HepG2细胞——一种肝癌研究资源
Hep-G2是一种源自一名15岁白人男性肝细胞癌肝组织的肝癌细胞系。这些细胞常用于药物代谢和肝毒性研究。 尽管HepG2细胞增殖率高且具有上皮样外观,但它们不具致瘤性,并能执行多种分化的肝脏功能。1975年,研究人员从肝细胞癌中分离出HepG2细胞,使其成为首个展现肝细胞关键特征的肝细胞系。 与此前建立的、缺乏关键肝细胞标志物的SK-Hep1细胞系不同,HepG2细胞能够分泌多种血浆蛋白,并为研究人类肝细胞表面域的细胞内动态提供了宝贵的模型。 这些细胞呈现上皮样形态,典型染色体数为55,且可受人生长激素刺激。
- 培养基
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- 倍增时间
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- 生长类型
- 贴壁
- 生物安全等级
- BSL-1
HepG2细胞的特征
原代肝细胞通常呈立方形,且通常含有两个细胞核。相比之下,HepG2细胞具有上皮样形态,每个细胞仅含一个细胞核,染色体数为48至54条。 尽管HepG2细胞的细胞总蛋白含量可达25%,但其细胞体积大于正常肝细胞,约占细胞总蛋白的10%。细胞蛋白是细胞内的关键执行者,负责执行基因所指定的功能。
肿瘤细胞(包括染色体数目异常的细胞)常表现出核数增加,每细胞可达七个。由于其在体外具有高度分化能力,HepG2细胞为研究人类肝细胞内胆小管、窦状膜蛋白及脂质的细胞内转运与动态提供了理想的模型。
HepG2细胞的平均直径约为10-20 µm,虽小于直径为15 µm的肝细胞,但与直径范围为10-20 µm的肝母细胞瘤(HB)肿瘤细胞相当。
HepG2 遗传学
Hep-G2 细胞系表现出多种易位,包括 1 号和 21 号染色体短臂之间的易位、2 号、16 号和 17 号染色体的三体以及 20 号染色体的四体。 还观察到4号染色体q3区域的缺失,这与肝母细胞瘤(HB)中常见的t(1;4)易位以及2号和20号染色体三体等其他染色体异常有关。 HepG2 细胞的染色体数在 50 到 60 之间,表明其核型为超二倍体,而有些病例的染色体数超过 100,其特征是四倍体增大。 HepG2细胞含有约7.5 pg的DNA,比平均体细胞多15%。相比之下,原代肝细胞呈立方体形状,通常含有两个细胞核[1]。
HepG2细胞的突变谱
HepG2细胞系携带TERT启动子区域的C228T突变,该突变也存在于肝细胞癌(HCC)和肝母细胞瘤(HB)中。 该突变通过保护癌细胞的端粒,促进了细胞的不死化。此外,HepG2细胞携带野生型TP53基因,该基因对抑制人类癌症至关重要,因其参与细胞周期阻滞、凋亡及衰老过程。该基因的突变可促进细胞增殖。
HepG2 细胞参与了多个信号通路,包括细胞生长失调、胎儿和胚胎 HB 等生存通路,以及 Wnt/β-catenin 通路。 此外,该细胞系具有CTNNB1基因第三外显子的特征性缺失,这与上皮型肝细胞癌中观察到的情况完全一致[2,3]。
HepG2 肝细胞癌细胞在肝脏研究中的概述
源自人类肝癌的HepG2细胞已成为研究肝脏功能及疾病(包括肝细胞癌)的宝贵工具。这些肝细胞系有助于深入了解人类肝细胞在各种实验条件下的细胞反应。 在HepG2细胞中使用荧光素酶报告质粒,对于追踪基因表达和细胞转染尤为有效,这些技术在代谢研究中至关重要,例如研究乙醇对肝细胞的影响。
利用HepG2细胞研究病毒感染与肝脏疾病
