Bunky SiHa – nový pohľad na výskum rakoviny krčka maternice
Bunky SiHa sú bunky rakoviny krčka maternice, ktoré sa široko využívajú v biomedicínskom výskume. Sú vynikajúcimi hostiteľmi pre transfekciu, a preto sú vhodné na štúdium génovej expresie. Vzhľadom na ich ľudský pôvod a súvislosť s rakovinou krčka maternice sa tieto bunky využívajú hlavne v oblasti biológie rakoviny, virológie a výskumu vývoja liekov.
- Rastové médium
- Na ideálny rast buniek SiHa sa používa minimálne esenciálne médium Eagle (EMEM) obsahujúce 10 % FBS, 2 mM L-glutamín, 2,2 g/l NaHCO3 a vyvážený soľný roztok Earle (EBSS). Rôstové médium sa vymieňa 2 až 3-krát týždenne.
- Doba zdvojnásobenia
- Doba zdvojnásobenia buniek SiHa je približne 17 hodín.
- Typ rastu
- SiHa je adhezívna bunková línia.
- Úroveň biologickej bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozícii od
- Cytion — Objednajte si SiHa
Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek SiHa
Pochopenie pôvodu a všeobecných vlastností buneckej línie je kľúčové, pretože ovplyvňuje jej využitie vo vašom výskume. V tejto časti článku sa dozviete o pôvode buneckej línie SiHa, jej charakteristických vlastnostiach a oveľa viac: Čo je to rakovinová bunecka línia SiHa? Čo sú bunky SiHa HPV? Aký je pôvod buneckej línie SiHa? Aká je morfológia buniek SiHa?
- SiHa, bunková línia karcinómu krčka maternice, bola odvodená z fragmentov primárnej biopsie maternice ázijskej ženy (55 rokov) s dlaždicobunkovým karcinómom [1].
- Bunka SiHa vykazuje hypertriploidný karyotyp. Väčšina buniek má priemerný počet chromozómov v rozmedzí 69 až 72. Približne 24 % buniek však má modálny počet chromozómov 71.
- Bunky SiHa sú pozitívne na ľudský papilomavírus typu 16. Vykazujú integráciu približne 1 až 2 kópií genómu HPV na bunku [2].
- Tieto bunky rakoviny krčka maternice vykazujú epiteliálnu morfológiu.
Bunková línia SiHa: Informácie o kultivácii
Udržovanie kultúry buneckej línie nie je jednoduché, pokiaľ nepoznáte všetky kľúčové body jej kultivácie. Mali by ste vedieť: Aký je čas zdvojnásobenia buniek SiHa? Čo je kultivačné médium pre bunky SiHa? Ako sa kultivuje bunecka línia SiHa?
Kľúčové body kultivácie buniek SiHa
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia buniek SiHa je približne 17 hodín.
Adherentné alebo v suspenzii:
SiHa je adhezívna bunková línia.
Pomer subkultivácie:
Pomer subkultivácie pre bunky SiHa je 1:2 až 1:4. Pri pasážovaní sa adhezívne bunky prepláchnu 1x PBS. Pridá sa roztok Accutase a bunky sa inkubujú 8 až 10 minút pri izbovej teplote. Následne sa pridá kultivačné médium a bunky sa odstreďujú. Peleta buniek sa resuspenduje a bunky sa prelejú do novej fľaše na kultiváciu.
Rastové médium:
Na ideálny rast buniek SiHa sa používa minimálne esenciálne médium podľa Eaglea (EMEM) obsahujúce 10 % FBS, 2 mM L-glutamín, 2,2 g/l NaHCO3 a vyvážený soľný roztok podľa Earlea (EBSS). Kultivačné médium sa vymieňa 2 až 3-krát týždenne.
Podmienky kultivácie:
Bunky SiHa sa kultivujú v zvlhčenom inkubátore pri teplote 37 °C s prívodom 5 % CO₂.
Skladovanie:
Zmrazené skúmavky s bunkovou líniou SiHa z rakoviny krčka maternice sa skladujú pri teplote nižšej ako -150 °C v elektrickom mrazničke alebo v parnej fáze tekutého dusíka na dlhšie obdobie.
