Bunky SiHa – nový pohľad na výskum rakoviny krčka maternice
Bunky SiHa sú bunky rakoviny krčka maternice, ktoré sa široko využívajú v biomedicínskom výskume. Sú vynikajúcimi hostiteľmi pre transfekciu, a preto sú vhodné na štúdium génovej expresie. Vzhľadom na ich ľudský pôvod a súvislosť s rakovinou krčka maternice sa tieto bunky využívajú hlavne v oblasti biológie rakoviny, virológie a výskumu vývoja liekov.
- Rastové médium
- Na ideálny rast buniek SiHa sa používa minimálne esenciálne médium Eagle (EMEM) obsahujúce 10 % FBS, 2 mM L-glutamín, 2,2 g/l NaHCO3 a vyvážený soľný roztok Earle (EBSS). Rôstové médium sa vymieňa 2 až 3-krát týždenne.
- Doba zdvojnásobenia
- Doba zdvojnásobenia buniek SiHa je približne 17 hodín.
- Typ rastu
- SiHa je adhezívna bunková línia.
- Úroveň biologickej bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozícii od
- Cytion — Objednajte si SiHa
Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek SiHa
Pochopenie pôvodu a všeobecných vlastností buneckej línie je kľúčové, pretože ovplyvňuje jej využitie vo vašom výskume. V tejto časti článku sa dozviete o pôvode buneckej línie SiHa, jej charakteristických vlastnostiach a oveľa viac: Čo je to rakovinová bunecka línia SiHa? Čo sú bunky SiHa HPV? Aký je pôvod buneckej línie SiHa? Aká je morfológia buniek SiHa?
- SiHa, bunková línia karcinómu krčka maternice, bola odvodená z fragmentov primárnej biopsie maternice ázijskej ženy (55 rokov) s dlaždicobunkovým karcinómom [1].
- Bunka SiHa vykazuje hypertriploidný karyotyp. Väčšina buniek má priemerný počet chromozómov v rozmedzí 69 až 72. Približne 24 % buniek však má modálny počet chromozómov 71.
- Bunky SiHa sú pozitívne na ľudský papilomavírus typu 16. Vykazujú integráciu približne 1 až 2 kópií genómu HPV na bunku [2].
- Tieto bunky rakoviny krčka maternice vykazujú epiteliálnu morfológiu.
Bunková línia SiHa: Informácie o kultivácii
Udržovanie kultúry buneckej línie nie je jednoduché, pokiaľ nepoznáte všetky kľúčové body jej kultivácie. Mali by ste vedieť: Aký je čas zdvojnásobenia buniek SiHa? Čo je kultivačné médium pre bunky SiHa? Ako sa kultivuje bunecka línia SiHa?
Kľúčové body kultivácie buniek SiHa
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia buniek SiHa je približne 17 hodín.
Adherentné alebo v suspenzii:
SiHa je adhezívna bunková línia.
Pomer subkultivácie:
Pomer subkultivácie pre bunky SiHa je 1:2 až 1:4. Pri pasážovaní sa adhezívne bunky prepláchnu 1x PBS. Pridá sa roztok Accutase a bunky sa inkubujú 8 až 10 minút pri izbovej teplote. Následne sa pridá kultivačné médium a bunky sa odstreďujú. Peleta buniek sa resuspenduje a bunky sa prelejú do novej fľaše na kultiváciu.
Rastové médium:
Na ideálny rast buniek SiHa sa používa minimálne esenciálne médium podľa Eaglea (EMEM) obsahujúce 10 % FBS, 2 mM L-glutamín, 2,2 g/l NaHCO3 a vyvážený soľný roztok podľa Earlea (EBSS). Kultivačné médium sa vymieňa 2 až 3-krát týždenne.
Podmienky kultivácie:
Bunky SiHa sa kultivujú v zvlhčenom inkubátore pri teplote 37 °C s prívodom 5 % CO₂.
Skladovanie:
Zmrazené skúmavky s bunkovou líniou SiHa z rakoviny krčka maternice sa skladujú pri teplote nižšej ako -150 °C v elektrickom mrazničke alebo v parnej fáze tekutého dusíka na dlhšie obdobie.
Proces zmrazenia a médium:
Na zmrazenie buniek SiHa sa používa zmrazovacie médium CM-1 alebo CM-ACF. Bunky sa zmrazujú metódou pomalého zmrazovania, ktorá umožňuje pokles teploty iba o 1 °C za minútu, aby sa zachovala životaschopnosť buniek.
Proces rozmrazovania:
Zmrazené bunky sa udržujú 40 až 60 sekúnd vo vodnom kúpeli s teplotou 37 °C, kým nezostane len malá zrazenina ľadu. Následne sa pridá čerstvé kultivačné médium a bunky sa odstreďujú, aby sa odstránili zložky zmrazovacieho média. Bunky sa resuspendujú a nanesú do kultivačnej fľaše na rast.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Na manipuláciu s bunkovými kultúrami SiHa a ich udržiavanie je potrebné laboratórium úrovne biologickej bezpečnosti 1.
