LLC-MK2(原始)细胞
一般信息
| 说明 | LLC-MK2是一种从成年恒河猴(*Macaca mulatta*)肾组织中建立的连续上皮细胞系。该细胞系最初是在 20 世纪 50 年代通过胰蛋白酶化 6 只恒河猴的肾脏组织而分离出来的。LLC-MK2 细胞具有粘附生长特性,对各种病毒(包括牛病毒性腹泻病毒 1、人脊髓灰质炎病毒 1 和人柯萨奇病毒 B4)具有高度敏感性,因此被广泛用于病毒学研究。该细胞系的来源和对病毒的敏感性使其成为研究病毒复制和细胞致病效应的理想模型。 众所周知,LLC-MK2 细胞系可在化学定义的无血清培养基中培养,从而实现可控的实验条件。研究表明,这些细胞可以适应无血清条件而不影响生长,尽管最初的培养物是在含有大量马血清的培养基中维持的。适应化学定义的培养基对病毒学研究尤其有利,因为它能最大限度地减少血清带来的变异性,并支持细胞系的长期维持。此外,LLC-MK2 细胞系对病毒的敏感性与原代猴肾细胞相当,因此是病毒滴定和疫苗生产研究的可靠工具。 除了在病毒学方面的作用外,LLC-MK2 还具有致瘤潜力。虽然它具有某些转化特性,如在软琼脂中生长的能力,但在体内模型中不会形成肿瘤,这表明其致瘤风险有限。这一特性进一步突出了它作为体外研究的模型细胞系的实用性,同时也证实了它不适合用于治疗或体内应用。 |
|---|---|
| 有机体 | 恒河猴 |
| 组织 | 肾脏 |
| 同义词 | Llc-Mk2, LLC-MK-2, LLC-MK2 Original, LLCMK2, LLcMK2, Lilly Laboratories Culture-Monkey Kidney 2 |
特点
| 年龄 | 成人 |
|---|---|
| 形态学 | 上皮细胞 |
| 生长特性 | 附着物 |
监管数据
| 引用 | LLC-MK2(Cytion 目录编号 305149) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 9544 |
| CellosaurusAccession | CVCL_3009 |
生物分子数据
| 蛋白质表达 | 凝血酶原激活剂 |
|---|
处理
| 培养基 | 培养基 199,w:2.7 mM 稳定谷氨酰胺,w:2.2 g/L NaHCO3,w:EBSS(Cytion 文章编号 820101a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 1% 马血清 |
| 解离试剂 | Accutase |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 播种密度 | 4 × 10⁴ 个细胞/平方厘米 |
| 流体更新 | 每周 2 至 3 次 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
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| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 冷冻程序 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制与分子分析
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
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分析证书(CoA)
| 地段编号 | 证书类型 | 日期 | 目录编号 |
|---|---|---|---|
| 305149-280525 | 分析证书 | 21. Jul. 2025 | 305149 |
| 305149-080823 | 分析证书 | 22. Jan. 2026 | 305149 |