E11 细胞
一般信息
| 说明 | E11 细胞系是一种高度特化的小鼠细胞系,用于荚膜细胞功能和肾病机制的高级研究。E11 细胞系来源于表达对温度敏感的 SV40 大 T 抗原变体的转基因小鼠肾小球,在 IFN 诱导的 H-2kb 启动子的调控下运行。这种独特的遗传框架有助于细胞根据环境温度进行有条件增殖,这与 T 抗原的受控表达相一致。 E11 细胞系的一个显著特点是其在大量传代过程中的表型稳定性。经过 40 多次传代后,E11 细胞仍能保持一致的表达和细胞特征,这已被证明是进行长期研究的无价之宝,而不会出现许多培养细胞系常见的表型漂移问题。这种稳定性提高了它们在需要细胞行为一致的重复性和扩展性生物实验中的应用。 在蛋白质表达方面,E11 细胞系表现出强大的特征,是进行荚膜特异性研究的必要条件。这种细胞能持续表达荚膜细胞裂隙隔膜结构的重要组成部分--肾素,以及其他多种荚膜细胞特异性蛋白,如 podocin、CD2AP 和 synaptopodin。这种全面的蛋白质表达方式有助于在受控的体外环境中研究荚膜细胞生物学,从而近似模拟体内条件。E11 细胞能形成广泛的细胞-细胞接触,这进一步强调了它们适合用于模拟肾脏滤过屏障功能。 |
|---|---|
| 有机体 | 鼠标 |
| 组织 | 肾脏 |
特点
| 品种/亚种 | (CBA/Ca x C57BL/10)Tg(H2KbtsA58) |
|---|---|
| 年龄 | 成人 |
| 性别 | 未说明 |
| 细胞类型 | 荚膜细胞 |
| 生长特性 | 附着物 |
监管数据
| 引用 | E11(Cytion 目录编号 400494) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 10090 |
| CellosaurusAccession | CVCL_5737 |
| 转基因生物现状 | GMO-S1:这种 Immorto 小鼠荚膜细胞系含有对温度敏感的 SV40 T 抗原构建体,可实现条件性永生化。此分类仅适用于德国境内,其他地区可能有所不同。 |
生物分子数据
| 蛋白质表达 | WT1、Lmx1b、肾素、NEPHI、FAT、P-cadherin、CD2AP、ZO-I、podocalyxin、podoplanin、synpo、podocin、TRPC6 和 GAPDH。 |
|---|
处理
| 培养基 | RPMI 1640,w:2.0 mM 稳定谷氨酰胺,w:2.0 g/L NaHCO3(Cytion 文章编号 820700a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS |
| 解离试剂 | Accutase |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 播种密度 | 接种T75细胞培养瓶,细胞密度为1×10⁴个细胞/平方厘米,用于增殖过程。将细胞置于33℃/5% CO₂环境中培养,直至培养瓶细胞汇合度达到约75%。 |
| 流体更新 | 每周 2 至 3 次 |
| 冷冻介质 | 我们使用完全生长培养基(包括 FBS)+10% DMSO 或 CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)作为冷冻保存培养基,以获得足够的解冻后存活率,CM-1(Cytion 商品目录编号 800100)含有优化的渗透保护剂和代谢稳定剂,可提高恢复能力并减少冷冻引起的应激。 |
| 解冻和培养细胞 |
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| 培养氛围 | 33°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 烧瓶涂层 | 无 |
| 冷冻程序 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制/基因图谱/HLA
| 无菌 | 使用基于 PCR 的检测方法和基于发光的支原体检测方法排除支原体污染。 为确保没有细菌、真菌或酵母菌污染,每天都要对细胞培养物进行目视检查。 |
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分析证书(CoA)
| 地段编号 | 证书类型 | 日期 | 目录编号 |
|---|---|---|---|
| 400494-1014SF | 分析证书 | 23. May. 2025 | 400494 |