Výhody a nevýhody buneckej línie SiHa
Rovnako ako iné ľudské karcinómové bunkové línie, aj SiHa má niektoré špecifické charakteristiky spojené s určitými výhodami a nevýhodami. V tomto článku sme rozoberali niekoľko významných z nich.
Výhody buneckej línie SiHa pre rakovinu krčka maternice
- Model rakoviny krčka maternice
- Pochádza z dlaždicobunkového karcinómu krčka maternice.
- Používa sa na štúdium mechanizmov, rastu a vývoja rakoviny krčka maternice.
- Exprimuje gény p53+ a pRB+, ktoré súvisia s opravou DNA, reguláciou bunkového cyklu a potláčaním nádorov.
- Tumorigenický potenciál
- Bunky SiHa sú tumorigenické a môžu u nahých myší vyvolať slabo diferencované epidermoidné nádory stupňa III.
- Používajú sa na in vivo výskum rakoviny a testovanie protinádorových liečebných postupov.
Nevýhody buniek SiHa
- Rýchlosť proliferácie
- Bunky SiHa sa rýchlo množia, čo vedie k nadmernému rastu.
- Vyžadujú časté pasážovanie, čo zvyšuje riziko genetickej nestability, ktorá môže v priebehu času ovplyvniť správanie buniek.
Výskumné využitie buniek SiHa
Bunka SiHa sa vo veľkej miere využíva vo výskume rakoviny krčka maternice. Niekoľko konkrétnych aplikácií tejto bunky je popísaných nižšie.
- Štúdie súvisiace s ľudským papilomavírusom (HPV): Bunky SiHa sú HPV 16-pozitívne, a preto predstavujú cenný materiál na štúdium infekcie ľudským papilomavírusom, jej molekulárnych mechanizmov a jej úlohy vo vývoji a progresi rakoviny krčka maternice. Výskumníci tiež využívajú tieto bunky na skúmanie vírusovej replikácie, integrácie a jej vplyvu na procesy v hostiteľskej bunke. V štúdii uskutočnenej v roku 2020 sa bunky SiHa použili na skúmanie úlohy onkoproteínov HPV E6/E7 pri vývoji rakoviny krčka maternice prostredníctvom ich cieleného potlačenia pomocou technológie CRISPR. Zistenia ukázali, že potlačenie génov E6/E7 viedlo k inhibícii rastu buniek SiHa a k apoptóze. Tieto vírusové gény preto môžu slúžiť ako kľúčové ciele liečby pri vývoji terapií proti rakovine krčka maternice asociovanej s HPV [3].
- Biológia rakoviny: Bunky SiHa slúžia ako neoceniteľný model na štúdium biológie rakoviny krčka maternice, vrátane vývoja rakoviny, jej progresie, metastázovania a invázie. Výskumníci využívajú tieto bunky na skúmanie genetických mutácií a základných molekulárnych dráh prispievajúcich k vývoju a rastu rakoviny krčka maternice; napríklad v jednej štúdii, ktorá využívala bunky SiHa, sa zistilo, že zvýšená expresia SEC61G (podjednotka gama translokónu SEC61) podporuje proliferáciu buniek rakoviny krčka maternice prostredníctvom aktivácie MAPK kaskády [4].
- Skríning a testovanie liekov: SiHa je široko používaná bunka rakoviny krčka maternice na hodnotenie účinnosti potenciálnych protinádorových liekov špecifických pre rakovinu krčka maternice súvisiacu s HPV. Výskumníci pomocou týchto buniek skúmajú antiproliferatívny, apoptotický a antimetastatický potenciál liekov. Napríklad v štúdii z roku 2019 sa skúmal cytotoxický potenciál extraktov z plodov Vatica diospyroides Symington Type SS na bunkovej línii rakoviny krčka maternice SiHa [5].
Bunky SiHa pre váš výskum!
Vedecké publikácie zaoberajúce sa bunkami SiHa
Niektoré významné a často citované vedecké publikácie sa zaoberajú bunkovou líniou SiHa, ktorá reprezentuje dlaždicový karcinóm krčka maternice.
Táto publikácia v časopise OncoTargets and Therapy (2019) navrhla, že prírodná zlúčenina aloe-emodín vyvoláva v bunkách rakoviny krčka maternice SiHa apoptotické účinky spojené s HPV E6/E7 a metabolizmom glukózy.
Tento článok bol uverejnený v časopise Future Journal of Pharmaceutical Sciences v roku 2022. Táto štúdia skúmala protinádorové účinky extraktu z listov rastliny Excoecaria agallocha (L.) na bunkovú líniu rakoviny krčka maternice SiHa.
Táto štúdia, uverejnená v časopise „Journal of Sol-Gel Science and Technology“ (2022), navrhla, že molekula 1,10-fenantrolínu po naviazaní na nanočastice síranu zinočnatého vykazuje významné antiproliferatívne účinky v bunkách SiHa.
