形态从卵球形到上皮样,胞质突起明显,由于缺乏酶,对次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)依赖性选择方法有抵抗力。这种抗性促进了它们在体细胞杂交实验的生化选择系统中的应用。 由于 RAG 细胞与使用灭活仙台病毒的融合程序兼容,因此在体细胞融合研究中被广泛用作亲本系。与 LM(TK-) 或 WI-38 等其他细胞系融合后,杂交种保留了标记染色体,并表现出代谢缺陷的生化互补性。这些杂交种有助于绘制基因调控元件图谱和研究基因表达,特别是肾脏相关酶,如 ES-2 酯酶。RAG 杂交种为染色体的种间和种内分离以及功能基因组学提供了见解。 除了在杂交研究中的作用外,RAG 细胞还是研究基因表达的表观遗传调控的模型。涉及 RAG 的杂交细胞通常会根据特定染色体的保留或缺失情况,表现出特定遗传性状的消亡和重新表达。这使得 RAG 细胞系成为了解肿瘤细胞基因调控动态和染色体稳定性的重要工具。 |
|---|---|
| 有机体 | 鼠标 |
| 组织 | 肾脏 |
| 疾病 | 小鼠肾癌 |
| 同义词 | 抹布 |
特点
| 品种/亚种 | BALB/c |
|---|---|
| 形态学 | Amoeboid |
| 生长特性 | 附着物 |
监管数据
| 引用 | RAG(Cytion 目录号 305190) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 10090 |
| CellosaurusAccession | CVCL_3575 |
生物分子数据
| 蛋白质表达 | 肾特异性酯酶-2(ES-2) |
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处理
| 培养基 | EMEM(MEM Eagle),w:2 mM L-谷氨酰胺,w:2.2 g/L NaHCO3,w:EBSS(Cytion 文章编号 820100a)。 |
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| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS 和 1% NEAA |
| 解离试剂 | Accutase |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 分割比率 | 1:2 至 1:5 |
| 流体更新 | 每周 2 至 3 次 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
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| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 冷冻程序 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制与分子分析
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
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