NRK-EGFP3-Seh1 细胞
一般信息
| 说明 | NRK-EGFP3-Seh1细胞系是从正常大鼠肾脏(NRK)细胞中提取的克隆稳定细胞系。这种细胞系是通过转染编码 EGFP3-Seh1 融合蛋白的环形质粒产生的。转染后,对细胞进行抗药性筛选,确保建立表达所需构建体的稳定群体。 该群体中约有 50%的细胞表达 EGFP3-Seh1,这是一种融合蛋白,结合了增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和核孔复合体的蛋白成分 Seh1。EGFP 的存在有助于可视化和追踪细胞内的融合蛋白,使研究人员能够研究 Seh1 在各种细胞过程中的动态和功能。不过,EGFP3-Seh1 在该细胞系中的表达表现出一定的差异,表明群体中单个细胞的表达水平存在差异。 这种细胞系特别适用于涉及核孔复合体组装、核胞浆转运以及 Seh1 在这些过程中的作用的研究。EGFP 提供的荧光可用于活细胞成像和蛋白质定位及相互作用的实时分析,使 NRK-EGFP3-Seh1 成为细胞生物学和分子研究的重要工具。 |
|---|---|
| 有机体 | 老鼠 |
| 组织 | 肾脏 |
| 同义词 | NRK EGFP3-Seh1 |
特点
| 品种/亚种 | 奥斯本-门德尔 |
|---|---|
| 形态学 | 纺锤形纤维母细胞 |
| 生长特性 | 单层,粘附 |
监管数据
| 引用 | NRK-EGFP3-Seh1(Cytion 目录号 500731) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 10116 |
| CellosaurusAccession | CVCL_AV94 |
| 存款人 | 艾伦伯格实验室(EMBL) |
生物分子数据
| 表达的受体 | 表皮生长因子(EGF),增殖刺激活性(MSA) |
|---|---|
| 蛋白质表达 | EGFP3-Seh1 |
| 产品 | Seh1(SEH1 类核卟啉) |
处理
| 培养基 | DMEM,w:4.5 克/升葡萄糖,w:4 毫摩尔 L-谷氨酰胺,w:3.7 克/升 NaHCO3,w:1.0 毫摩尔丙酮酸钠(Cytion 编号 820300a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS、0.5 mg/mL G418 |
| 解离试剂 | Accutase |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 分割比率 | 建议比例为1:3至1:4 |
| 播种密度 | 2至4×10⁴个细胞/平方厘米 |
| 流体更新 | 每周 2 至 3 次 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
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| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 冷冻程序 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制/基因图谱/HLA
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
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