Tento výskum bol uverejnený v časopise Oncology Reports v roku 2019. Štúdia odhalila, že astragalosid IV, prírodný produkt, potláča migráciu a inváziu buniek SiHa moduláciou signálnych dráh PI3K a MAPK sprostredkovaných TGF-β1.
Táto štúdia uverejnená v časopise „Biomedicine & Pharmacotherapy“ (2020) odhalila, že IFI16 (interferón-gamma indukovateľný proteín 16) reguluje gén PD-L1 prostredníctvom aktivácie signálnej dráhy STING-TBK1-NF-kB, čím podporuje rast buniek rakoviny krčka maternice SiHa.
Zdroje týkajúce sa buneckej línie SiHa: protokoly, videá a ďalšie materiály
Tu nájdete niekoľko online zdrojov venovaných bunkám SiHa.
- Transfekcia buniek SiHa: Tento vedecký článok obsahuje protokol na kultiváciu buniek SiHa z rakoviny krčka maternice a na transfekciu buniek SiHa.
Nasledujúci odkaz obsahuje informácie o kultivácii buniek SiHa.
- Bunka SiHa: Táto webová stránka obsahuje množstvo cenných údajov o bunke SiHa. Patria sem informácie o rastových médiách, podmienkach kultivácie, protokoloch pre subkultiváciu buniek SiHa a manipulácii s ich proliferatívnymi a kryokonzervovanými kultúrami.
Často kladené otázky týkajúce sa buniek karcinómu krčka maternice SiHa
Bunky SiHa sú ľudskou nádorovou bunkovou líniou odvodenou od skvamózneho karcinómu krčka maternice. Vo veľkej miere sa používajú vo výskume karcinómov krčka maternice, najmä v štúdiách týkajúcich sa ľudského papilomavírusu typu 16 (HPV-16), o ktorom je známe, že zohráva kľúčovú úlohu v patogenéze rakoviny krčka maternice.
V bunkách SiHa sa DNA HPV-16 zvyčajne integruje do chromozómov hostiteľskej bunky. Miesta chromozomálnej integrácie HPV môžu byť rozhodujúce pre pochopenie progresie a rezistencie na liečbu karcinómu krčka maternice.
Áno, bunky SiHa sú dôležitou súčasťou panelu buniek rakoviny krčka maternice, ktorý sa využíva na biologickú charakterizáciu nádorových buniek, skúmanie účinkov chemoterapeutík a vývoj nových liekov pre vedecký výskum.
Absolútne. Bunky SiHa, ktoré obsahujú integrovanú DNA HPV, sú neoceniteľné pre in situ hybridizáciu a iné molekulárno-biologické techniky na štúdium úlohy HPV pri vzniku novotvarov krčka maternice a potenciálneho zvýšenia účinkov kurkumínu na liečbu rakoviny.
Bunky SiHa sú nádorové u imunodeficientných myší, čo z nich robí vhodný model na štúdium patogénnosti karcinómu krčka maternice a in vivo účinkov potenciálnych terapeutík.
Odkazy na bunky SiHa možno nájsť vo vedeckej literatúre v časopisoch ako Cancer Research (Cancer Res), Biochemistry and Cell Biology, Journal of Cellular Physiology a ďalších. Poskytujú podrobné informácie o použití buniek SiHa v kontexte štúdií genómu rakoviny, fenotypizácie a skúmania funkcií génov.
Genetický profil buniek SiHa, vrátane expresie viacerých génov a získania CDV, prispieva ku komplexnému pochopeniu etiológie karcinómu krčka maternice a k vývoju cielenej liečby.
Bunky SiHa sa udržiavajú v primárnej bunkovej kultúre, pričom sa dodržiavajú špecifické podmienky rastu a požiadavky na médium, aby sa zachovali ich vlastnosti a funkčnosť na výskumné účely.
Referencie
- Melzer, C., J. von der Ohe a R. Hass, Stručný prehľad: interakcia mezenchýmového stroma/kmeňových buniek s rakovinovými bunkami ponúka terapeutický potenciál. Stem cells, 2018. 36(7): s. 951–968.
- Ostrowska, K.M. a kol., Skúmanie vplyvu vysokorizikového ľudského papilomavírusu na biochemické zloženie buniek rakoviny krčka maternice pomocou vibračnej spektroskopie. Analyst, 2010. 135(12): s. 3087–3093.
- Chen, Y., a kol., Inhibícia rastu buniek rakoviny krčka maternice in vitro a in vivo prostredníctvom štiepenia mRNA génov E6/E7 ľudského papilomavírusu systémom CRISPR/Cas13a. Antiviral Research, 2020. 178: s. 104794.
- Fan, Y., et al., SEC61G podporuje proliferáciu rakoviny krčka maternice aktiváciou signálnej dráhy MAPK. Disease Markers, 2022. 2022.
- Chothiphirat, A., et al., Protinádorový potenciál ovocných extraktov z Vatica diospyroides typu Symington SS a ich vplyv na programovanú bunkovú smrť bunkových línií rakoviny krčka maternice. The Scientific World Journal, 2019. 2019.