A375-GFP
一般信息
| 说明 | A375-GFP 是人类恶性黑色素瘤细胞系 A375 的基因工程变体,可稳定表达增强型绿色荧光蛋白(eGFP)。 亲本 A375 细胞系源自一名成年患者的皮肤黑色素瘤,因其携带 BRAF V600E 突变,被广泛用作皮肤黑色素瘤的模型,特别适用于涉及致癌性 BRAF 信号传导的研究。 该突变导致 MAPK/ERK 通路的持续激活,从而促进细胞增殖和存活,使 A375 细胞成为研究 BRAF 和 MEK 抑制剂等靶向治疗的理想模型。这种表达 GFP 的衍生细胞系在保留上述分子和表型特征的同时,还支持基于荧光的应用。 eGFP报告基因的稳定整合使得在体外和体内系统中均可对A375-GFP细胞进行实时可视化观察。荧光成像有助于监测细胞增殖、迁移、侵袭和形态变化,并能追踪异种移植模型中的肿瘤生长和转移扩散。 与早期GFP构建体相比,这种增强型GFP变体具有更高的亮度和稳定性,即使在细胞数量较少的情况下也能实现灵敏检测。这使得A375-GFP在共培养实验、高通量成像平台以及需要对肿瘤细胞行为进行精确空间分辨率研究中尤为有用。 A375-GFP 保留了亲本黑色素瘤细胞系的侵袭性和增殖性表型,包括对 MAPK 通路抑制剂的响应性,以及在实验模型中的侵袭和转移能力。GFP 的加入扩展了其在药物筛选、活细胞成像以及肿瘤-微环境相互作用研究中的应用范围。 与其他报告基因标记的细胞系一样,建议针对具体的实验应用,对荧光稳定性及不同传代间的荧光一致性进行验证。 |
|---|---|
| 有机体 | 人类 |
| 组织 | 腿,皮肤 |
| 疾病 | 黑色素瘤 |
特点
| 年龄 | 54 年 |
|---|---|
| 性别 | 女性 |
| 种族 | 高加索人 |
| 生长特性 | 附着物 |
监管数据
| 引用 | A375-GFP(Cytion 产品编号 305665) |
|---|---|
| 生物安全等级 | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_QZ67 |
| 转基因生物现状 | GMO-S1:该人A375黑色素瘤细胞系含有通过慢病毒载体导入的增强型GFP表达构建体,用于荧光可视化。此分类仅适用于德国境内,在其他地区可能有所不同。 |
生物分子数据
| 抗原表达 | ZsGreen1(绿色荧光蛋白) |
|---|---|
| 突变概况 | 突变:BRAF,单点突变,p.Val600Glu (c.1799T>A),纯合子(源自亲本细胞系)。突变,CDKN2A,简单,p.Glu61Ter (c.181G>T) (p.Gly75Val, c.224G>T),纯合子(源自亲本细胞系)。突变,CDKN2A,简单,p.Glu69Ter (c.205G>T) (p.Gly83Val, c.248G>T),纯合子(源自亲本细胞系)。突变,TERT,简单,c.1-146C>T (c.250C>T) (C250T),未指定,注=位于启动子区域(源自亲本细胞系)。 |
处理
| 培养基 | DMEM,w:4.5 克/升葡萄糖,w:4 毫摩尔 L-谷氨酰胺,w:3.7 克/升 NaHCO3,w:1.0 毫摩尔丙酮酸钠(Cytion 编号 820300a)。 |
|---|---|
| 补充剂 | 在培养基中添加 10% FBS |
| 解离试剂 | Accutase |
| 亚培养 | 去除粘附细胞上的旧培养基,用不含钙和镁的 PBS 冲洗。T25 烧瓶用 3-5 毫升 PBS,T75 烧瓶用 5-10 毫升。然后用 Accutase 完全覆盖细胞,T25 烧瓶用 1-2 毫升,T75 烧瓶用 2.5 毫升。让细胞在室温下孵育 8-10 分钟,使其分离。孵育后,用 10 毫升培养基轻轻混合细胞使其重悬,然后用 300xg 离心 3 分钟。弃去上清液,用新鲜培养基重悬细胞,并将其转移到已装有新鲜培养基的新烧瓶中。 |
| 播种密度 | 1至3×10⁴个细胞/平方厘米 |
| 流体更新 | 每周 2 至 3 次 |
| 冷冻介质 | 作为冷冻保存培养基,我们使用完全生长培养基+10% DMSO,以获得足够的解冻后存活率。 |
| 解冻和培养细胞 |
|
| 培养氛围 | 37°C, 5%CO2, 加湿环境。 |
| 运输条件 | 冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂包装,以便在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。 |
| 储存条件 | 如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。 |
质量控制与分子分析
分析证书(CoA)
| 地段编号 | 证书类型 | 日期 | 目录编号 |
|---|---|---|---|
| 305665-200426 | 分析证书 | 24. Jun. 2026 | 305665 |