U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 細胞

USUSD$800.00*

產品以乾冰冷藏，並裝於低溫管中運送。每支低溫管通常含有 3 × 10^⁶ 個細胞（適用於貼壁細胞系）或 5 × 10⁶ 個細胞（適用於懸浮細胞系）（詳情請參閱該批次的分析證書）。

價格不含稅，另加運費

cryovial

產品編號： 300666

安全資料表

產品說明書

分析證明書 (CoA)

說明	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 是一種源自親本 U2OS 背景的基因工程人骨肉瘤細胞系，其中內源性 NUP133 基因座已透過 CRISPR/Cas9 介導的基因組編輯技術進行修飾，使其編碼 C 端 SNAPf 標籤。 NUP133 是 Y-複合體（NUP107-160 複合體）的核心成分，該結構亞複合體對於核孔複合體（NPC）的組裝與維持至關重要。透過將 SNAPf 編碼序列以同框方式導入內源性基因座，該融合蛋白可在原生調控機制下表達，從而維持生理性的表達水準與亞細胞定位。 SNAPf 標籤是 SNAP 標籤的一種快速標記變體，後者是一種經工程改造的 O6-烷基鳥嘌呤-DNA 烷基轉移酶，可與苯甲基鳥嘌呤結合的底物發生共價反應。這使得研究人員能夠利用細胞滲透性或非滲透性 SNAP 底物，對活細胞或固定細胞中的 Nup133 進行高度特異且多用途的螢光標記。在 U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 細胞中，該融合蛋白以點狀模式定位於核膜上，此模式為核孔複合體的特徵性表現。由於標記作用發生於內源性基因座，因此對核孔複合體（NPC）的化學計量比與結構的干擾極小，使此模型適合用於定量超解析度顯微鏡觀察、單分子追蹤，以及NPC組裝與周轉的動力學分析。此細胞系為研究核轉運、核-細胞質轉運動力學、間期及有絲分裂後核重組期間的核孔複合體（NPC）生物合成，以及孔架內 Y-複合體的結構組織，提供了一個穩健的平台。U2OS 細胞系具有扁平的形態和大核，有利於高解析度成像。 U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133 細胞特別適合用於脈衝追蹤標記實驗、相關光學與電子顯微鏡觀察，以及結合其他內源性標記的核孔蛋白或運輸因子所進行的多色成像方法。
生物體	人類
組織	骨頭
疾病	骨肉瘤
轉移部位	原發性腫瘤部位（骨）
應用	核孔複合體（NPC）生物學； Nup133/Y-複合體結構；NPC生物合成；核質運輸；超解析度顯微鏡（STORM/PALM/STED）；單粒子追蹤；脈衝-追蹤 SNAP 標記法；相關光學與電子顯微鏡技術；NPC 定量化學計量學

年齡	15年
性別	女性
族裔	高加索人
形態學	上皮樣
細胞類型	上皮細胞（骨肉瘤）
生長特性	依附者

引用	U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133（Cytion 型號 300666）
生物安全等級	1
NCBI_TaxID	9606
Cellosaurus 編號	未指定（經 CRISPR 修飾的 U2OS 衍生物；親本 U2OS CVCL_0042）
存款人	艾倫伯格實驗室（EMBL）
轉基因狀態	GMO-S1：此人類骨肉瘤細胞系（U2OS-CRISPR-SNAPf-Nup133）含有透過 CRISPR 技術導入的 SNAPf-Nup133 融合蛋白，可對 Nup133 核孔蛋白進行螢光標記。該插入片段呈穩定表達。此分類僅適用於德國境內，其他地區的分類可能有所不同。

蛋白質表達	Nup133、SNAPf-tag

培養基	麥考伊 5a 培養基，含：3.0 g/L 葡萄糖，含：穩定型谷氨酰胺，含：2.0 mM 丙酮酸鈉，含：2.2 g/L NaHCO₃（Cytion 產品編號 820200a）
營養補充品	在培養基中加入 10% FBS、3.0 g/L 葡萄糖、穩定型谷氨醯胺、2.0 mM 丙酮酸鈉、2.2 g/L NaHCO₃ 以及 1% NEAA
解離試劑	Accutase
倍增時間	約 24 至 36 小時
傳代培養	從貼壁細胞中移除舊培養基，並用不含鈣和鎂的PBS洗滌細胞。T25培養瓶使用3-5毫升PBS，T75培養瓶則使用5-10毫升。接著，用 Accutase 完全覆蓋細胞，T25 培養瓶使用 1–2 毫升，T75 培養瓶則使用 2.5 毫升。將細胞於室溫下孵育 8–10 分鐘，使其脫附。孵育後，將細胞與 10 毫升培養基輕柔混合以使其重新懸浮，然後以 300xg 離心 3 分鐘。棄去上清液，將細胞重新懸浮於新鮮培養基中，並轉移至已預先加入新鮮培養基的新培養瓶中。
拆股比例	1 至 3
播種密度	1 至 3 × 10⁴ 個細胞/cm²
流體更新	每週 2 至 3 次
冷凍培養基	作為冷凍保存培養基，我們使用完全生長培養基（含 FBS）+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率，或使用 CM-1 （Cytion 型號 800100），該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑，可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
細胞解凍與培養	請確認小瓶在送達時仍處於深度冷凍狀態，因為細胞是透過乾冰運送，以確保在運輸過程中維持最佳溫度。收到後，請立即將冷凍管儲存於低於 -150°C 的溫度下，以確保細胞完整性；若需立即進行培養，則請直接進行步驟 3。若需立即進行培養，請將試管浸入含有清潔水及抗菌劑的 37°C 水浴中，並輕輕搖動 40-60 秒，直至僅剩一小塊冰塊，以迅速解凍試管。後續所有步驟均須在無菌條件下於通風櫥內進行，開啟冷凍試管前請先以 70% 乙醇消毒。小心地打開已消毒的試管，將細胞懸浮液轉移至含有 8 毫升室溫培養基的 15 毫升離心管中，並輕輕混合。將混合物以 300 x g 離心 3 分鐘以分離細胞，並小心地棄去含有殘留冷凍培養基的上清液。將細胞沉澱輕輕懸浮於 10 毫升的新鮮培養基中。若為貼壁細胞，將懸浮液分裝至兩個 T25 培養瓶中；若為懸浮培養，則將所有培養基轉移至一個 T25 培養瓶中，以促進有效的細胞相互作用與生長。請遵循既定的傳代培養程序，以持續培養和維護細胞系，確保實驗結果的可靠性。
培養環境	37°C，5% CO_₂，加濕環境。
運送條款	冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。
儲存條件	若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。

不孕症	透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。

批次編號	證書類型	日期	型號
300666-101225	分析證明書	22. Jan. 2026	300666

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一般資訊

特徵

監管數據

生物分子資料

處理方式

品質控制與分子分析

分析證明書 (CoA)