HepG2 和 Huh7 等永生化肝肿瘤细胞系在病毒感染研究中至关重要,它们能够展示丁型肝炎病毒 (HDV) 的完整细胞周期复制以及乙型肝炎病毒 (HBV) 的表达 [5,6]。 与此同时,HepaRG细胞系在阐明HBV进入机制方面发挥着关键作用[7]。 HepG2 细胞还被用于研究各种人类肝脏疾病,从进行性家族性肝内胆汁淤积症 (PFIC) 和杜宾-约翰逊综合征等遗传性疾病,到与细胞毒性和致突变剂相关的环境和饮食研究,以及药物靶向和肝癌发生的研究 [8,9]。 其应用范围还扩展到生物人工肝装置的试验。
组织工程中 HepG2 细胞与生物材料的相互作用
HepG2 细胞与各种生物材料的相互作用在组织工程中至关重要。胶体探针技术等方法通过测量细胞粘附特性来帮助理解这些相互作用,这些特性对于确定细胞存活率、开发支架和精确的肝组织模型至关重要。
基于 HepG2 细胞模型的细胞行为与创新
研究基于HepG2细胞模型的细胞行为对肝病研究至关重要。三维球体细胞培养技术的进步促成了HepG2细胞球体的建立,这种模型更具生理相关性,能真实模拟正常肝细胞。 这些代谢活性增强的3D模型表明,HepG2细胞有望作为肝母细胞瘤的模型,并在癌症治疗研究中具有重要意义,特别是在模拟肝肿瘤和测试新型治疗方法方面[10-12]。
HepG2与其他肿瘤细胞系的比较及特征
HepG2是最常用的肝肿瘤细胞系之一,在约40种可用的肝肿瘤细胞系中,因其在科学研究中的广泛应用而被选中[13]。 尽管与正常肝细胞相比,HepG2 对某些细胞色素 P450 酶的表达较弱或缺失,但其代谢特征推动了人们为更好地进行药物代谢研究而对该细胞系进行改造的努力 [13]。 与 MCF7、PC3、143B 和 HEK293 等肿瘤细胞系相比,HepG2 细胞表现出独特的氨基酸含量特征,这些特征显著影响蛋白质的合成和分泌,突显了其独特的代谢途径 [14]。
利用HepG2细胞探索肝病研究
HepG2细胞的传代
以下是使用Accutase从细胞培养瓶中剥离贴壁细胞的五个步骤:
- 从细胞培养瓶中移除培养基,并使用不含钙镁的PBS冲洗贴壁细胞。T25培养瓶使用3-5毫升PBS,T75培养瓶使用5-10毫升PBS。
- 向细胞培养瓶中加入Accutase,T25培养瓶每瓶1-2毫升,T75培养瓶每瓶2.5毫升。确保Accutase完全覆盖整个细胞层。
- 将培养瓶在室温下孵育8-10分钟。
- 用 10 毫升新鲜培养基小心地将细胞重悬。
- 将重悬的细胞以 300xg 离心 5 分钟,用新鲜培养基重悬,然后分装到装有新鲜培养基的新培养瓶中。
HepG2细胞的未来前景
在提升细胞色素表达方面取得突破性进展的同时,挖掘HepG2细胞系全部潜能的探索仍在继续。研究人员还正在探索三维球体细胞培养的可能性,这种培养体系能提供更贴近生理状况的模型。 与二维细胞相比,三维球体HepG2模型中的代谢活性(包括细胞色素)显著更高,这使我们更接近于建立一个能够模拟正常肝细胞的模型。此外,探索导致细胞表面蛋白分布异常的动态过程,将为更深入地理解肝脏疾病铺平道路。
HepG2细胞:了解其在生物医学研究中的作用与特点——常见问题解答
参考文献
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- Woodfield, S.E., Shi, Y., Patel, R.H., Chen, Z., Shah, A.P., Srivastava, R.K., Whitlock, R.S., Ibarra, A.M., Larson, S.R., 萨拉比亚(Sarabia),S.F. 等。MDM4抑制:一种在肝母细胞瘤中重新激活p53的新型治疗策略。《科学报告》(Sci. Rep.),2021, 11, 2967.
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