PLAT-E细胞
一般信息
| 说明 | Plat-E(Platinum-E)是一种基于人胚胎肾293T细胞构建的逆转录病毒包装细胞系。该细胞系的开发旨在提供一个稳定且高效的系统,用于瞬时生产高滴度的亲肠道逆转录病毒。 该细胞系采用新型包装构建体构建,其中病毒结构基因(gag-pol 和 env)的表达由人类 EF1α 启动子驱动,该启动子在 293T 细胞中的活性远高于传统的 MuLV 长末端重复序列(LTR)启动子。这种设计确保了强大的转录活性,并支持高效逆转录病毒组装和包装所需病毒组分的高水平生产。 Plat-E细胞是通过依次稳定转染pEnv-IRES-puror和pGag-pol-IRES-bsr构建体获得的,这些构建体通过内部核糖体进入位点(IRES)将病毒基因与抗生素耐药性标记物相连。这种配置确保只有表达必需病毒基因的细胞才会获得抗生素耐药性,从而能够筛选出高表达亚克隆。 在嘌呤霉素和布拉西定双重筛选条件下培养时,所得 Plat-E 细胞系在至少四个月内能持续产生滴度高达 1 × 10⁷ 感染单位/毫升的逆转录病毒。Northern 印迹、逆转录酶活性及流式细胞术分析证实,与 Bosc23 和 Phoenix-E 等前代包装细胞系相比,Plat-E 表现出显著更高的 gag-pol 和 env 表达水平。 Plat-E 的构建设计通过将包装构建体仅限于病毒结构基因的必要编码区,并将其分离到不同的质粒上,从而最大限度地降低了产生具有复制能力的逆转录病毒(RCR)的风险。这种设计需要至少三次重组事件才能产生 RCR,从而提高了生物安全性。 Plat-E 已在基因转移应用中证明其有效性,包括对 T 细胞和肥大细胞等原代细胞的高效转导。其性能和长期稳定性使其成为基础研究和临床前基因治疗开发中生产逆转录病毒载体的可靠平台。 |
|---|---|
| 有机体 | 人类 |
| 组织 | 胎儿肾脏 |
| 同义词 | 铂金-E |
特点
| 年龄 | 胎儿 |
|---|---|
| 性别 | 女性 |
| 生长特性 | 附着物 |
监管数据
| 引用 | PLAT-E(Cytion 产品编号 305855) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_B488 |
| 转基因生物现状 | GMO-S1:该逆转录病毒包装细胞系(PLAT-E)含有在EF1α启动子控制下编码gag-pol和env的构建体,可用于生产亲嗜胚细胞型逆转录病毒颗粒。这些修饰在源自HEK293T的细胞中稳定存在。此分类仅适用于德国境内,在其他地区可能有所不同。 |
生物分子数据
| 突变概况 |
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处理
| 培养基 | RPMI 1640,w:2.0 mM 稳定谷氨酰胺,w:2.0 g/L NaHCO3(Cytion 文章编号 820700a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS |
| 解离试剂 | Accutase |
| 播种密度 | 1 至 4 × 10⁴ 个细胞/cm² |
| 流体更新 | 每周 2 至 3 次 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
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| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制与分子分析
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
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分析证书(CoA)
| 地段编号 | 证书类型 | 日期 | 目录编号 |
|---|---|---|---|
| 305855-240226 | 分析证书 | 27. Mar. 2026 | 305855 |