HCT116-Luc 细胞
一般信息
| 说明 | HCT 116-Luc 是人结直肠癌细胞系 HCT 116 的萤火虫荧光素酶表达衍生物。 该细胞系是通过转导表达蛾萤(Photinus pyralis)萤火虫荧光素酶的构建体以及嘌呤霉素抗性盒(pac)而产生的,因此报告基因的表达是恒定的,而非依赖于特定信号通路。 因此,生物发光信号与存活细胞数成正比,这使得该模型适用于体内肿瘤负荷的无创追踪,以及体外基于培养板的细胞存活率和增殖率的快速定量分析。 该衍生细胞系保留了亲本 HCT 116 细胞系的特征,包括伴有 DNA 错配修复缺陷的微卫星不稳定性、野生型 TP53 以及接近二倍体的核型。其突变背景包括 KRAS p.Gly13Asp、 PIK3CA p.His1047Arg、可稳定β-连环蛋白并驱动持续性Wnt信号传导的杂合性CTNNB1 p.Ser45del突变,以及TGFBR2和ACVR2A基因中典型的纯合性移码突变(常见于MSI型结直肠癌)。 此外,CDKN2A、EP300、BRCA2和PPM1D基因中也存在其他变异。报告基因的稳定整合使得在同一动物体内对原位和皮下异种移植瘤进行纵向成像成为可能,从而减少了研究队列规模,并免除了在每个时间点进行终点评估的必要。 在常规扩增过程中,采用嘌呤霉素筛选来维持转基因。 该细胞系广泛应用于肿瘤学临床前研究、细胞毒性和靶向药物的疗效研究、转移和肿瘤归巢模型,以及高通量细胞毒性筛选——在这些应用中,发光读数比比色法检测具有更宽的动态范围。 由于萤火虫蛋白的表达不受诱导调控,该信号反映的是细胞数量和代谢状态,而非特定通路的活性,因此,改变 ATP 水平或细胞代谢的化合物可能会影响发光,而与细胞杀伤无关。 建议采用正交存活率检测进行确认,并在解释对DNA损伤剂和免疫调节治疗的反应时,应考虑HCT 116细胞系在错配修复缺陷方面的背景。 |
|---|---|
| 有机体 | 人类 |
| 组织 | 结肠 |
| 疾病 | 结肠癌 |
特点
| 年龄 | 48 年 |
|---|---|
| 性别 | 男 |
| 种族 | 高加索人 |
| 形态学 | 上皮样 |
| 生长特性 | 附着物 |
监管数据
| 引用 | HCT116-Luc(Cytion 产品编号 305787) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_C8WT |
| 转基因生物现状 | GMO-S1:该细胞系含有通过复制缺陷型慢病毒转导引入的、稳定整合的萤火虫荧光素酶报告基因盒(Luc2,经密码子优化)。 由此获得的多克隆细胞群在嘌呤霉素(1–5 µg/mL)筛选条件下维持。需采用S1级生物安全防护措施。此分类仅适用于德国境内,其他地区可能有所不同。 |
生物分子数据
| 抗原表达 | Luc2(萤火虫,密码子优化版) |
|---|---|
| 突变概况 | 突变:p.Lys437Argfs*5,纯合子;突变:p.Ile2675Aspfs*6,杂合子;突变:p.Arg24Serfs*20,杂合子; 突变:p.Ser45del,杂合子;突变:p.Met1470Cysfs*22,杂合子;突变:p.Asn1700Thrfs*9,杂合子; 突变:p.Gly13Asp,杂合子;突变:p.His1047Arg,杂合子;突变:p.Leu450Ter,杂合子;突变:p.Lys128Serfs*35,纯合子 |
处理
| 培养基 | McCoys 5a,w:3.0 克/升葡萄糖,w:稳定谷氨酰胺,w:2.0 毫摩尔丙酮酸钠,w:2.2 克/升 NaHCO3(Cytion 文章编号 820200a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS |
| 解离试剂 | Accutase |
| 播种密度 | 1-3×10⁴/cm² |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
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| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制与分子分析
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
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| 产品变体: | 悬浮液 |
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分析证书(CoA)
| 地段编号 | 证书类型 | 日期 | 目录编号 |
|---|---|---|---|
| 305787-080526 | 分析证书 | 24. Jun. 2026 | 305787 |
| 305787-080526 | 分析证书 | 23. Sep. 2026 | 305787 |