HBL-100 细胞
一般信息
| 说明 | HBL-100 是一种人类乳腺上皮细胞系,最初来源于一位哺乳母亲的乳汁。乳汁是在产妇分娩后三天收集的,尽管供体没有乳房病变的迹象,也没有乳腺癌家族史,但细胞在第 7 个阶段出现了异常核型。该细胞系的显著特点是能合成少量乳糖,并能通过增加酪蛋白的产生对催乳素或雌激素的刺激做出反应。显微镜分析(如电子显微镜)证实,这些细胞中存在微绒毛、绒毛纤维和脱绒毛小体,突出了其典型的上皮特征。 然而,HBL-100 细胞系在鉴定和特征描述方面遇到了重大的复杂问题。它被发现含有一条 Y 染色体,这表明该细胞系最初被认为是雌性的,从而造成了错误的鉴定。进一步的复杂性来自于细胞系中 SV40 基因组序列的存在,这与早先认为它是自发永生化的观点相矛盾。这些发现引发了有关 HBL-100 起源和基因构成的争论,使其成为一种在未彻底验证其特征和起源的情况下进行研究的问题细胞系。 |
|---|---|
| 有机体 | 人类 |
| 组织 | 乳房 |
| 疾病 | 癌症 |
| 同义词 | hbl 100, hbl100 |
特点
| 年龄 | 27 年 |
|---|---|
| 性别 | 女性 |
| 种族 | 高加索人 |
| 形态学 | 上皮样 |
| 生长特性 | 单层,粘附 |
监管数据
| 引用 | HBL-100(Cytion 目录号 300178) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_4362 |
生物分子数据
| 抗原表达 | HLA A1、A10、A11、B7、B8 |
|---|---|
| 同工酶 | G6PD,B,PGM1,1,PGM3,2,ES-D,1,Me-2,0,GLO-1,2,AK-1,1-2,表型频率乘积: 0.0008 |
| 致肿瘤性 | 是的,在裸鼠体内。在低于 35 倍时,该品系在裸鼠体内不致瘤,但会在软琼脂中形成菌落。据报道,肿瘤致病性在通过 35 次以上时会增强。 |
| 病毒 | 据报道,这些细胞中可能含有与马森-辉瑞猴病毒(MPMV)相似或相同的 D 型逆转录病毒。 |
| 逆转录酶 | 积极的 |
| 倍性状态 | 非整倍体 |
| MSI 状态 | 稳定 (MSS) |
| 核型 | 干系染色体数接近三倍体,模数为 67 条,2S 成分占 0.6%。大多数染色体互补体由约 39 条正常染色体和 28 条标记染色体组成。标记染色体如 2q、11q+、11q、t(2q.12)、t(2q.5q?)、t(6p?.16)、16pt 及其他许多标记染色体在大多数分裂相中都很常见。正常染色体 11、14、15 和 16 不存在。2、12、17 和 19 是单体,x 是双体。淀粉样蛋白(一种性染色体特异性聚合酶链反应检测方法,可区分 x 染色体特异性产物和 Y 染色体特异性产物)的 DNA 分析表明,该推测为雌性的细胞系中存在 Y 染色体。通过 QM 染色、C 带和 FISH(使用人类 Y 染色体的全染色体涂料探针)确认了一般结果。 |
处理
| 培养基 | McCoys 5a,w:3.0 克/升葡萄糖,w:稳定谷氨酰胺,w:2.0 毫摩尔丙酮酸钠,w:2.2 克/升 NaHCO3(Cytion 文章编号 820200a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS |
| 解离试剂 | Accutase |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 播种密度 | 1 × 10⁴ 个细胞/平方厘米 |
| 流体更新 | 每周 2 至 3 次 |
| 解冻后恢复 | 解冻后,将细胞以5×10⁴个细胞/平方厘米的密度接种于培养皿中,使细胞从冷冻过程中恢复并至少贴壁24小时。 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
|
| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 冷冻程序 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制与分子分析
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
|---|---|
| HLA 等位基因 |
A*: '01:01:01, '02:01:01
B*: '08:01:01, '40:01:02
C*: '03:04:01, '07:01:01
DRB1*: '03:01:01, '15:01:01
DQA1*: '01:02:01, '05:01:01
DQB1*: '02:01:01, '06:02:01
DPB1*: '04:01:01
E: '01:01, '01:03
|
分析证书(CoA)
| 地段编号 | 证书类型 | 日期 | 目录编号 |
|---|---|---|---|
| 300178-619 | 分析证书 | 23. May. 2025 | 300178 |