Proces zmrazenia a médium:
Na zmrazenie buniek SiHa sa používa zmrazovacie médium CM-1 alebo CM-ACF. Bunky sa zmrazujú metódou pomalého zmrazovania, ktorá umožňuje pokles teploty iba o 1 °C za minútu, aby sa zachovala životaschopnosť buniek.
Proces rozmrazovania:
Zmrazené bunky sa udržujú 40 až 60 sekúnd vo vodnom kúpeli s teplotou 37 °C, kým nezostane len malá zrazenina ľadu. Následne sa pridá čerstvé kultivačné médium a bunky sa odstreďujú, aby sa odstránili zložky zmrazovacieho média. Bunky sa resuspendujú a nanesú do kultivačnej fľaše na rast.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Na manipuláciu s bunkovými kultúrami SiHa a ich udržiavanie je potrebné laboratórium úrovne biologickej bezpečnosti 1.
Výhody a nevýhody buneckej línie SiHa
Rovnako ako iné ľudské karcinómové bunkové línie, aj SiHa má niektoré špecifické charakteristiky spojené s určitými výhodami a nevýhodami. V tomto článku sme rozoberali niekoľko významných z nich.
Výhody buneckej línie SiHa pre rakovinu krčka maternice
- Model rakoviny krčka maternice
- Pochádza z dlaždicobunkového karcinómu krčka maternice.
- Používa sa na štúdium mechanizmov, rastu a vývoja rakoviny krčka maternice.
- Exprimuje gény p53+ a pRB+, ktoré súvisia s opravou DNA, reguláciou bunkového cyklu a potláčaním nádorov.
- Tumorigenický potenciál
- Bunky SiHa sú tumorigenické a môžu u nahých myší vyvolať slabo diferencované epidermoidné nádory stupňa III.
- Používajú sa na in vivo výskum rakoviny a testovanie protinádorových liečebných postupov.
Nevýhody buniek SiHa
- Rýchlosť proliferácie
- Bunky SiHa sa rýchlo množia, čo vedie k nadmernému rastu.
- Vyžadujú časté pasážovanie, čo zvyšuje riziko genetickej nestability, ktorá môže v priebehu času ovplyvniť správanie buniek.
Výskumné využitie buniek SiHa
Bunka SiHa sa vo veľkej miere využíva vo výskume rakoviny krčka maternice. Niekoľko konkrétnych aplikácií tejto bunky je popísaných nižšie.
- Štúdie súvisiace s ľudským papilomavírusom (HPV): Bunky SiHa sú HPV 16-pozitívne, a preto predstavujú cenný materiál na štúdium infekcie ľudským papilomavírusom, jej molekulárnych mechanizmov a jej úlohy vo vývoji a progresi rakoviny krčka maternice. Výskumníci tiež využívajú tieto bunky na skúmanie vírusovej replikácie, integrácie a jej vplyvu na procesy v hostiteľskej bunke. V štúdii uskutočnenej v roku 2020 sa bunky SiHa použili na skúmanie úlohy onkoproteínov HPV E6/E7 pri vývoji rakoviny krčka maternice prostredníctvom ich cieleného potlačenia pomocou technológie CRISPR. Zistenia ukázali, že potlačenie génov E6/E7 viedlo k inhibícii rastu buniek SiHa a k apoptóze. Tieto vírusové gény preto môžu slúžiť ako kľúčové ciele liečby pri vývoji terapií proti rakovine krčka maternice asociovanej s HPV [3].
- Biológia rakoviny: Bunky SiHa slúžia ako neoceniteľný model na štúdium biológie rakoviny krčka maternice, vrátane vývoja rakoviny, jej progresie, metastázovania a invázie. Výskumníci využívajú tieto bunky na skúmanie genetických mutácií a základných molekulárnych dráh prispievajúcich k vývoju a rastu rakoviny krčka maternice; napríklad v jednej štúdii, ktorá využívala bunky SiHa, sa zistilo, že zvýšená expresia SEC61G (podjednotka gama translokónu SEC61) podporuje proliferáciu buniek rakoviny krčka maternice prostredníctvom aktivácie MAPK kaskády [4].
