MDCK-SIAT1 细胞
一般信息
| 说明 | MDCK-SIAT1 细胞系是马丁-达比犬肾 (MDCK) 细胞的改良版,经改造后可表达更高水平的人类 2,6-硅氨酰基转移酶 (SIAT1)。这种酶负责在糖蛋白和糖脂上的半乳糖上添加α-2,6连接的硅醛酸。进行这种改造是为了增加α-2,6-连接的硅烷酸的表达,而硅烷酸是人类流感病毒的主要受体。这种提高是至关重要的,因为它使 MDCK-SIAT1 细胞与人类气道上皮细胞更加相似,而人类气道上皮细胞中天然就有高浓度的这些受体。因此,这些细胞为研究人类流感病毒及其与潜在抗病毒化合物的相互作用提供了更贴近生理的模型。 MDCK-SIAT1 细胞的重要应用之一是评估流感病毒对神经氨酸酶抑制剂(NAIs)(如奥司他韦)的敏感性。由于α-2,6-连接的硅酸增加,MDCK-SIAT1 细胞对 NAIs 的敏感性比未修饰的 MDCK 细胞高。这使它们成为检测对这些抑制剂耐药性的绝佳工具,尤其是在低通过数的人流感病毒临床分离株中。MDCK-SIAT1 细胞系可以更准确地进行药物疗效和病毒受体相互作用的体外研究,为抗病毒疗法的开发和耐药机制提供有价值的见解。 |
|---|---|
| 有机体 | 犬类 |
| 组织 | 肾脏 |
特点
| 品种/亚种 | 可卡犬 |
|---|---|
| 年龄 | 成人 |
| 性别 | 女性 |
| 形态学 | 上皮细胞 |
| 生长特性 | 附着物 |
监管数据
| 引用 | MDCK-SIAT1(Cytion 目录号 602281) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 2 |
| NCBI_TaxID | 9615 |
| CellosaurusAccession | CVCL_Z936 |
| 转基因生物现状 | GMO-S1:这种犬上皮肾细胞系(MDCK-SIAT1)含有编码人类 2,6-ialyltransferase(SIAT1)的 pcDNA3.1GS 构建物,可表达类人的 sialylation 模式。该插入物可稳定存在于 MDCK 细胞中。此分类仅适用于德国国内,其他地区可能有所不同。 |
生物分子数据
| 蛋白质表达 | 转染 ST6 β-半乳糖苷α-2,6-苷基转移酶 1 (ST6GAL1, SIAT1) |
|---|
处理
| 培养基 | DMEM,w:4.5 克/升葡萄糖,w:4 毫摩尔 L-谷氨酰胺,w:3.7 克/升 NaHCO3,w:1.0 毫摩尔丙酮酸钠(Cytion 编号 820300a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS 和 1mg/ml G418 |
| 解离试剂 | Accutase |
| 加倍时间 | 21 至 31 小时 |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 播种密度 | 2至4×10⁴个细胞/平方厘米 |
| 流体更新 | 每周 2 至 3 次 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
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| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 冷冻程序 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制与分子分析
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
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分析证书(CoA)
| 地段编号 | 证书类型 | 日期 | 目录编号 |
|---|---|---|---|
| 602281-160924 | 分析证书 | 23. May. 2025 | 602281 |
| 602281-261023 | 分析证书 | 23. May. 2025 | 602281 |
| 602281-020326 | 分析证书 | 08. Apr. 2026 | 602281 |