- Skríning a testovanie liekov: SiHa je široko používaná bunka rakoviny krčka maternice na hodnotenie účinnosti potenciálnych protinádorových liekov špecifických pre rakovinu krčka maternice súvisiacu s HPV. Výskumníci pomocou týchto buniek skúmajú antiproliferatívny, apoptotický a antimetastatický potenciál liekov. Napríklad v štúdii z roku 2019 sa skúmal cytotoxický potenciál extraktov z plodov Vatica diospyroides Symington Type SS na bunkovej línii rakoviny krčka maternice SiHa [5].
Bunky SiHa pre váš výskum!
Vedecké publikácie zaoberajúce sa bunkami SiHa
Niektoré významné a často citované vedecké publikácie sa zaoberajú bunkovou líniou SiHa, ktorá reprezentuje dlaždicový karcinóm krčka maternice.
Táto publikácia v časopise OncoTargets and Therapy (2019) navrhla, že prírodná zlúčenina aloe-emodín vyvoláva v bunkách rakoviny krčka maternice SiHa apoptotické účinky spojené s HPV E6/E7 a metabolizmom glukózy.
Tento článok bol uverejnený v časopise Future Journal of Pharmaceutical Sciences v roku 2022. Táto štúdia skúmala protinádorové účinky extraktu z listov rastliny Excoecaria agallocha (L.) na bunkovú líniu rakoviny krčka maternice SiHa.
Táto štúdia, uverejnená v časopise „Journal of Sol-Gel Science and Technology“ (2022), navrhla, že molekula 1,10-fenantrolínu po naviazaní na nanočastice síranu zinočnatého vykazuje významné antiproliferatívne účinky v bunkách SiHa.
Tento výskum bol uverejnený v časopise Oncology Reports v roku 2019. Štúdia odhalila, že astragalosid IV, prírodný produkt, potláča migráciu a inváziu buniek SiHa moduláciou signálnych dráh PI3K a MAPK sprostredkovaných TGF-β1.
Táto štúdia uverejnená v časopise „Biomedicine & Pharmacotherapy“ (2020) odhalila, že IFI16 (interferón-gamma indukovateľný proteín 16) reguluje gén PD-L1 prostredníctvom aktivácie signálnej dráhy STING-TBK1-NF-kB, čím podporuje rast buniek rakoviny krčka maternice SiHa.
Zdroje týkajúce sa buneckej línie SiHa: protokoly, videá a ďalšie materiály
Tu nájdete niekoľko online zdrojov venovaných bunkám SiHa.
- Transfekcia buniek SiHa: Tento vedecký článok obsahuje protokol na kultiváciu buniek SiHa z rakoviny krčka maternice a na transfekciu buniek SiHa.
Nasledujúci odkaz obsahuje informácie o kultivácii buniek SiHa.
- Bunka SiHa: Táto webová stránka obsahuje množstvo cenných údajov o bunke SiHa. Patria sem informácie o rastových médiách, podmienkach kultivácie, protokoloch pre subkultiváciu buniek SiHa a manipulácii s ich proliferatívnymi a kryokonzervovanými kultúrami.
Často kladené otázky týkajúce sa buniek karcinómu krčka maternice SiHa
Referencie
- Melzer, C., J. von der Ohe a R. Hass, Stručný prehľad: interakcia mezenchýmového stroma/kmeňových buniek s rakovinovými bunkami ponúka terapeutický potenciál. Stem cells, 2018. 36(7): s. 951–968.
- Ostrowska, K.M. a kol., Skúmanie vplyvu vysokorizikového ľudského papilomavírusu na biochemické zloženie buniek rakoviny krčka maternice pomocou vibračnej spektroskopie. Analyst, 2010. 135(12): s. 3087–3093.
- Chen, Y., a kol., Inhibícia rastu buniek rakoviny krčka maternice in vitro a in vivo prostredníctvom štiepenia mRNA génov E6/E7 ľudského papilomavírusu systémom CRISPR/Cas13a. Antiviral Research, 2020. 178: s. 104794.
- Fan, Y., et al., SEC61G podporuje proliferáciu rakoviny krčka maternice aktiváciou signálnej dráhy MAPK. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Protinádorový potenciál ovocných extraktov z Vatica diospyroides typu Symington SS a ich vplyv na programovanú bunkovú smrť bunkových línií rakoviny krčka maternice. The Scientific World Journal, 2019. 2019.